跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2021年2月；16(2):367-374.
doi:10.4103/1673-5374.286972。

GABA的抑制A类-ρ受体诱导斑马鱼视网膜再生

马修·肯特 1, 尼吉斯·卡拉 1, 詹姆斯·巴顿 1
附属公司

GABA的抑制作用A类-ρ受体诱导斑马鱼视网膜再生

马修·R·肯特等。 神经再生研究. 2021年2月.

摘要

视网膜疾病的潜在治疗方法是诱导内源性Müller胶质细胞（MG）衍生的再生反应来替换受损的神经元。与哺乳动物MG相反，斑马鱼MG能够介导自发再生。我们试图定义斑马鱼视网膜再生的机制，以确定诱导哺乳动物视网膜再生的治疗靶点。我们以前使用药理学和遗传学方法抑制γ-氨基丁酸A（GABAA类)未受损斑马鱼视网膜中的受体，并通过MG去分化和MG衍生增殖祖细胞的出现来检测，表明这种抑制可以诱导视网膜再生的启动。在这里，我们表明抑制GABA的一个药理上不同的亚群A类受体（GABAA类-ρ） 也可以诱导视网膜再生。两种GABA受体亚型的双重抑制导致视网膜再生增强。基因表达分析表明GABA的抑制A类-ρ受体诱导典型的视网膜再生反应。我们的结果支持一种模型，即在斑马鱼视网膜再生过程中，GABA水平降低（如视网膜细胞死亡或损伤后）会诱导MG去分化和增殖祖细胞的生成。2019年1月29日，范德比尔特动物保护和使用机构委员会（M1800200方案）批准了动物实验。

