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.2021年2月；28(2):435-446.
doi:10.1007/s43032-020-00301-8。 Epub 2020年9月9日。

骨桥蛋白通过PI3K途径调节子宫内膜异位症子宫内膜基质细胞迁移

傅晓霞 1, 姚梦云 2, 超爽液 1, 陶芳 1, 吴瑞金 三
附属机构

骨桥蛋白通过PI3K途径调节子宫内膜异位症子宫内膜基质细胞迁移

傅晓霞等。 生殖科学. 2021年2月.

摘要

子宫内膜异位症通常被描述为一种肿瘤样疾病，因为它有可能发生远处转移和局部组织浸润，而骨桥蛋白（OPN）是否在子宫内膜异位病的发病机制中起作用尚未被彻底研究。我们研究了子宫内膜基质细胞（ESCs）中OPN、尿激酶纤溶酶原激活物（uPA）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和磷酸PI3激酶（p-PI3K。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定OPN的血清浓度。下调OPN以探讨uPA、p-PI3K、F-actin和α-微管蛋白的相应变化。通过western blot和实时定量PCR（RT-qPCR）检测OPN、uPA、PI3K和p-PI3K的表达，并通过免疫荧光分析确认F-actin和α-微管蛋白的表达。通过CCK8、transwell和创伤划痕实验研究ESCs的增殖和迁移能力。与对照组相比，子宫内膜异位症患者子宫内膜OPN、p-PI3K和uPA的表达和血清OPN水平升高。异位ESCs中p-PI3K、uPA和α-微管蛋白的表达被siRNA-OPN干扰降低。PI3K通路的激活和抑制明显上调和下调uPA的表达。敲除OPN和抑制PI3K通路显著抑制异位ESCs中的细胞迁移。同时，PI3K通路的激活促进了异位ESCs的迁移能力。OPN可能通过PI3K信号通路调节uPA的表达，从而影响ESCs的迁移能力，表明OPN、uPA和PI3K通路可能是阻断子宫内膜异位症发展的潜在靶点。

关键词：骨桥蛋白；PI3K；细胞迁移；子宫内膜异位症；uPA。

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数字

图1
图1
原代培养ESCs的鉴定和OPN、uPA和PI3K的表达。一用ELISA检测血清OPN水平（对照组n个 = 18; 子宫内膜异位症n个 = 46).b,c（c）通过免疫组织化学染色在EcESC（200 × 刻度，bar = 100微米）。d日,e（电子）蛋白质（对照n个 = 4; 在位的n个 = 6; 异位的n个 = 7） western blot检测在位ESCs（EuESCs）、异位ESCs（EcESCs）和对照ESCs（CoESCs）中OPN、uPA、PI3K和p-PI3K的表达。（f）mRNA（对照n个 = 5；在位的n个 = 6; 异位的n个 = 8） RT-qPCR检测OPN和uPA在EuESCs、EcESCs和CoESCs中的表达。克异位内膜组织与血清OPN水平的相关性分析(n个 = 7). 结果显示为平均值±SEM(*第页 < 0.05, **第页 < 0.01)
图2
图2
敲除骨桥蛋白（OPN）下调EcESCs中uPA和p-PI3K的表达（si-Ctrl代表对照；si-Scr代表siRNA干扰；si-OPN代表siRNA-OPN；n个 = 4).一,b,c（c）蛋白质(一和b)和mRNA(c（c）)转染后48h用western blot和RT-qPCR检测OPN水平。d日,e（电子）western blot检测未经治疗的EcESCs、siRNA-OCN处理的EcESC和siRNA-OPN处理的EcESCs中uPA、PI3K和p-PI3K的蛋白表达。结果显示为平均值±SEM(*第页 < 0.05, **第页 < 0.01)
图3
图3
激活和抑制p-PI3K分别显著增加和减少uPA蛋白的表达(n个 = 4).一,c（c）在处理24小时后，通过蛋白质印迹检测p-PI3K的蛋白水平。b,d日western blot检测未经处理的EcESCs、ly294002处理的EcESCs和SF1670处理的EcESCs中uPA和OPN的蛋白表达。结果显示为平均值±SEM(*第页 < 0.05, **第页 < 0.01）
图4
图4
骨桥蛋白（OPN）的敲除影响EcESCs的细胞形态并诱导α-微管蛋白重组（si-Scr表示siRNA被扰乱；si-OPN表示siRNA-OPN）。一在siRNA-OPN转染后48小时，EcESCs用DAPI（用于细胞核，蓝色）、FITC-卵磷脂（用于F-actin，绿色）和Alexa Fluor 594-DM1A（用于α-微管蛋白，红色）进行三重染色（1000 × 刻度，bar = 10微米，n个 = 4).b在每个实验中，基于200多个细胞对F-actin和α-微管蛋白的颜色像素（px代表像素）进行量化，并进行了四个独立的实验。结果显示为平均值±SEM(*第页 < 0.05)
图5
图5
骨桥蛋白（OPN）的敲除减弱了细胞迁移，但对EcESCs中的细胞增殖没有影响（si-Ctrl代表对照；si-Scr代表siRNA干扰；si-OPN代表siRNA-OPN）。一,c（c）通过transwell分析检测细胞迁移（200 × 比例尺，n个 = 8).b,d日通过伤口划痕试验检测细胞迁移（100 × 比例尺，n个 = 10).e（电子）通过CCK8分析检测细胞增殖(n个 = 7） 转染后0h、24h和48h。结果显示为平均值±SEM(*第页 < 0.05, **第页 < 0.01)
图6
图6
p-PI3K激活增加了EcESCs的迁移，而p-PI3K抑制则减少了EcESC的迁移。一,b通过transwell分析检测细胞迁移（200 × 比例尺，n个 = 8).c（c）,d日通过伤口划痕试验检测细胞迁移（100 × 比例尺，n个 = 8). 结果显示为平均值±SEM(*第页 < 0.05, **第页 < 0.01)
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