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.2021年1月；23(1):54.
doi:10.3892/mmr.20.11692。 Epub 2020年11月17日。

小RNA‑744‑5p在结直肠癌中下调，并靶向SEPT2以抑制恶性表型

张伟（音译） 1, 廖凯 1, 刘东宁 2
附属公司

小RNA‑744‑5p在结直肠癌中下调，并靶向SEPT2以抑制恶性表型

张伟（音译）等。 分子医学代表. 2021年1月.

摘要

微RNA（miR）‑744‑5p在多种癌症的进展中起着关键作用；然而，miR‑744‑5p在结直肠癌（CRC）中的功能尚不清楚。在本研究中，分析了miR‑744‑5p对CRC进展的影响，并研究了其相关机制。研究表明，miR‑744‑5p在CRC组织和细胞系中经常下调。miR-744‑5p的过表达显著抑制CRC细胞的增殖、集落形成并促进细胞凋亡。生物信息学分析显示Septin 2（SEPT2）是miR‑744‑5p的潜在靶点。miR‑744‑5p结合SEPT2的3'‑非翻译区（UTR），降低CRC细胞SEPT2水平。在CRC组织中，miR‑744‑5p的表达与SEPT2呈负相关。SEPT2的过度表达抵消了miR‑744‑5p对CRC细胞增殖和凋亡的抑制作用。总的来说，这些数据通过靶向SEPT2证明了miR‑744‑5p的功能机制，这表明miR‑的744-5p是CRC患者治疗的潜在靶点。

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数字

图1。
图1。
miR-744-5p在CRC中下调。（A） 采用RT-qPCR检测miR-744-5p在配对CRC组织和邻近正常组织中的表达。（B） 使用TCGA-COAD数据库预测miR-744-5p在CRC组织和正常组织中的表达。（C） 采用RT-qPCR方法比较CRC细胞系和正常CCD-18Co细胞中miR-744-5p的水平***P<0.001。结直肠癌；miR、microRNA、RT-qPCR、逆转录定量PCR。
图2。
图2。
miR-744-5p的过度表达抑制CRC细胞的增殖。（A） 在转染miR-744-5p模拟物或miR-NC的CRC细胞中，miR-744~5p的相对表达。（B和C）进行CCK-8分析，以确定表达miR-7445p模拟物和miR-NC CRC细胞的增殖。（D）miR-744.5p的过度表达显著降低HCT116和SW480细胞的集落形成。（E） 与表达miR-NC的细胞相比，转染miR-744-5p增加了CRC细胞的凋亡。***P<0.001。结直肠癌；miR，microRNA；miR-NC，microRNA控制；CCK-8，细胞计数试剂盒-8。
图3。
图3。
SEPT2是miR-744-5p的靶点。（A） miR-744-5p在SEPT2的3'-UTR的预测结合位点。（B和C）表达miR-744-5p和SEPT2的WT或MT 3'-UTR的CRC细胞的荧光素酶活性。（D） 转染miR-744-5p模拟物或miR-NC的CRC细胞中SEPT2的mRNA水平***P<0.001。结直肠癌；miR，microRNA；miR-NC，micRNA控制；SEPT2，septin 2；WT，野生型；MT，突变型。
图4。
图4。
SEPT2在大肠癌组织中高表达。（A） RT-qPCR检测大肠癌组织和配对正常组织SEPT2 mRNA水平。（B） 通过RT-qPCR比较SEPT2在CRC细胞系和正常CCD-18Co细胞中的表达。（C） 通过Spearman相关性检验确定CRC组织中SEPT2和miR-744-5p的表达之间的相关性***P<0.001。结直肠癌；miR、microRNA、RT-qPCR、逆转录定量PCR；9月2日。
图5。
图5。
SEPT2的恢复减弱了miR-744-5p在大肠癌中的抑制作用。（A） 通过对抗Flag抗体的western blotting证实了Flag-SEPT2的转染。（B和C）SEPT2的过度表达显著减弱了miR-744-5p调节CRC细胞增殖的抑制作用。（D） SEPT2的再导入逆转了miR-744-5p诱导的CRC细胞凋亡*P<0.05**P＜0.01***P<0.001。结直肠癌；miR，microRNA；9月2日。
图6。
图6。
miR-744-5p水平与其他可能靶点之间的相关性。（A和B）用TCGA-COAD数据库评估CRC组织和正常组织中NFIX和PAX2的表达。用miR-NC或miR-744-5p模拟物转染（C和D）HCT116和SW480细胞，RT-qPCR检测NFIX和PAX2的mRNA丰度。（E和F）利用TCGA-COAD数据库评估HNRNPC和c-Myc在CRC组织和正常组织中的表达。（G和H）使用表达miR-NC或miR-744-5p模拟物的CRC细胞，通过RT-qPCR检测HNRNPC和c-Myc的mRNA水平。（I和J）分别用Spearman相关检验测定大肠癌组织中miR-744-5p的表达与HNRNPC、c-Myc的相关性**P＜0.01***P<0.001。结直肠癌；miR，microRNA；RT-qPCR、逆转录定量PCR；NFIX，核因子I X；PAX2，配对盒基因2；异质核核糖核蛋白C；miR-NC，micRNA控制；Ns，无意义。
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