关键词：米勒-格里亚；γ-氨基丁酸；吗啉；神经递质；再生；视网膜；干细胞；斑马鱼。

PubMed免责声明

利益冲突声明

无

数字

图1
图1
GABA的抑制A类-ρ受体在没有视网膜损伤的情况下导致Müller胶质细胞衍生的增殖反应。玻璃钢(1016吨1:gfp)斑马鱼玻璃体内注射1×PBS（A）或25 nmol GABAA类-ρ受体抑制剂（1,2,5,6-四氢吡啶-4-基）甲基膦酸（TPMPA；B），然后在切片前恢复48小时。用抗PCNA或GFP抗体进行免疫染色，分别监测Müller胶质细胞的DNA复制或脱分化。绿色：大号（tuba1a）：GFP；红色：PCNA；蓝色：A和B中的TO-PRO-3。比例尺：50μm。光学切片数：53（A）和55（B）。GCL：神经节细胞层；INL：内核层；ONL：外核层。（C） PCNA的量化+细胞。每个数据点来自一个单独的眼睛，是两个部分的平均值，计算所有PCNA+细胞核内层的细胞。双尾学生的t吨-测试被用来检验显著性。误差条表示平均值±SEM。n个= 29. ****P（P）= 1.12 × 10–13,与.PBS.GABA：γ-氨基丁酸；GFP：绿色荧光蛋白；PCNA：增殖细胞核抗原。
图2
图2
GABA的抑制A类-ρ受体在没有损伤的情况下通过反义吗啉注射导致增殖反应。Tg（千克）(1016tuba1a:gfp)斑马鱼玻璃体内注射0.75 nmol的对照吗啉酸（Ctl-MO；a）或靶向GABAρ受体ρ2A亚单位的两种独立反义吗啉酸中的一种(gabrr2a基因-MO1（B、C）和gabrr2a基因-MO2（D）），然后允许恢复3小时。然后对注射的眼睛进行电穿孔，并使鱼在切片前恢复72小时。用抗PCNA或GFP的抗体进行免疫染色，分别监测MG的DNA复制或去分化。比例尺：A和B为50μm。绿色：大号（tuba1a）：GFP；红色：PCNA；蓝色：A和B中的TO-PRO-3。GCL：神经节细胞层；INL：内核层；ONL：外核层。PCNA的量化+细胞与对照吗啉酸的比较gabrr2a基因-MO1（C）或gabrr2a基因-MO2（D）。n个Ctl-MO为7n个=10gabrr2a基因-MO1（C）。n个=6，对于Ctl-MO和n个=7gabrr2a基因-MO2（D）。每个数据点来自一个单独的眼睛，是两个部分的平均值，计算所有PCNA+细胞核内层的细胞。双尾学生的t吨-测试用于检验显著性。误差条表示平均值±SEM****P（P）= 8.7 × 10–5（C） **P（P）=0.0089（D），与.Ctl-MO。光学切片数：52（A）和46（B）。GABA：γ-氨基丁酸；GFP：绿色荧光蛋白；PCNA：增殖细胞核抗原。
图3
图3
ascl1a的抑制阻断了TPMPA诱导的增殖。Tg（千克）(1016tuba1a:gfp)斑马鱼玻璃体内注射1×PBS，25 nmolγ-氨基丁酸A受体（GABA）A类-ρ受体）抑制剂TPMPA、0.75 nmol对照吗啉（Ctl-MO）、0.75 nm ol ascl1a-MO靶向ascl1a或其组合。在电穿孔前，鱼可以恢复3小时，在切片前再恢复45小时。（A） PBS/Ctl-MO联合注射。（B） 公共广播系统/ascl1标准-MO1共注入。（C） 25 nmol TPMPA/Ctl-MO联合注入。（D） 25毫摩尔TPMPA/ascl1标准-MO1共注入。用抗PCNA或GFP抗体进行免疫染色，分别监测Müller胶质细胞的DNA复制或脱分化。比例尺：50μm。绿色：大号（tuba1a）：GFP；红色：PCNA；蓝色：TO-PRO-3（A–D）。GCL：神经节细胞层；INL：内核层；ONL：外核层。光学切片数：41（A）、46（B）、46[C]和47（D）。（E，F）PCNA定量+单元格，其中之一ascl1标准-MO1（E），或ascl1标准-MO2（F）。n个=5，对于PBS+Ctl-MO，n个=PBS为6+ascl1标准-MO1、，n个=9，对于TPMPA+Ctl-MO，以及n个=8，用于TPMPA+ascl1型-MO1（E）。n个=7，对于PBS+Ctl-MO，n个=PBS为10+ascl1标准-MO2、，n个=8，对于TPMPA+Ctl-MO，以及n个=TPMPA为8+ascl1标准-MO2（F）。每个数据点来自一个单独的眼睛，是两个部分的平均值，计算所有PCNA+细胞在内层。采用Tukey多重比较检验的单向方差分析来检验显著性。误差线为平均值±SEM。（E）****P（P）= 5.8 × 10–9（PBS+Ctl-MO与.TPMPA+Ctl-MO）****P（P）= 1.2 × 10–12（公共广播系统+ascl1标准-商务部1与.TPMPA+Ctl-MO）****P（P）= 3.7 × 10–11（TPMPA+Ctl-MO与.TPMPA+ascl1标准-MO1）。（F）****P（P）= 1.5 × 10–7（PBS+Ctl-MO与.TPMPA+Ctl-MO）****P（P）= 4 × 10–10（公共广播系统+ascl1标准-摩尔2与.TMPA+Ctl MO）****P（P）=2.45×10–8（TPMPA+Ctl-MO与.TPMPA+ascl1标准-MO2）。GFP：绿色荧光蛋白；PCNA：增殖细胞核抗原；TPMPA：（1，2，5，6-四氢吡啶-4-基）甲基膦酸。
图4
图4
