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.2021;11(3):725-738.
doi:10.1016/j.jcmgh.2020.10.008。 Epub 2020年10月17日。

胰腺腺泡细胞内缺乏内质网乙酰辅酶A输入导致慢性胰腺炎

附属公司

胰腺腺泡细胞内缺乏内质网乙酰辅酶A输入导致慢性胰腺炎

米歇尔·库利等。 细胞分子胃肠肝素. 2021.

摘要

背景和目标:维持内质网(ER)蛋白质平衡对胰腺腺泡细胞功能至关重要。在严重内质网应激条件下,致病性未折叠蛋白反应通路的激活在胰腺炎的发生和发展中起着重要作用。然而,干扰ER相关翻译后蛋白修饰对胰腺结局的影响尚不清楚。在此,我们研究了ER乙酰辅酶A转运体AT-1在胰腺稳态中的作用。

方法:我们使用了AT-1S113R型/+亚形态小鼠模型,并产生诱导型、腺泡特异性、AT-1敲除小鼠模型,并进行组织学和生化分析,以探讨AT-1缺失对腺泡细胞生理学的影响。

结果:我们发现,在急性和慢性胰腺炎期间,AT-1表达显著下调。此外,腺泡细胞中AT-1的腺泡特异性缺失导致慢性内质网应激,表现为剪接的x-box结合蛋白1和蛋白激酶R-like ER激酶途径的激活,导致自发性轻/中度慢性胰腺炎,表现为细胞内胰蛋白酶积聚、免疫细胞浸润和纤维化。在AT-1模型中诱导急慢性胰腺炎导致腺泡细胞丢失和高兴萎缩。

