跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

点政府

政府意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息,确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https(https)://确保您连接到官方网站,并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2020年4月10:2020:2045969。
doi:10.1155/2020/2045969。 eCollection 2020。

阿司匹林降低成骨基质和Wnt信号转导诱导的成人主动脉瓣间质细胞矿化体外试验

附属公司

阿司匹林降低成骨基质和Wnt信号转导诱导的成人主动脉瓣间质细胞矿化体外试验

阿尼莎·波莉等。 国际细胞生物学杂志. .

摘要

在世界范围内,钙化性主动脉瓣疾病是心脏异常患者发病率和死亡率的主要原因之一。主动脉瓣矿化和钙化是成人钙化性主动脉瓣疾病表现和功能不全的关键事件。由于严重的矿化和钙化,成人主动脉瓣尖显示出紊乱和分散的分层,伴随着钙化结节的沉积,成人瓣膜功能严重受损。有趣的是,在发育过程中,骨形成细胞和心脏瓣膜细胞之间发现了共享的基因调控途径。阿司匹林是一种富含亮氨酸的小蛋白聚糖(43kDa),可抑制牙周膜细胞的矿化,在功能未知的正常小鼠成年主动脉瓣叶中也检测到。因此,为了了解阿斯匹林在主动脉尖矿化和钙化中的作用,建立了成年鸟类主动脉瓣间质细胞培养系统,并成功诱导了这些细胞的成骨作用。诱导成骨后阿司匹林与未进行成骨诱导的细胞相比,检测到骨和成骨标志物的mRNA和表达增加。重要的是,用重组人阿斯匹林蛋白治疗可降低成骨介质诱导的主动脉瓣间质细胞的矿化水平,同时Wnt水平也随之降低/β-catenin信号。总的来说,所有这些数据都表明阿司匹林在目前的瓣膜置换手术中,可能是治疗钙化性主动脉瓣疾病的一个新的生物分子靶点。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明,本论文的出版不存在利益冲突。