GABA的抑制A类-ρ受体诱导的基因表达变化与典型视网膜再生一致。（A） 视网膜来自Tg（GFAP:GFP）2001年3月对在Müller胶质细胞中表达GFP的斑马鱼进行解剖、分离和荧光分类，以获得GFP——和GFP+未注射γ-氨基丁酸A受体（GABA）的细胞A类-ρ受体）抑制剂TPMPA或25 nmol TPMPA注射24小时后。（B） 对GFP的RNA进行定量逆转录PCR+和GFP——测定所示mRNA的表达池和折叠变化。折叠更改显示为2–ΔΔCt。红线表示表达式没有变化。Fisher最小显著性差异试验用于分析TPMPA注射视网膜与未注射视网膜中指示RNA的折叠变化表达。误差线显示为平均值±SEM。n个=3个生物重复，每个重复3个技术重复****P（P）= 3.3 × 10–6(ascl1a公司); **P（P）= 0.0037 (整数1a); ****P（P）= 5.4 × 10–6(dkk1b型)**P（P）= 0.0056 (let-7a). GFAP：胶质纤维酸性蛋白；GFP：绿色荧光蛋白；TPMPA：（1,2,5,6-四氢吡啶-4-基）甲基膦酸。
图5
图5
GABA本地化A类-ρ转录本通过就地杂交。视网膜来自Tg（千克）(GFAP公司：GFP）2001年3月用GFP抗体对在米勒胶质细胞中表达GFP的斑马鱼进行免疫染色，以标记米勒胶质细胞。现场使用针对GABAρ2a亚单位的探针在相同的切片上进行杂交A类-ρ受体(gabrr2a基因). （A） 由69个光学片形成的Z堆叠。光学切片厚度为0.439μm。（B） z堆叠的代表性光学切片（A）。比例尺：20μm。INL：内核层；OPL：外丛状层。绿色：GFAP公司：GFP；红色：gabrr2a（A，B）。GABA公司A类：γ-氨基丁酸A；GFAP：胶质纤维酸性蛋白；GFP：绿色荧光蛋白；TPMPA：（1,2,5,6-四氢吡啶-4-基）甲基膦酸。
图6
图6
GABA的双重抑制作用A类和GABAA类-ρ受体增强增殖。玻璃钢(1016tuba1a:gfp)斑马鱼玻璃体内注射1×PBS（A），6.25 nmol GABAA类拮抗剂加巴静（B），12.5 nmol GABAA类-ρ受体抑制剂TPMPA（C）或两者（D）。在切片和用抗PCNA或GFP抗体进行免疫染色之前，让鱼恢复48小时，以分别监测米勒胶质细胞的DNA复制或脱分化。GCL：神经节细胞层；INL：内核层；ONL：外核层。比例尺：50μm。绿色：大号（tuba1a）：GFP；红色：PCNA；蓝色：TO-PRO-3（A–D）。光学切片数：37（A）、49（B）、48（C）和61（D）。（E） 增殖细胞核抗原的定量+细胞。每个数据点是一个单独的眼睛，是两个部分的平均值，计算所有PCNA+细胞核内层的细胞。采用Tukey多重比较检验的单向方差分析来检验显著性。误差线为平均值±SEM。n个=10 PBS，n个=10加巴津，n个=9 TPMPA，以及n个=10 TPMPA/Gabazine****P（P）= 1.2 × 10–5（公共广播系统与加巴津/TPMPA）**P（P）=0.0016（加巴津与加巴津/TPMPA）***P（P）=0.0006（TPMPA与加巴津/TPMPA）。GABA公司A类：γ-氨基丁酸A；GFAP：胶质纤维酸性蛋白；GFP：绿色荧光蛋白；PCNA：增殖细胞核抗原；TPPPA：（1,2,5,6-四氢吡啶-4-基）甲基亚磷酸。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Alexander SP、Peters JA、Kelly E、Marrion NV、Faccenda E、Harding SD、Pawson AJ、Sharman JL、Southan C、Davies JA CGTP合作伙伴。2017/18年药理学简明指南：配体门控离子通道。英国药理学杂志174补遗2017；1:S130–159。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Bao H、Asrican B、Li W、Gu B、Wen Z、Lim SA、Haniff I、Ramakrishnan C、Deisserth K、Philpot B、Song J。长程GABA能量输入调节神经干细胞静止并控制成年海马神经发生。细胞干细胞。2017;21:604–617.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Barber AC、Hippert C、Duran Y、West EL、Bainbridge JW、Warre Cornish K、Luhmann UF、Lakowski J、Sowden JC、Ali RR、Pearson RA。光感受器移植修复退化的视网膜。美国国家科学院院刊，2013年；110:354–359.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Ben-Othman N、Vieira A、Courtney M、Record F、Gjernes E、Avolio F、Hadzic B、Druelle N、Napolitano T、Navarro-Sanz S、Silvano S、Al-Hasani K、Pfeifer A、Lacas-Gervais S、Leuckx G、Marroqui L、Thévenet J、Madsen OD、Eizrik DL、Heimberg H等。长期服用GABA可诱导α细胞介导的类β细胞新生。单元格。2017;168:73–85 e11。-公共医学
    1. Bernardos RL，Raymond PA。GFAP转基因斑马鱼。基因表达模式。2006年；6:1007–1013.-公共医学