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.2020年4月；21(4):1709-1716.
doi:10.3892/mmr.2020.10978。 Epub 2020年2月6日。

长非编码RNA H19通过激活PI3K/AKT和ERK/p38通路保护H9c2细胞免受缺氧诱导的损伤

林慧媛 # 1, 余雷涛 # 2, 张静 1, 周志东 1, 常丽 1, 滨州 1, 胡小兰 1, 徐国海 1, 燕华堂 三
附属公司

长非编码RNA H19通过激活PI3K/AKT和ERK/p38通路保护H9c2细胞免受缺氧诱导的损伤

林慧媛等。 分子医学代表. 2020年4月.

摘要

由于严重缺氧，心肌缺血/再灌注损伤常常导致不良的心血管结局。本研究旨在评估长非编码RNA H19（H19）对缺氧诱导损伤大鼠H9c2细胞的作用及其机制。用慢病毒感染H9c2细胞，以1:100的感染倍数表达H19或H19靶向短发夹RNA（shRNA）或其各自的对照。通过反转录定量PCR检测H19的表达。通过流式细胞术分析不同组细胞凋亡水平、细胞周期分布和线粒体膜电位，诱导和评估缺氧损伤。用western blotting分析PI3K/AKT和ERK/p38信号通路的表达。研究发现，缺氧刺激H9c2细胞凋亡，诱导G1期细胞周期阻滞，增加线粒体去极化率。与缺氧模型组相比，H19过度表达组的细胞凋亡率显著降低（P=0.016），G1细胞群较小，S期细胞群较高（分别为P=0.018和P=0.031），线粒体去极化率下降（P=0.036）。相比之下，H19 shRNA组表现出相反的趋势，表明H19的过度表达减轻了缺氧诱导的损伤，H19的敲除加重了缺氧诱导损伤。目前的机制研究表明，H19可能通过激活PI3K/AKT和ERK/p38通路来减轻缺氧诱导的细胞损伤。本研究结果表明，H19可能通过激活PI3K/AKT和ERK/p38通路减轻缺氧诱导的心肌细胞损伤。

关键词：长非编码rna H19；心肌缺血/再灌注损伤；击倒；Pi3K/aKT；丝裂原活化蛋白激酶。

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数字

图1。
图1。
不同组H19表达的逆转录定量PCR分析。正常对照组细胞在常压下培养。在缺氧条件下培养48小时后，收集模型对照组和不同感染组（空白表达、H19表达、H19-干扰和空白干扰）的细胞。模型对照组、空白表达组、空白干预组和正常对照组H19表达水平相似（均P>0.05）。与模型对照组相比，H19表达组的H19表达显著增加（P=0.015），H19干扰组的H19表达显著减少（P=0.023）。使用2-ΔΔCq方法。以U6作为内部对照，计算H19的相对表达。所有样品均一式三份*与模型组相比，P<0.05。H19，长非编码RNA H19。
图2。
图2。
缺氧诱导的H9c2细胞凋亡因H19敲低而加重，并因H19过表达而减轻。正常对照组细胞在常压下培养。在缺氧条件下培养48小时后，收集模型对照组和不同感染组（H19表达、空白表达、H19干扰和空白干扰）的细胞。流式细胞术检测细胞凋亡水平。所有样品均一式三份*与正常组相比，P<0.05，**P<0.01；#与模型组相比，P<0.05。H19，长非编码RNA H19；PI，碘化丙啶。
图3。
图3。
流式细胞术分析H9c2细胞的细胞周期分布。正常对照组细胞在常压下培养。在缺氧条件下培养48小时后，收集模型对照组和不同感染组（H19表达、空白表达、H19干扰和空白干扰）的细胞。对G1期细胞百分比进行量化。所有样品均一式三份*与正常组相比P<0.05；#与模型组相比，P<0.05。PE，藻红蛋白；RMS，均方根；频率，频率；CV，变异系数；H19，长非编码RNA H19。
图4。
图4。
缺氧诱导的线粒体膜去极化因H19过度表达而减少，并因H19干扰而增强。正常对照组细胞在常压下培养。在缺氧条件下培养48小时后，收集模型对照组和不同感染组（H19表达、空白表达、H19干扰和空白干扰）的细胞。用流式细胞术测定线粒体去极化率。所有样品均一式三份*与正常组相比，P<0.05，**P<0.01；#与模型组相比，P<0.05。H19，长非编码RNA H19；FL，荧光。
图5。
图5。
H19调节PI3K/AKT和ERK/p38通路。正常对照组细胞在常压下培养。在缺氧条件下培养48小时后，收集模型对照和不同感染组（H19表达、空白表达、H19干扰和空白干扰）中的细胞。以β-actin为内对照，采用免疫印迹法测定p-PI3K、p-AKT、p-ERK1/2、p-p38、PI3K，AKT、ERK1/2和p38的表达水平。所有样品均一式三份*与正常组相比P<0.05；#与模型组相比，P<0.05。H19，长非编码RNA H19；p-，磷酸化。
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