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.2021年2月；23(2):135.
doi:10.3892/mmr.2020.11774。 Epub 2020年12月14日。

GAS5通过miR‑221‑3p/p27轴相关自噬调节糖尿病心肌病

陈德智 1, 张敏（音） 1
附属公司

GAS5通过miR‑221‑3p/p27轴相关自噬调节糖尿病心肌病

陈德智等。 分子医学代表. 2021年2月.

摘要

糖尿病心肌病（DCM）是由糖尿病引起的代谢损伤引起的心血管系统主要并发症之一。本研究探讨了长非编码RNA在糖尿病（DM）心脏病变中的自噬相关调节机制。心肌内注射链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠，高浓度葡萄糖（HG）处理的H9C2细胞感染生长抑制特异性转录物5（GAS5）负载的AAV‑9腺病毒。HG‑处理的H9C2细胞也接受小干扰RNA‑p27的转染。苏木精、伊红和Masson染色评估心肌组织学变化。定量PCR检测GAS5、纤维化标记物（I型胶原、III型胶原、TGF‑β和结缔组织生长因子）和microRNA（miR）‑221‑3p的表达水平。Western blotting测定自噬相关蛋白[微管相关蛋白1A/1B轻链3B（LC3B）I、LC3B II和p62]和p27的表达水平。Targetscan7.2用于预测miR‑221‑3和p27之间的结合位点。双荧光素酶报告子分析了miR‑221‑3p对GAS5和p27荧光素酶活性的影响。GAS5下调STZ‑诱导的糖尿病大鼠的高血糖浓度，但其在HG‑处理的H9C2细胞和糖尿病模型大鼠心肌中的表达水平均降低。GAS5减轻了DM模型大鼠的组织学异常，并逆转了降低的LC3B II和增加的p62表达水平。miR-221-3p模拟物抑制GAS5野生型（WT）和p27-WT的活性。在HG处理的H9C2和糖尿病心肌中，miR-221-3p的表达水平均增加。p27表达水平在HG后下降，但GAS5上调。sip27消除了GAS5对DCM的影响。GAS5通过miR‑221‑3p/p27轴促进DCM中的心肌细胞自噬以减轻心肌损伤。

关键词：生长抑制特异性转录物5；糖尿病；糖尿病心肌病；自噬；细胞凋亡；微RNA‑221‑3p；第27页。

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数字

图1。
图1。
STZ诱导的糖尿病大鼠心肌和HG处理的H9C2细胞中GAS5表达水平降低。定量PCR分析GAS5表达水平。GAPDH担任内部控制***与对照组相比，P<0.001。GAS5，生长抑制特异性转录物5；STZ，链脲佐菌素；HG，高浓度葡萄糖；糖尿病；lncRNA，长的非编码RNA。
图2。
图2。
GAS5改善糖尿病大鼠的组织学异常。（A） 苏木精-伊红染色观察STZ诱导的糖尿病心肌的组织学异常。（B） Masson染色评估STZ诱导的糖尿病心肌纤维化。（C） 定量PCR检测纤维化标志物（I型胶原、III型胶原、TGF-β和CTGF）的表达水平。GAPDH作为内部参考***与对照组相比，P<0.001；^^^P<0.001 vs.DM+NC.GAS5，生长抑制特异性转录物5；STZ，链脲佐菌素；结缔组织生长因子；糖尿病；NC，阴性对照。
图3。
图3。
GAS5逆转糖尿病大鼠心肌自噬抑制。Western blotting检测糖尿病大鼠心肌中p62、LC3B I和LC3B II的蛋白表达水平。使用GAPDH作为内部控制，并计算LC3B II/LC3B I的比率***与对照组相比，P＜0.001；^^^P<0.001 vs.DM+NC.GAS5，生长抑制特异性转录物5；LC3B，微管相关蛋白1A/1B轻链3B；糖尿病；NC，阴性对照。
图4。
图4。
GAS5竞争性结合miR-221-3p，miR-221-3在糖尿病大鼠心肌和HG处理的H9C2细胞中增加，以增加HG处理H9C2的细胞中的p27。（A） starBase预测了GAS5和miR-221-3p之间的结合位点。（B） 双荧光素酶报告分析评估miR-221-3p模拟物对GAS5活性的影响。（C） 通过定量PCR检测糖尿病大鼠心肌和HG处理的H9C2细胞中miR-221-3p的表达水平。U6被用作参考基因。（D） Targetscan7.2预测miR-221-3p和p27之间的结合位点。（E） 双荧光素酶报告子分析了miR-221-3p模拟物对p27活性的影响。（F） Western blotting检测了HG处理的H9C2细胞中p27的蛋白表达水平。GAPDH被用作参考基因***与对照组相比，P<0.001；^^^与模拟控制相比，P<0.001；###与HG+NC相比，P<0.001；&&&与HG+GAS5相比，P<0.001。GAS5，生长抑制特异性转录本；miR，microRNA；HG，高浓度葡萄糖；NC，阴性对照；WT，野生型；MUT，突变体；UTR，非翻译区；si，小干扰。
图5。
图5。
sip27逆转了GAS5对HG处理的H9C2细胞中HG抑制的自噬的促进作用。Western blotting评估HG处理的H9C2细胞中p62、LC3B I和LC3B II的蛋白表达水平。GAPDH被用作内部参考基因，并计算LC3B II/LC3B I的比率***与对照组相比，P<0.001；###与HG+NC相比，P<0.001；&&P<0.01和&&&与HG+GAS5相比，P＜0.001。si，小干扰；生长停滞特异性转录物5；高浓度葡萄糖；LC3B，微管相关蛋白1A/1B轻链3B；NC，阴性对照。
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