跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2021年3月；28(3):1026-1040.
doi:10.1038/s41418-020-00635-5。 Epub 2020年10月20日。

CHIP-介导的CIB1泛素化调节肺腺癌上皮间质转化与肿瘤转移

刘元奇 # 1 2, 周燕武 # 1 2, 张鹏飞 三, 李希哲 1 2, 段朝军 4 5, 张春芳 6 7 8
附属公司

CHIP-介导的CIB1泛素化调节肺腺癌上皮间质转化与肿瘤转移

刘元奇等。 细胞死亡差异. 2021年3月.

摘要

CIB1是钙调素的同源物，调节细胞粘附、迁移和分化。它被认为是许多肿瘤细胞中的癌基因；然而，其在肺腺癌（LAC）中的作用尚未研究。本研究采用免疫组织化学方法检测CIB1在LAC组织和邻近正常组织中的表达水平，并分析CIB1表达与患者临床病理特征的关系。在体内外测定了CIB1对LAC细胞上皮-间充质转化（EMT）、迁移和转移的影响。使用电喷雾质谱（LS-MS）鉴定与CIB1相互作用的蛋白质，并在以下分析中选择CHIP。热休克蛋白70相互作用蛋白（CHIP）的羧基末端是一种泛素E3连接酶。我们表明，CHIP可以通过促进CIB1的多泛素化及其随后的蛋白酶体降解来降解CIB1。此外，CIB1的赖氨酸残基10和65是CIB1的泛素化位点。此外，CHIP介导的CIB1下调对抑制LAC的转移和迁移至关重要。这些结果表明，CHIP介导的CIB1泛素化可以调节LAC的上皮间质和肿瘤转移。