数字

图1
图1
禽成年主动脉瓣间质细胞的分离与鉴定在体外(a)成年鸟类主动脉瓣(箭头)基底三叉的光镜图像。(b) 鸡原代AVICs培养物的亮场图像(×10)。48~72岁时AVIC细胞呈丝状形态(箭头所示)hr培养。(c) 从培养的禽类AVIC细胞中获得具有不同形态的考马斯亮蓝染色AVIC的亮场图像(×20)。(d–f)AVIC用α-Sma(绿色),标记肌成纤维细胞,用DAPI(蓝色)阳性细胞核(×10(d)、×20(e)和×40(f)进行复染;用箭头标记)。(g) AVIC-特异性标记和阿司匹林通过RT-PCR与心室(VEN)标记物进行比较。这里,增加了纤维结合蛋白Sm22α、和阿司匹林与VEN组织相比,在AVIC中检测到VEN特异性标记物(我的7Gata4公司)与AVIC细胞相比,在分离的VEN组织中的表达增加。β-肌动蛋白用于相等的mRNA输入和RT效率(n个= 3).
图2
图2
鸡成年主动脉瓣间质细胞(AVIC)的成骨诱导在体外(a,b)培养中未诱导对照组(a,用箭头标记)和成骨(OS)介质诱导的AVIC的代表性亮场图像(b,用箭头标识)。(c) 成骨标志物的基因表达(骨桥蛋白运行2碱性磷酸酶Msx2、和成骨相关转录因子抗体)通过反转录酶PCR,与对照正常AVIC相比,在OS诱导的AVIC中显示出高表达。β-肌动蛋白用于相等的mRNA输入和RT效率。(d) (I–V):通过实时PCR进一步验证了相对mRNA水平的表达。骨桥蛋白运行2碱性磷酸酶Msx2、和成骨相关转录因子抗体分别增加3.65倍、2.68倍、0.4倍、2.69倍和17.12倍。β-肌动蛋白用于分析标准化基因表达。统计显著性由Student’s-测试,其中表示第页≤0.05和n个= 3.
图3
图3
禽成年主动脉瓣间质细胞(AVIC)成骨诱导后内源性阿斯匹林mRNA和蛋白表达降低在体外(a)(I和II):减少阿斯波林通过逆转录酶PCR和实时PCR,比较成骨(OS)介质诱导的AVIC和未诱导的对照AVIC中的基因表达。在这里,阿司匹林在OS处理的AVICs中显示出与对照AVICs(a、I)相比降低的表达。此外,定量表达数据显示,表达量减少了0.62倍阿司匹林OS-处理的AVIC与控制的AVIC(a,II)进行比较。(b) (I和II):通过western blot分析,与未诱导的对照AVIC相比,成骨介质诱导的AVIC中阿斯匹林蛋白表达降低。这里,根据波带强度(b,I),与对照AVIC相比,阿斯匹林在OS处理的AVIC中的表达降低。此外,定量表达数据显示,与对照组AVIC相比,经OS处理的AVIC中阿斯匹林的表达减少了0.67倍(第页= 0.008). (c) (I和II):用阿司匹林抗体(绿色)对AVIC进行免疫染色,用DAPI(蓝色)对细胞核进行反染色,显示与对照AVIC相比,经OS处理的AVIC中的Asp+细胞数量减少(用箭头标记)。(d) 这里,定量数据表明,与未经处理的对照AVIC相比,经OS处理的AVIC显示阿斯匹林阳性细胞数量减少了12.65%。统计显著性由Student’s-测试,其中表示第页≤0.05和∗∗∗表示第页≤0.001和n个= 3.
图4
图4
成骨(OS)培养基诱导后鸟类成体AVIC选择性标记基因表达分析在体外(a)(I–VII):qRT-PCR数据显示第1a1列波形蛋白、和亚当斯9分别下调了0.97倍、0.83倍和0.62倍(I、IV和VII)。此外,Sm22α纤维结合蛋白N-钙粘蛋白亚当斯5,和第2页分别上调了17.25倍、8.51倍、4.42倍、0.23倍和3.36倍(II、III、V、VI和VIII)。(b) (I–III):类似地,Wnt信号转导的正向调节因子,β-连环蛋白Wnt3a型分别上调了1.44倍和4.73倍(I和II)。相反,Wnt信号的负调制器,Dkk1公司mRNA减少0.27倍(III)。统计显著性由Student’s-测试,其中表示第页≤ 0.05,∗∗表示第页≤0.01和∗∗∗表示第页≤0.001和n个= 3.
图5
图5
人重组阿司匹林(rhAsp)治疗降低成骨(OS)介质诱导的成年禽AVIC的基质矿化在体外.(a,b)茜素红S染色数据显示,(a,nI–nIII)OS诱导的AVIC(箭头)的亮场显微图像(nI(×10)和nII和nII(×16)),以及rhAsp处理的OS诱导AVIC(箭)的(nI–nIII)亮场显微图(nI,×10)、nII和nIII(×十六)。(c) 茜素红S的定量分析显示,与仅OS诱导的AVICs(0.089)相比,rhAsp处理的OS诱导的AVICs的吸光度降低(0.064)(第页≤ 0.05,n个= 3). (d,e)这里,免疫染色数据显示,一些阿斯匹林阳性(Asp+)与OS诱导的AVIC(箭头)相比,rhAsp处理的OS诱导AVIC中的细胞数量增加。(f) 定量数据显示Asp增加1.75%+与仅由rhAsp诱导的AVIC相比,rhAsp处理的OS诱导的AVICs中的细胞。(g) (I和VI):qRT-PCR数据显示阿司匹林被0.9倍(I)的成骨标志物上调骨桥蛋白运行2被0.29倍(II)和0.79倍(III)以及Wnt信号特异性标记物下调,β-连环蛋白Wnt3a型,下调了0.55倍(IV)和0.71倍(V),而Dkk1公司在rhAs处理的OS诱导的AVIC中,其上调幅度分别为OS诱导AVIC的0.3倍(VI)。统计显著性由Student’s-测试,其中表示第页≤ 0.05,∗∗表示第页≤0.01,以及∗∗∗表示第页≤0.001和n个= 3.
图6
图6
人重组阿斯匹林(rhAsp)治疗可降低重组Wnt3a-(rhWnt3A-)处理的成骨(OS)培养基诱导的禽成体AVIC中的基质矿化。(a–c)茜素染色的OS诱导的AVIC的亮场显微图像(×10)显示,与OS诱导的avIC相比,rhWnt3a处理的OS诱导AVIC中的基质矿化增加。此外,在rhWnt3A+rhAsp处理的OS诱导的AVIC(箭头)中检测到基质矿化减少。(d) 茜素红S的定量分析表明,与仅OS-诱导的AVIC相比,rhWnt3A处理的OS-诱导AVIC的吸光度上调(0.16),而与rhWnt5A处理的OS诱导的AVICs相比,rhWnt3A+rhAs-处理的OS-induced AVICs的吸光度下调(0.065)(第页≤ 0.05,n个= 3). (e) (I和VI):这里,qRT-PCR数据显示阿司匹林rhWnt3A处理的AVIC减少0.73倍,rhWntAA+rhAsp OS诱导的AVIC增加3.43倍(I)。骨桥蛋白运行2rhWnt3A处理的AVIC中mRNA表达增加1.44倍和0.89倍,rhWntAA+rhAsp处理的OS诱导的AVIC(II和III)mRNA表达减少0.07倍和1.23倍。β-连环蛋白Wnt3A型在rhWnt3A处理的AVICs中,mRNA增加了2.2倍和1.73倍,在rhWnt3A+rhAsp OS AVICs中减少了0.33倍和0.26倍。也,Dkk1公司rhWnt3A处理的AVIC减少0.71倍,rhWntAA+rhAsp处理的OS诱导的AVIC增加1.44倍。统计显著性由Student’s-测试,其中表示第页≤0.05时,∗∗表示第页≤0.01,以及∗∗∗表示第页≤0.001和n个=3。
图7
图7
人重组阿司匹林(rhAsp)治疗也降低了Xav939处理的成骨(OS)培养基诱导的禽成体AVIC的基质矿化。(a–c)茜素染色的OS诱导AVIC的亮场显微图像(×10)显示,与仅由OS诱导的AVIC相比,Xav939处理的OS诱导的avIC的基质矿化没有变化。此外,在Xav939+rhAsp处理的OS诱导的AVIC(箭头)中检测到基质矿化减少。(d) 茜素红S的定量分析表明,Xav939处理的OS诱导的AVIC的吸光度与仅OS诱导的AvIC(0.088)的吸光度相似(0.089),rhWnt3A+rhAsp处理的OS诱发的AVIC与Xav939-处理的OS诱生的AVIC相比吸光度降低(0.068)(第页≤ 0.05,n个= 3). (e) (I和VI):qRT-PCR数据显示阿司匹林在OS诱导的AVIC和Xav939处理的AVIC中没有变化,而在Xav939+rhAsp OS诱导的avIC中增加了1.71倍(I)。骨桥蛋白运行2OS-诱导的AVIC和Xav939处理的AVIC的mRNA表达均未发生变化,而Xav939+rhAsp OS诱导的AVICs的mRNA分别减少了0.28倍和0.35倍(II和III)。β-连环蛋白Xav939处理组和Xav939+rhAsp处理的OS诱导的AVIC分别减少0.78倍和0.27倍(IV)。同样,Wnt3A型Xav939处理组和Xav939+rhAsp处理的OS诱导的AVIC分别减少0.05倍和0.65倍(V)。也,Dkk1公司Xav939处理组和Xav939+rhAsp处理的OS诱导的AVIC分别增加了0.18倍和3.09倍。统计显著性由Student’s-测试,其中表示第页≤0.05和∗∗表示第页≤0.01和n个= 3.

