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.2020年6月;45(6):1909-1917.
doi:10.3892/ijmm.2020.4559。 Epub 2020年3月31日。

坐骨神经远端损伤后糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B表达的改变

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坐骨神经远端损伤后糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B表达的改变

郑亚妮(Yani Zheng)等。 国际分子医学杂志. 2020年6月.

摘要

糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B(GPNMB)对肌萎缩侧索硬化和中枢神经系统脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用。然而,GPNMB在周围神经系统中的表达和功能,尤其是在周围神经损伤后,尚不清楚。在本研究中,在横断后第0、1、3、7、14、21和28天,通过微阵列分析分析坐骨神经远端的mRNA和长非编码RNA。结果表明,GPNMB mRNA的表达与远端急性失神经雪旺细胞(SCs)的增殖趋势相似,其结果通过逆转录定量聚合酶链反应、western blot分析和免疫组织化学进一步验证。为了研究GPNMB对SCs的作用,将重组人GPNMB(rhGPNMB)加入培养的离断坐骨神经远端残端失神经SCs中。随后检测神经营养因子(NTFs)和神经粘附分子(NAMs)的增殖、表达和分泌。结果表明,在体内横断坐骨神经后,GPNMB在坐骨神经远端的表达增加,而在体外,rhGPNMB促进SCs的增殖以及NTFs和NAMs的表达和分泌。因此,GPNMB可能是一种新的外周神经再生策略。

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数字

图1
图1
横断后第0、1、3、7、14、21和28天坐骨神经远端微阵列数据的生物信息学分析。(A) 基因本体论和(B)《京都基因百科全书》和基因组通路分析表明,第41种基因型可能与横断后的细胞增殖有关。(C) 热图和聚类dendogram显示76个mRNA在损伤后7个指示时间点有显著差异表达。右侧的色标显示了所有样本中mRNA的相对表达水平:红色表示表达>0,绿色表示表达<0。
图2
图2
横断后连续时间点坐骨神经远端GPNMB的验证。(A) 采用逆转录定量PCR(n=6)、western blot(B和C)和免疫组织化学(D-J)方法检测GPNMB的表达。黑色箭头表示GPNMB在神经纤维周围表达。*与第0天相比,P<0.05。采用单向方差分析和Tukey事后检验进行分析。GPNMB,糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B。
图3
图3
SCs的细胞增殖(n=6)。用rhGPNMB治疗后,SC增殖逐渐增加,呈剂量依赖性。*与0 nM相比,P<0.05。#与10毫微米相比,P<0.05。$与50毫微米相比,P<0.05。采用单向方差分析和Tukey事后检验进行分析。SCs、雪旺细胞;重组人糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B。
图4
图4
rhGPNMB治疗后SCs中NGF、BDNF和NT-3的表达和分泌。(A) 采用逆转录定量PCR(n=6)、western blot(B和C)和ELISA(D-F)检测雪旺细胞中NGF、BDNF和NT-3的表达水平。*与0nM相比P<0.05,#与10毫微米相比,P<0.05。$与50毫微米相比,P<0.05。采用单向方差分析和Tukey事后检验进行分析。神经生长因子;脑源性神经营养因子;神经营养素3;重组人糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B。
图5
图5
rhGPNMB治疗后雪旺细胞中NCAM和N-钙粘蛋白的表达和分泌。(A) 采用逆转录定量PCR(n=6)、western blot(B和C)和ELISA(D和E)检测NCAM和n-cadherin的表达。*与0毫微米相比,P<0.05。#与10毫微米相比,P<0.05。$与50毫微米相比,P<0.05。采用单向方差分析和Tukey事后检验进行分析。NCAM,神经细胞粘附分子;N-钙粘蛋白;重组人糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B。

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