跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息,确保你在联邦政府政府网站。

HTTP服务器

该站点是安全的。
这个https(https)://确保您连接到官方网站,并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2021年2月;23(2):94.
doi:10.3892/mmr.2020.11733。 Epub 2020年12月10日。

miR‑576‑5p通过靶向Wnt5a‑介导的Wnt/β‑catenin信号通路促进结直肠癌上皮细胞向间质细胞的转化

附属公司

miR‑576‑5p通过靶向Wnt5a‑介导的Wnt/β‑catenin信号通路促进结直肠癌上皮细胞向间质细胞的转化

罗佳琳等。 分子医学代表. 2021年2月.

摘要

结直肠癌(CRC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一,也是第三种最常见的癌症,是癌症相关死亡率的第四大原因。据报道,小RNA(miR)‑576‑5p在CRC患者中高度表达;然而,其生物学作用尚不清楚。因此,本研究旨在研究miR‑576‑5p在CRC细胞系SW480中的生物学作用和潜在机制。使用MTT法分析miR‑576‑5p模拟物或抑制剂转染SW480细胞后的存活率。分别进行伤口愈合和Transwell测定以确定细胞迁移和侵袭能力。使用双荧光素酶报告分析验证miR‑576‑5p和Wnt5a之间的预测结合位点。采用逆转录定量PCR和western blotting分析miR‑576‑5p、E‑cadherin、N‑cadhelin、vimentin、Snail1、Wnt5a、β‑catenin、c‑myc、cyclin D1和p/t‑c‑Jun的表达水平。利用生物信息学分析,与正常组织相比,miR‑576‑5p不仅在肿瘤组织中高表达,与NCM460细胞相比,在CRC细胞中也高表达。此外,抑制miR‑576‑5p的表达显著降低了SW480细胞的存活率、迁移和侵袭能力,并抑制了上皮-间充质转化(EMT)。此外,miR‑576‑5p可以与Wnt5a相互作用,调节Wnt5a的表达水平,从而影响Wnt/β‑catenin信号的活性。救援实验的结果进一步证明,miR‑576‑5p过度表达对细胞转移和EMT的影响可通过Wnt5a过度表达或用XAV‑939(Wnt/β‑catenin信号通路的抑制剂)治疗而逆转。总之,本研究的结果表明,抑制miR‑576‑5p可能通过靶向Wnt5a和调节Wnt5a-介导的Wnt/β‑catenin信号通路抑制SW480细胞转移和EMT,为CRC的治疗提供潜在的治疗靶点。

关键词:大肠癌;miR‑576‑5p;Wnt5a;上皮-间充质转化;Wnt/β‑catenin信号转导。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
miR-576-5p在CRC中上调,抑制miR-575-5p抑制细胞活力、迁移和侵袭能力。(A) 从癌症基因组图谱数据库检索459例CRC样本和8例正常样本的miR-576-5p表达水平*P<0.05。(B) 用RT-qPCR检测CRC细胞系HCT116、SW620和SW480以及人正常结肠上皮细胞系NCM460中miR-576-5p的水平***与NCM460相比,P<0.001。(C) 用miR-576-5p抑制剂转染SW480细胞,用RT-qPCR检测miR-576-5p水平。(D) MTT法测定细胞活力。(E和F)细胞迁移能力通过伤口愈合试验测定(放大倍率,×100)。(G和H)细胞侵袭能力采用Transwell分析法测定(放大倍数×100)***P<0.001与抗miR-NC.miR,microRNA的比较;NC,阴性对照;结直肠癌;RT-qPCR,逆转录定量PCR。
图2。
图2。
miR-576-5p的抑制降低了上皮向间充质的转化。在miR-576-5p下调后,用western blotting检测E-cadherin、vimentin、N-cadherin和蜗牛的蛋白表达**与抗miR-NC.miR,microRNA相比,P<0.01和***P<0.001;NC,阴性对照。
图3。
图3。
miR-576-5p靶向Wnt5a并调控β-catenin信号通路。(A) TargetScan预测了miR-576-5p和Wnt5a的假定结合位点。(B) 进行双荧光素酶报告分析以确认预测的结合位点。(C) 用miR-576-5p模拟物转染SW480细胞,并使用RT-qPCR测定miR-576-5p水平。(D和E)miR-576-5p上调或下调,分别用RTq-PCR和western blotting检测Wnt5a的mRNA水平和蛋白表达。(F) 用western blotting检测β-catenin、c-myc、cyclin D1、p-c-Jun和c-Jun的蛋白表达*P<0.05,**P<0.01和***P<0.001。miR,microRNA;NC,阴性对照;结直肠癌;RT-qPCR、反转录定量PCR;MUT,突变体;WT,野生型;p、 磷酸化。
图4。
图4。
Wnt5a的过度表达逆转了miR-576-5p对SW480细胞的作用。用miR-576-5p模拟物转染SW480细胞,以过度表达miR-575-5p,有或无Wnt5a过度表达或用Wnt/β-catenin信号抑制剂XAV-939治疗。(A) 转染pcDNA3.1-Wnt5a后,用逆转录定量PCR检测Wnt5amRNA水平。(B) MTT法测定细胞活力。(C和E)细胞迁移能力通过伤口愈合试验测定(放大倍率,×100)。(D和F)使用Transwell分析法测定细胞侵袭能力(放大倍数,×100)**P<0.01和***P<0.001。miR,microRNA;NC,阴性对照。
图5。
图5。
miR-576-5p通过靶向Wnt5a调节EMT。用miR-576-5p模拟物转染SW480细胞以过度表达miR-575-5p,有或没有Wnt5a过度表达或XAV-939治疗。用蛋白质印迹法检测不同组E-钙粘蛋白、波形蛋白、N-钙粘蛋白和蜗牛的蛋白质表达*P<0.05,**P<0.01和***P<0.001。miR,microRNA;NC,阴性对照。
图6。
图6。
miR-576-5p通过靶向Wnt5a激活Wnt/β-catenin信号。用miR-576-5p模拟物转染SW480细胞以过度表达miR-575-5p,有或没有Wnt5a过度表达或XAV-939治疗。用western blotting检测β-catenin、c-myc、cyclin D1、p-c-Jun和c-Jun的蛋白表达*P<0.05,**P<0.01和***P<0.001。miR,microRNA;NC,阴性对照;p、 磷酸化。

类似文章

引用人

工具书类

    1. Siegel RL,Miller KD,Jemal A.癌症统计,2015。CA癌症临床杂志。2015;65:5–29. doi:10.3322/caac.21254。-内政部-公共医学
    1. Lu CW、ZhouDDXieTHaoJ L、Pant OP、Lu CB、Liu XF。HOXAll反义长非编码RNA(HOXAll-AS):一种有望用于人类癌症的lncRNA。癌症医学,2018年;7:3792–3799. doi:10.1002/cam4.1571。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. McArdle CS,Hole DJ。结直肠癌手术后的结果:调整病例数和剥夺后医院的分析。英国癌症杂志。2002;86:331–335. doi:10.1038/sj.bjc.6600120。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Holm M、Saraswat M、JoenvääräS、Ristimäki A、Haglund C、Renkonen r。具有不同C反应蛋白水平和5年生存时间的结直肠癌患者可以通过定量血清蛋白质组学进行区分。公共科学图书馆一号。2018;13:e0195354。doi:10.1371/journal.pone.0195354。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Bartel博士。微RNA:基因组学、生物发生、机制和功能。单元格。2004;116:281–297. doi:10.1016/S0092-8674(04)00045-5。-内政部-公共医学