结论:这些结果表明,AT-1在胰腺腺泡细胞稳态、未折叠蛋白反应中起着关键作用,并且AT-1功能的紊乱会导致胰腺疾病。

关键词:AT-1;内质网应激;未折叠蛋白质反应。

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数字

无
图形摘要
图1
图1
AT-1减少与胰腺炎相关。经生理盐水(SAL)或CER处理的C57BL/6 WT小鼠胰腺中AT-1 mRNA的表达(一个)诱导AP或(B类)CP(C类)用0 pmol/L、3 pmol/L(生理)或100 nmol/L(超生理)CCK-8处理的WT小鼠腺泡中AT-1 mRNA的表达。(D类)WT和低形态AT-1胰腺组织的电镜观察S113R型/+2个月龄和4个月龄时的胰腺。(E类)WT和AT-1中1型胶原(绿色)和肌动蛋白(紫色)的免疫荧光S113R型/+胰腺切片。数据为平均值±SE,n=3–5。**P(P)< .01. 平均值的统计比较由(一个B类)未配对双尾学生测试或(C类)单因素方差分析。DAPI,4′,6-二氨基-2-苯基吲哚。
图2
图2
他莫昔芬诱导的腺泡特异性AT-1小鼠的特征。(一个)Ela-Core AT-1小鼠生产示意图。在2个月大时通过Tm诱导KO,以使胰腺发育正常;2~3个月后对组织进行分析。控制装置也收到Tm(B类C类)AT-1在整个胰腺和/或肝脏中的AT-1 mRNA水平飞行/+,Ela-Core AT-1+/-和Ela-Core AT-1-/-小鼠,如图所示。(D类E类)测量体重、胰腺重量和胰腺重量,并将其标准化为AT-1之间的体重佛罗里达州/+,Ela-Core AT-1+/-,AT-1飞行/飞行和Ela-Core AT-1-/-鼠标位于(D类)Tm后2-3个月或(E类)Tm后1.5年。数据为平均值±SE,n=3–5。**P(P)< .01, ∗∗∗P(P)< .001. 平均值的统计比较由(C类)未配对双尾学生测试或(B类D类)单因素方差分析。CycA,亲环素A。
图3
图3
三苯氧胺或Cre表达不会产生表型。(一个)如图所示,给予油或Tm的WT或Ela-Core小鼠胰腺的代表性H&E和天狼星红染色。(B类)体重和胰腺重量。(C类)XBP1s、CHOP、caspase 3和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的免疫印迹,在小组中定量D类Ponceau S(PS)用作加载控制。数据为平均值±SE,n=5.*P(P)<0.05。未配对双尾学生对平均值进行统计比较测试。clv,裂解的胱天蛋白酶3;赞成,反对3。
图4
图4
AT-1缺失导致胰腺内质网应激。(一个)AT-1胰腺切片的典型电镜图像飞行/飞行和Ela-Core AT-1-/-.红箭表示内质网扩张;白色箭头表示液泡。(B类)sXBP1的免疫印迹,在面板中定量C类. (D类)qPCR评估XBP1型、和XBP1(总计)mRNA。(E类)磷酸化c-jun N末端激酶(pJNK)和总c-jun N-末端激酶(JNKF类. (G公司)的qPCRATF6型. (H(H))磷酸化PERK(pPERK)、PERK、磷酸化eIF2α(peIF2α)、eIF2β、ATF4、GADD34、caspase 3(前体和裂解形式)和CHOP的免疫印迹,在小组中定量. (J型)qPCR分析自动变速箱4CHOP公司mRNA。对整个胰腺进行免疫印迹和qPCR。Ponceau S(PS)正在加载控制。所有数据均为平均值±SE,n=4-5。*P(P)< .05, ∗∗P(P)<.01和***P(P)< .001. 平均数的统计比较由一名未配对的双尾学生进行测试。
图5
图5
AT-1缺失会导致炎症。(一个)AT-1的代表性H&E染色佛罗里达州/+和Ela-Core AT-1-/-胰腺切片。注意Ela-Core AT-1中免疫细胞的显著浸润-/-(红色箭头). 岛屿标记有黄色星号. (B类)磷酸化和总核因子κB(NF-κB)(p65)的免疫印迹,在小组中定量C类Ponceau S(PS)用作加载控制。(D类)qPCR分析CCL5号机组. (E类)免疫细胞标记物F4/80和CD3的典型IF图像(白色箭头). 对整个胰腺进行免疫印迹和qPCR。所有数据均为平均值±SE,n=4-5。*P(P)< .05, ∗∗P(P)< .01. 平均数的统计比较由一名未配对的双尾学生进行测试。DAPI,4′,6-二氨基-2-苯基吲哚。
图6
图6
AT-1缺失导致纤维化。(一个)AT-1中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的免疫印迹飞行/飞行和Ela-Core AT-1-/-整个胰腺,在面板中量化B类Ponceau S(PS)用作加载控制。(C类)AT-1的代表性天狼星红染色飞行/飞行和Ela-Core AT-1-/-胰腺切片。(D类)1型胶原(红色)和肌动蛋白(蓝色)的代表性IF图像,在面板中量化E类数据为平均值±SE,n=4-5。*P(P)< .05, ∗∗∗∗P(P)< .0001. 平均数的统计比较由一名未配对的双尾学生进行测试。
图7
图7
CP的酶标记。(一个)胰蛋白酶活性测定。(B类)AT-1中的血浆淀粉酶活性飞行/飞行和Ela-Core AT-1-/-数据为平均值±SE,n≥3.*P(P)<.05. 平均数的统计比较由一名未配对的双尾学生进行测试。
图8
图8
Ela-Core AT-1公司-/-在AP期间遭受重大损坏。(一个)实验示意图:AT-1飞行/飞行和Ela-Core AT-1-/-小鼠给予CER AP,并允许其恢复1周。(B类)胰腺重量和(C类)实验后的体重。(D类)AT-1的代表性H&E染色飞行/飞行和Ela-Core AT-1-/-胰腺切片。数据为平均值±SE,n=3P(P)< .001. 平均数的统计比较由一名未配对的双尾学生进行测试。

中的注释

  • 蛋白赖氨酸乙酰化:胰腺炎的意外介导物。
    Gorelick FS公司。 Gorelick FS公司。 细胞分子胃肠肝素。2021;11(3):883-884. doi:10.1016/j.jcmgh..2020.11.010。Epub 2020年12月3日。 细胞分子胃肠肝素。2021 PMID:33279460 免费PMC文章。 没有可用的摘要。

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