PubMed免责声明

利益冲突声明

提交人声明他们没有利益冲突。

数字

图1
图1。CIB1在LAC组织和细胞系中经常上调，与不良的临床病理特征和预后相关。
A类使用ONCOMINE数据库对两种不同数据中的CIB1水平进行代表性统计分析(网址：www.oncomine.org). 过滤数据以显示与正常组织（T：肿瘤，N：正常组织）相比，LAC组织中CIB1的上调。a： 侯龙统计；b： Landi Lung统计。B使用抗CIB1抗体对正常和LAC组织的代表性免疫组织化学染色图像：a，b：正常肺组织中CIB1的阴性表达；c、 d：CIB1在肺腺癌中呈阴性表达；e、 f：CIB1在肺腺癌中弱阳性表达；g、 h：CIB1在肺腺癌中中度阳性表达；i、 j：CIB1在肺腺癌中的强阳性表达；。C类与60例患者正常组织相比，LAC肿瘤组织中CIB1的相对mRNA表达水平。D类定量RT-PCR结果显示CIB1在5个LAC细胞系和正常支气管细胞系中的表达水平。E类Western blots结果显示CIB1在5个LAC细胞系和正常支气管细胞系中的表达水平。F类,G公司转移性或晚期TNM期LAC肿瘤的CIB1表达水平高于非转移性或早期TNM期的LAC肿瘤。H（H）,我Kaplan–Meier分析表明，CIB1表达水平较高的LAC患者的5年总生存期和无病生存期明显短于CIB1表达程度较低的患者*P（P） < 0.05; **P（P） < 0.01***P（P） < 0.001; HR，危害比。
图2
图2。CIB1促进LAC迁移能力、转移能力，并通过AKT途径诱导EMT。
A类,B使用CIB1预调节A549/H1299细胞的Transwell分析的代表性图像和量化。C类,D类使用抗CIB1转染H1437/PC-9细胞的Transwell的代表性图像和量化。E类使用CIB1/抗CIB1转染的LAC细胞定量伤口愈合分析。F类Western blot分析显示CIB1/抗CIB1转染的LAC细胞中AKT（pan）、p-AKT、E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白和波形蛋白蛋白水平。用5 24μM MK2206 小时*P（P） < 0.05 vs阴性对照（NC）组**P（P） < 0.01 vs NC组***P（P） < 0.001 vs NC组。
图3
图3。CHIP与CIB1相互作用，降低CIB1蛋白水平。
CIB1和CHIP特别相互作用。A类与IgG（左车道）或CIB1（右车道）结合的蛋白质的SDS-PAGE凝胶。蛋白质标记代表（从上到下）：170、130、100、70（红色）、55、40、35、25、15/10 千帕。BPC-9细胞中CIB1和CHIP的内源性相互作用。C类将PC-9细胞瞬时转染36 用CHIP质粒和细胞裂解物用指示的抗体进行免疫印迹。D类HEK293细胞瞬时转染36 h，用Flag-CIB1和Myc-CHIP免疫印迹细胞裂解物。E类使用抗CHIP和抗CIB1抗体的LAC组织的代表性免疫组织化学染色图像。黑色方块中的区域在右侧滑动面板中被放大。F类LAC组织中CIB1和CHIP表达的Pearson分析相关性(第页 = −0.3582,P（P） = 0.0049)G公司用Flag-CIB1（1）转染HEK293细胞 μg）和不同浓度的Myc-CHIP质粒（0、0.2、0.5和1 μg）。36岁之后 h、 用抗Flag、抗Myc和抗Tublin抗体对细胞裂解物进行免疫印迹。H（H）PC-9和A549细胞中CHIP（绿色）和CIB1（红色）免疫染色的典型共焦图像。比例尺，50 微米。我用40 μg/ml环己酰亚胺用于指定时间，细胞裂解物用指定抗体进行免疫印迹。J型HEK293细胞转染36 h单独用Flag-CIB1或与Myc CHIP一起用MG-132处理（10 μM）或leupeptin（100 μM）用于4 h.用所示抗体通过western印迹分析细胞裂解物。
图4
图4。CHIP促进CIB1的K48连锁多泛素化。
A类用CHIP质粒转染PC-9 36 h.用抗CIB1抗体免疫沉淀细胞提取物，然后用抗泛素抗体免疫印迹。B用HA-ubiquitin、Flag-CIB1和Myc-CHIP转染HEK293细胞。细胞裂解物用抗HA抗体免疫沉淀，然后用抗标记抗体免疫印迹。C类用CHIP或CHIP-ΔUbox质粒转染PC-9细胞。细胞提取物用抗泛素抗体免疫沉淀，然后用抗CIB1抗体免疫印迹。D类用Flag-CIB1、HA-ubiquitin、Myc-CHIP或Myc-CHIP-ΔUbox转染HEK293细胞。变性细胞裂解物用抗HA抗体免疫沉淀，然后用Flag抗体免疫印迹。E类如有规定，纯化的E1、E2、泛素、CHIP和CIB1蛋白与体外泛素化缓冲液孵育。反应样品通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析，然后用所示抗体进行银染或免疫印迹。F类HEK293细胞转染36 h含有Flag-CIB1、Myc-CHIP、HA-Ubiquitin或HA-K48R-Ubiquitin或者HA-K63R-ubiquetin。细胞提取物用抗HA抗体免疫沉淀，然后用抗Flag抗体免疫印迹。
图5
图5。CIB1的多个K残基被CHIP多泛素化。
A类用HA泛素和Flag-CIB1及其相应的突变质粒共转染HEK293细胞36 h.用HA抗体对细胞裂解物进行免疫沉淀，然后进行Flag免疫印迹。B将HA-ubiquitin与HA-ubi、Flag-CIB1或Flag-K10R-CIB1或Flag-GK65R-CIB1或者Flag-K10R+K65R-CID1共同转染HEK293细胞。细胞裂解物用HA抗体进行免疫沉淀，然后进行Flag免疫印迹。C类HEK293细胞与Flag-CIB1、Flag-K10R-CIB1、Flag-G65R-CIB1，Flag-K10R+K65R-CIB2和Myc-CHIP共转染。细胞裂解物用MYC、Flag和α-Tublin抗体进行免疫印迹分析。D类计算模拟结果显示泛素在CIB1上有多个结合位点。红色区域是CIB1的结合位点。
图6
图6。CHIP上调可减轻CIB1诱导的LAC迁移能力和体外转移能力。
A类,B使用转染A549/H1299细胞的Transwell分析的代表性图像和量化。C类,D类使用转染的A549/H1299细胞对伤口愈合分析进行量化。E类Western blot分析显示CIB1增强了AKT和EMT的磷酸化。CHIP的恢复减弱了LAC细胞中的这种升高。
图7
图7。CHIP上调可减轻CIB1诱导的LAC迁移能力和体内转移能力。
A类代表性荧光素酶图像和静脉转移试验中肺部平均荧光素素酶强度的量化。B,C类静脉转移试验中小鼠肺部转移瘤结节的代表性照片和量化。D类使用抗CIB1、抗E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白抗体对肺组织进行代表性免疫组织化学染色。E类CHIP-介导的CIB1泛素化通过AKT途径调节肺腺癌上皮-间质和肿瘤转移*P（P） < 0.05 vs阴性对照（NC）组**P（P） < 0.01 vs NC组。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Chen W，Zheng R，Baade PD，Zhang S，Zeng H，Bray F，et al.中国癌症统计，2015。CA：癌症临床杂志。2016;66:115–32.-公共医学
    1. 周川。中国肺癌分子流行病学：近期趋势。Transl肺癌研究2014；3:270.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Siegel R，Ma J，Zou Z，Jemal A.癌症统计，2014。CA癌症临床杂志。2014;64:9–29.-公共医学
    1. Naik UP，Patel PM，Parise LV.与整合素相互作用的新型钙结合蛋白的鉴定？IIb细胞质结构域。生物化学杂志。1997;272:4651–4.-公共医学
    1. Freeman TC，Jr，Black JL，Bray HG，Dagliyan O，Wu YI，Tripathy A，等。钙和整合素结合蛋白1（CIB1）的新型整合素配合物的鉴定：CIB1混杂的结构和热力学基础。生物化学。2013;52:7082–90..-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语