类似文章

引用人

工具书类

    1. Schoen F.J.,Levy R.J.组织心脏瓣膜替代物钙化:理解和预防进展。胸外科年鉴。2005;79(3):1072–1080. doi:10.1016/j.athoracsur.2004.06.033。-内政部-公共医学
    1. Yabusaki K.、Hutcheson J.D.、Vyas P.等人。对人类瓣膜组织中钙化颗粒的量化揭示了钙化主动脉瓣疾病发展的不对称性。心血管医学前沿。2016;3:1–10. doi:10.3389/fcvm.2016.00044。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Cheek J.D.、Wirrig E.E.、Alfieri C.M.、James J.F.、Yutzey K.E.黏液瘤性和钙化性主动脉瓣疾病小鼠模型中瓣膜生成、软骨生成和成骨通路的差异激活。分子与细胞心脏病学杂志。2012;52(3):689–700. doi:10.1016/j.yjmcc.2011.12.013。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Shen M.、Tastet L.、Capoulade R.等。年龄和主动脉瓣解剖对主动脉瓣钙化和血流动力学严重程度的影响。心。2017;103(1):32–39. doi:10.1136/hartjnl-2016-309665。-内政部-公共医学
    1. Acharya A.、Hans C.P.、Koenig S.N.等。Notch1在钙化性主动脉瓣疾病中的抑制作用。公共科学图书馆一号。2011;6(11,文章e27743)doi:10.1371/journal.pone.0027743。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学