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.2020年6月8日;11(6):437.
doi:10.1038/s41419-020-2635-5。

环状RNA circSLC25A16通过表观遗传修饰促进非小细胞肺癌的糖酵解

附属公司

环状RNA circSLC25A16通过表观遗传修饰促进非小细胞肺癌的糖酵解

洪尚冠等。 细胞死亡病. .

摘要

越来越多的证据强调了环状RNA(circRNAs)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的作用,但对其在NSCLC糖酵解中的作用仍知之甚少。circRNA微阵列图谱在非小细胞肺癌组织样本中发现了一种新的外显子衍生的circRNA,circSLC25A16(hsa_circ_0018534)。在NSCLC样本中,circSLC25A16的高表达与不良预后相关。细胞实验表明,circSLC25A16加速了NSCLC细胞的糖酵解和增殖。此外,通过异种移植物测定,circSLC25A16敲低抑制了体内生长。RNA-荧光原位杂交(RNA-FISH)表明,circSLC25A16和miR-488-3p均位于细胞质中。力学实验表明,circSLC25A16与miR-488-3p/HIF-1α相互作用,后者通过促进其转录激活乳酸脱氢酶A(LDHA)。总之,本研究通过miR-488-3p/HIF-1α/LDHA揭示了circSLC25A16对NSCLC糖酵解的关键作用,提示了NSCLC的潜在发病机制,并为精确治疗提供了治疗策略。

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数字

图1
图1。CircSLC25A16在NSCLC中上调。
热图显示了在非小细胞肺癌组织样本和非肿瘤正常组织中使用circRNA微阵列的一系列失调的circRNA。b条RT-PCR显示上调的circRNAs表达,包括circCCDC66、CDR1as、circPVT1、circSLC25A16、circGFRA1和circMAPK4。c(c)通过反向拼接从SLC25A16基因第7外显子和第6外显子生成circSLC25A16.的规范。d日Sanger测序证实了circSLC25A16与共价闭环的结合位点。e(电子)RT-PCR显示RNase R给药后SLC25A16mRNA或circSLC25A16表达。(f)RT-PCR显示了使用放线菌素D后SLC25A16 mRNA和circSLC25A16mRNA的水平。与正常组织相比,RT-PCR显示了非小细胞肺癌组织中circSLC25A16的表达。小时高circSLC25A16水平的非小细胞肺癌组织预后不良。数据表示为平均值±标准偏差**第页 < 0.01与对照组相比。
图2
图2。CircSLC25A16加速了NSCLC的糖酵解。
采用RT-PCR检测circSLC25A16在NSCLC细胞(H460、H1299、A549)和正常细胞(NHBE)中的表达。b条在A549细胞中,转染特异性靶向circSLC25A16的shRNA以抑制其表达,转染过表达质粒(OE)以增强circSLC2 5A16的表达。c(c)葡萄糖摄取分析,d日乳酸生产分析和e(电子)ATP分析显示转染circSLC25A16 shRNA(sh-circSLC25A16-shRNA)和circSLC2 5A16过表达(OE)的A549细胞以及对照组的葡萄糖利用率。(f)ECAR分析(细胞外酸化率)显示转染circSLC25A16 shRNA(sh-circSLC25A16-shRNA)和circSLC2 5A16过表达(OE)的A549细胞的糖酵解能力*第页 < 0.05. **第页 < 0.01.
图3
图3。CircSLC25A16调节非小细胞肺癌的增殖。
EdU分析显示EdU阳性A549细胞转染了circSLC25A16敲除、circSLC2 5A16过表达(OE)和对照。b条CCK-8分析显示EdU阳性A549细胞转染了circSLC25A16敲除、circSLC2 5A16过表达(OE)和对照。c(c)体内小鼠异种移植试验显示肿瘤体积和d日使用转染sh-circSLC25A16的A549细胞测定肿瘤重量**第页 < 0.01.
图4
图4。miR-488-3p是circSLC25A16的靶标。
对circSLC25A16潜在miRNAs的研究表明,circSLC2 5A16以miR-488-3p为靶点,作为经典的miRNA海绵。构建了用于荧光素酶报告基因测定的野生型和突变序列。b条RNA-FISH分析表明A549细胞中存在circSLC25A16的胞质段或核段。c(c)RT-PCR亚细胞定位分析发现circSLC25A16位于细胞质或细胞核中。d日荧光素酶报告子分析显示了miR-488-3p模拟物或对照物以及circSLC25A16突变或野生型荧光素酶的活性。e(电子)利用circSLC25A16敲除和过表达转染技术,RT-PCR显示miR-488-3p在A549细胞中的表达**第页 < 0.01.
图5
图5。HIF-1α作为circSLC25A16/miR-488-3p的靶点。
生物信息学预测揭示了miR-488-3p的潜在靶效应蛋白。构建了HIF-1α荧光素酶报告载体的野生型和突变型序列。b条荧光素酶报告分析显示miR-488-3p模拟物/对照与HIF-1αmRNA野生型/突变体的活性。c(c)RT-PCR显示转染miR-488-3p模拟物或抑制剂的A549细胞中HIF-1αmRNA表达。d日Western blot和e(电子)RT-PCR显示HIF-1α蛋白和mRNA通过circSLC25A16过度表达(circSLC2 5A16 OE)转染,miR-488-3p模拟联合转染**第页 < 0.01. *第页 < 0.05.
图6
图6。HIF-1α促进LDHA的转录水平。
生物信息学工具(JASPAR,网址:http://jaspar.genereg.net/)显示了LDHA启动子区的潜在结合位点。b条构建了两个结合位点的荧光素酶报告载体。检测相对荧光素酶活性。c(c)对于染色质免疫沉淀(ChIP)分析,根据结合位点合成引物。d日ChIP-qPCR显示使用引物富集了LDHA启动子区域。e(电子)Western blotting和RT-PCR显示转染HIF-1α(pc-HIF-1α)或对照的LDHA的mRNA和蛋白水平。(f)公共数据库(TCGA,http://gepia.cancer-pku.cn/index)在LUSC(肺鳞癌)和LUAD(肺腺癌)队列中证明了LDHA表达和HIF-1α表达之间的相关性**第页 < 0.01.

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