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.2020年6月；21(6):2395-2404.
doi:10.3892/mmr.20.11069。 Epub 2020年4月10日。

环状RNA Circ100084作为miR‑23a‑5p的海绵调节肝细胞癌中IGF2的表达

杨杰（音译） 1, 李颖 2, 左村于 1, 周月芬 三, 屠剑飞 4, 建楼 三, 王永辉 三
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环状RNA Circ100084作为miR‑23a‑5p的海绵调节肝细胞癌中IGF2的表达

杨杰（音译）等。 分子医学代表. 2020年6月.

摘要

肝细胞癌（HCC）已成为全球癌症相关死亡的主要原因。环状RNA（circRNAs）是在多种癌症中起重要作用的非编码RNA。然而，circRNAs在肝细胞癌中的作用尚不清楚。在本研究中，从基因表达综合数据库下载了肝癌样本的circRNA微阵列数据集GSE97332。数据预处理后，使用GEO2R测定肝癌组织和正常组织之间差异表达的circRNAs。circRNA-miRNA相互作用由miRanda数据库预测。miRTarbase数据库用于搜索miRNAs的靶基因。基于获得的circRNA、miRNA和mRNA，使用Cytoscape构建了一个circRNA‑miRNA‑mRNA网络。在该网络中，上调的circRNAhsa_circRNA_100084‑hsa‑miR‑23a‑5p‑胰岛素样生长因子2（IGF2）参与竞争性内源性关系。通过逆转录定量PCR验证了hsa_circRNA_100084、hsa‑miR‑23a‑5p和IGF2在肝癌组织和肝癌细胞中的差异表达。此外，通过双荧光素酶报告子分析验证了hsa‑miR‑23a‑5p与hsa_circRNA_100084和IGF2之间的相互作用。敲低hsa_circRNA_100084可抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭，同时IGF2的过度表达可逆转hsa_carcRNA_300084敲低的效应。结果表明，hsa_circRNA_100084可以作为hsa‑miR‑23a‑5p在肝癌细胞中的海绵，促进IGF2的表达。

关键词：肝细胞癌；环状rna；mirna；海绵。

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数字

图1。
图1。
肝癌样本中DE-circRNA与邻近肝组织的比较。（A） 显示DE-circRNAs的火山图。（B） 热图显示前10个上调的circRNA和前10个下调的circRNAs。DE，差异表达；circRNAs，环状RNAs。
图2。
图2。
差异表达的circRNAs、miRNAs和靶基因之间的竞争性内生网络。circRNAs，环状RNAs；miRNA、微小RNA。
图3。
图3。
肝癌组织和肝癌细胞中hsa_circ_100084和hsa-miR-23a-5p的相对表达水平。（A） RT-qPCR检测37对肝癌组织及癌旁非癌组织中Hsa_circ_100084和Hsa-miR-23a-5p的表达。通过Student t检验分析两组之间的比较**P<0.01。（B） 对正常肝细胞LX2和具有不同转移能力的肝癌细胞系（Hep3B、HepG2和MHCC97H）的hsa_circ_100084_和hsa-miR-23a-5p进行qPCR分析。采用单因素方差分析和LSD事后分析进行多组间的比较**与正常细胞系LX2相比P<0.01；##与Hep3B和HepG2相比，P<0.01。肝细胞癌；RT-qPCR，逆转录定量PCR。
图4。
图4。
IGF2在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达。（A） 人类HCC样本中IGF2免疫组化染色的代表性图像。（B） 肝癌及癌旁组织中IGF2阳性细胞的百分比。给出的值是五幅不同图像的平均值±标准偏差（放大倍数，×40）。通过Student t检验分析两组之间的比较**P<0.01。（C） RT-qPCR检测37对肝癌组织及邻近非肿瘤组织中IGF2的表达。通过Student t检验分析两组之间的比较**P<0.01。（D） 正常肝细胞LX2和肝癌细胞株中IGF2表达的qPCR分析。采用单因素方差分析和LSD事后分析进行多组间的比较*与正常细胞LX2相比，P<0.05，**P<0.01；#与Hep3B和HepG2相比，P<0.05。（E） 4对HCC组织及邻近非肿瘤组织中IGF2的western blot分析。（F） 正常肝细胞LX2和肝癌细胞株中IGF2的western blot分析。GAPDH被用作内部控制。胰岛素样生长因子2；肝细胞癌；RT-qPCR，逆转录定量PCR。
图5。
图5。
hsa_circ_100084、hsa-miR-23a-5p和IGF2之间的关系。（A） 用sh-hsa_circ_100084或hsa-miR-23a-5p模拟物转染后hsa_circ_00084和hsa-miR-23a-5p的相对表达。（B） 推测hsa_circ_100084、hsa-miR-23a-5p和IGF2之间的结合位点。（C） 与hsa-miR-23a-5p模拟物共同转染的LUC-circ100084-WT、LUC-IGF2-WT，LUC-circ100084-突变或LUC-IGF-2-突变的荧光素酶活性。（D） 用sh-hsa_circ_100084转染或联合转染hsa-miR-23a-5p mimics和sh-hsa_circ_1100084后hsa-miR-23a-5p和IGF2的相对表达。所有数据均代表三个独立实验，并表示为平均值±标准偏差。两组之间的比较采用Student t检验进行分析，而多组之间的比较采用单因素方差分析和LSD事后分析进行**与正常对照组相比P＜0.01。
图6。
图6。
Hsa_circ_100084通过调节IGF2调节肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。（A） CCK-8法检测HepG2细胞增殖。（B-D）Transwell分析确定HepG2细胞中的细胞迁移和侵袭。放大倍数，×200。所有数据均代表三个独立实验，并表示为平均值±标准偏差。两组之间的比较采用Student t检验进行分析，而多组间的比较采用单因素方差分析和LSD事后分析**与NC相比，P<0.01。
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