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.2020年4月25:20:133。
doi:10.1186/s12935-020-0105-y。 电子采集2020。

E2F1诱导的长非编码RNA BSN-AS2通过靶向miR-654-3p/SYTL2轴促进脊柱骨肉瘤进展

周贤伟 1, 李继田 2, 滕俊艳 三, 刘玉峰 1, Di Zhang先生 1, 刘林云（Linyun Liu） 三, 张文明 1
附属机构

E2F1诱导的长非编码RNA BSN-AS2通过靶向miR-654-3p/SYTL2轴促进脊柱骨肉瘤进展

周贤伟等。 癌细胞Int. .

摘要

脊柱骨肉瘤（OS）是一种罕见的侵袭性恶性肿瘤。长非编码RNA（lncRNA）BSN-AS2已被证明是几种癌症的致癌基因。然而，BSN-AS2在脊髓OS中的作用和功能尚不清楚。我们的研究发现，BSN-AS2在脊髓OS组织和细胞系中的表达增强。转录因子E2F1诱导脊髓OS细胞BSN-AS2表达上调。随后，功能丧失分析表明，BSN-AS2缺失降低了脊髓OS的细胞增殖、迁移和侵袭，并促进了细胞凋亡。此后，RIP、RNA下拉和荧光素酶报告子分析表明，BSN-AS2可以在脊髓OS中海绵化miR-654-3p。随后，证实了miR-654-3p与SYTL2之间的结合作用。最后，救援实验表明，miR-654-3p抑制或SYTL2过度表达可以抵消BSN-AS2缺陷对脊髓OS进展的抑制作用。总之，E2F1诱导的BSN-AS2可对抗miR-654-3p在SYTL2减数化脊髓OS进展中的有效性。

关键词：BSN-AS2；E2F1；SYTL2；脊柱骨肉瘤；miR-654-3页。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争性利益作者声明本研究中没有竞争性利益。

数字

图1
图1
在脊髓OS中，BSN-AS2被E2F1转录激活。一用qRT-PCR检测BSN-AS2在脊柱OS组织和邻近正常组织中的表达。bqRT-PCR显示BSN-AS2在脊髓OS细胞和hFOB细胞中表达。c（c）JASPAR数据库显示了E2F1的结合基序和E2F1在BSN-AS2启动子上的结合区域。d日E2F1在BSN-AS2转录中的作用示意图。e（电子）ChIP分析在第2部分（P2）中说明了E2F1和BSN-AS2启动子之间的结合事实。（f）–克qRT-PCR和蛋白质印迹检测E2F1的mRNA和蛋白质表达。小时qRT-PCR评估了BSN-AS2对E2F1上调或下调的反应。我荧光素酶报告子分析显示E2F1表达调控对BSN-AS2转录的影响。j个荧光素酶报告子分析验证了P2中E2F1和BSN-AS2启动子之间的结合事实。k个用qRT-PCR检测E2F1在脊柱OS组织和邻近正常组织中的表达（左）；皮尔逊相关分析说明了E2F1和BSN-AS2（右）之间的相关性。*P（P） < 0.05,**P（P） < 0.01
图2
图2
BSN-AS2耗竭抑制脊髓OS进展。一qRT-PCR显示BSN-AS2在U2OS和Saos-2细胞中沉默。b,c（c）CCK-8和集落形成分析测定了敲除BSN-AS2时U2OS和Saos-2细胞的增殖。d日,e（电子）流式细胞术和TUNEL法检测BSN-AS2沉默的U2OS和Saos-2细胞的凋亡。（f）,克Transwell分析评估了BSN-AS2缺乏引起的细胞迁移和侵袭。**P（P） < 0.01
图3
图3
BSN-AS2在脊髓OS中能与miR-654-3p结合。一核质分馏分析显示BSN-AS2在细胞质中表达丰富。bqRT-PCR揭示了6个miRNA在hFOB、U2OS和Saos-2细胞中的表达。c（c）qRT-PCR显示miR-654-3p模拟物转染细胞中miR-656-3p的表达。d日qRT-PCR证实了下调BSN-AS2或上调E2F1时miR-654-3p的表达，以及过度表达miR-656-3p时BSN-AS1的表达。e（电子）RIP分析显示BNS-AS2和miR-654-3p在抗Ago2或抗IgG组中富集。（f）RNA下拉分析显示BSN-AS2可以与miR-654-3p结合。克qRT-PCR检测miR-654-3p在脊柱OS组织和邻近正常组织中的表达（左）；皮尔逊相关分析显示了miR-654-3p和BSN-AS2（右）之间的相关性。小时BSN-AS2和miR-654-3p之间的假定结合位点。我荧光素酶报告分析发现BSN-AS2可以与miR-654-3p结合。j个,k个CCK-8和集落形成分析测量了miR-654-3p过度表达引起的细胞增殖。我,米流式细胞术分析和TUNEL分析检测到miR-654-3p模拟物转染细胞中的细胞凋亡。n个,o（o）Transwell分析显示了当过表达miR-654-3p时细胞的迁移和侵袭。**P（P） < 0.01
图4
图4
BSN-AS2通过抑制miR-654-3p表达促进脊髓OS进展。一qRT-PCR检测miR-654-3p抑制剂转染细胞中miR-656-3p的表达。b,c（c）CCK-8和集落形成分析测定了转染组的细胞增殖。d日,e（电子）流式细胞术分析和TUNEL分析检测转染组的细胞凋亡。（f）,克Transwell分析评估了转染组中的细胞迁移和侵袭。**P（P） < 0.01
图5
图5
MiR-654-3p靶向SYTL2调节脊髓OS进展。一StarBase显示SYTL2和CLN8可能是miR-654-3p的靶点。bqRT-PCR显示SYTL2和CLN8在脊髓OS细胞和hFOB细胞中的表达。c（c）,d日qRT-PCR和western blot分析揭示了STYL2的mRNA和蛋白表达。e（电子）RIP分析显示抗Ago2组BSN-AS2、miR-654-3p和SYTL2富集。（f）RNA下拉显示miR-654-3p可以与SYTL2结合。克qRT-PCR检测SYTL2在脊柱OS组织和邻近正常组织中的表达（左）；皮尔逊相关分析显示了SYTL2与miR-654-3p/BSN-AS2（中部和右侧）之间的相关性。小时显示了miR-654-3p和SYTL2的潜在结合位点。我荧光素酶报告子分析表明miR-654-3p可以靶向脊髓OS中的SYTL2。j个qRT-PCR和western blot检测SYTL2的mRNA和蛋白表达。k个,我CCK-8和集落形成测定显示当抑制SYTL2时细胞增殖。米,n个流式细胞术分析和TUNEL分析测定了SYTL2沉默细胞中的细胞凋亡。o（o）,第页Transwell分析显示细胞迁移和侵袭是对SYTL2衰减的反应。**P（P） < 0.01
图6
图6
BSN-AS2以SYTL2依赖的方式加速脊髓OS的进展。一qRT-PCR和western blot检测SYTL2 mRNA和蛋白水平。b,c（c）CCK-8和集落形成分析显示不同组的细胞增殖。d日,e（电子）流式细胞术分析和TUNEL分析评估了转染U2OS细胞的细胞凋亡。（f）,克Transwell分析观察到转染细胞中的细胞迁移和侵袭。小时拍摄不同转染组小鼠肿瘤的照片。绘制肿瘤体积曲线。我测量肿瘤体积和重量。**P（P） < 0.01
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