跳到主页面内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2020年1月31日；13(1):9.
doi:10.1186/s13045-020-0844-0。

MiR-509-3通过调节HGSOC PDX模型中HR修复增加PARPi的合成致死率

孙呈功 1 2, 曹文宇 1 2, 邱春平 1 2, 李成成 1 2, 萨米娜·多戈尔 1 2, 张志伟 1 2, 董瑞芬 1 2, 宋坤 1 2, 杨兴盛 1 2, Qing Zhang（张青） 三 4, 北华港 5 6
附属公司

MiR-509-3通过调节HGSOC PDX模型中HR修复增加PARPi的合成致死率

孙呈功等。 血液肿瘤杂志. .

摘要

背景：PARP抑制剂是最有希望的靶向药物，在卵巢癌患者中已被广泛证明具有疗效。虽然铂反应、HR相关基因或HRD基因组瘢痕检测可用于评估奥拉帕布反应，但目前的方法仍存在明显的局限性。因此，我们旨在研究更准确的方法来预测奥拉帕布的敏感性和有效的协同治疗策略。

方法：我们探索了两个数据库（TCGA和齐鲁医院），以寻找与铂敏感性或HR相关基因相关的新miRNA。利用体外或体内细胞实验和PDX模型验证其在肿瘤抑制和Olaparib致敏中的作用。此外，通过WES分析HR基因突变，探讨HR基因变异与Olaparib反应的关系。

结果：在两个独立的卵巢癌患者队列中，miR-509-3高表达表明对铂的反应更好，无进展生存期更长，总体生存期更长（miR-509-1高表达与低表达；PFS:TCGA P<0.05，齐鲁P<0.05；OS:TCGA P<0.05，齐鲁P<0.01）。MiR-509-3可通过直接靶向HMGA2和RAD51，在体内外降低卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，但提高其对Olaparib的敏感性。在两例PDX患者（PDX1和PDX9）中，miR-509-3可显著提高对奥拉帕布的敏感性，同时降低RAD51阳性率（平均肿瘤重量NC+Olaparib vs.miR-509+Olapasib；PDX1 P<0.05，PDX9 P<0.05）。此外，在PDX8中，miR-509-3治疗通过下调RAD51的表达，显著逆转了奥拉帕尼的不敏感性（P<0.05）。RAD51功能检测显示，治疗组中所有Olaparib敏感病例的RAD51阳性率均较低（低于50%）。此外，在四名HR基因突变患者中，三名患者携带HR核心基因突变，对奥拉帕布敏感，而另一名非HR核心突变患者对奥拉帕布反应不佳。

结论：MiR-509-3通过抑制HR使卵巢癌细胞对奥拉帕布敏感，这使其成为PARPi协同治疗的潜在靶点。HR核心基因分析和RAD51功能检测在预测PARPi反应方面具有前瞻性的可行性。

关键词：PARPi；PDX；RAD51；合成致命性；miR-509-3。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明，他们没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
P-sen组MiR-509-3显著升高，提示预后较好。一根据临床数据，TCGA队列被分为两组：铂敏感组(n个 = 159）和铂耐药组(n个 = 140). 通过DEGseq R软件包绘制热图，显示了两组之间6个最高增加的miRNA和6个最高减少的miRNA。b条在TCGA队列中，与铂耐药组相比，铂敏感组MiR-509-3表达升高(P（P） < 0.05).c（c）总生存率（OS）和d日miR-509-3低表达或高表达的TCGA队列生存曲线中的无进展生存率（PFS） = 0.644，95%置信区间（CI） = 0.48至0.99 vs.危害比 = 1.551，95%置信区间 = 1.008至2.083，P（P） < 0.04; PFS，危险比 = 0.708，95%置信区间 = 0.546至0.956 vs.危害比 = 1.412，95%置信区间 = 1.045至1.829，P（P） < 0.02).e（电子）采用RT-qPCR方法检测齐鲁医院126例HGSOC患者miR-509-3的相对表达水平。铂敏感组的miR-509-3表达水平高于铂耐药组(P（P） < 0.01).（f）操作系统和克齐鲁医院队列中的PFS被分层为miR-509-3低表达组和高表达组，其临界值由中等水平定义（高表达与低表达：OS，危险比 = 0.550，95%置信区间 = 0.334至0.830 vs.危害比 = 1.817，95%置信区间 = 1.205至2.987，P（P） = 0.007; PFS，危害比 = 0.657，95%置信区间 = 0.432至0.929与危险比 = 1.522，95%置信区间 = 1.076至2.314，P（P） = 0.024)
图2
图2
MiR-509-3抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭。一用miR-509-3模拟物转染A2780、HEY和UWB1.289后的细胞周期分析。miR-509-3显著增加了A2780、HEY和UWB1.289细胞系中G0/G1期的百分比。b条三种卵巢癌细胞的MTT和平板克隆形成试验。MiR-509-3降低了不同时间点（第2天到第5天）的相对细胞活力和6孔板中的细胞克隆数。c（c）采用Transwell分析法测定miR-509-3过表达对A2780、HEY和UWB1.289细胞迁移和侵袭的影响。MiR-509-3减少了迁移细胞的数量。d日裸鼠腹腔内HEY或UWB 1.289肿瘤形成试验。MiR-509-3降低了腹部转移的数量（HEY，15.33 ± 2.40比7.33 ± 1.20,P（P） < 0.05; UWB1.289 27号机组 ± 4.35对9 ± 1.55,P（P） < 0.05）和肿瘤负担（HEY，0.52 ± 0.07与0.25 ± 0.04,P（P） < 0.05; 乌干达比尔.289 0.39 ± 0.07与0.15 ± 0.02,P（P） < 0.05）。红色箭头表示肿瘤转移结节。e（电子）miR-509-3过度表达细胞中EMT和细胞周期相关标记的Western blot。MiR-509-3显著下调ZEB1、N-cad、β-Catenin、Vimentin、Snail和Slug的表达，但上调E-cad的表达。G0/G1阻滞相关标记物CDK4、CDK6、CCND1和p21也下调
图3
图3
MiR-509-3增强卵巢癌细胞对体内顺铂和奥拉帕布的敏感性体外.一HEY和UWB1.289暴露于不同剂量顺铂至少36 h后，用MTT法测定其相对细胞活力。MiR-509-3降低了不同药物浓度下的相对细胞活力（HEY:2,4,8μg/mL，P（P） < 0.05; UWB1.289:2,4,8μg/mL，P（P） < 0.05）。b条用不同剂量奥拉帕尼（HEY:10，20，30，40，80μM；UWB1.289:20，40，80，120，160μM）处理48小时以上的HEY和UWB1.289的相对细胞活力。MiR-509-3增加了HEY对奥拉帕布的反应（10、20、30、40μM，P（P） < 0.05）和UWB1.289（20、40、80μM，P（P） < 0.05）细胞株。c（c）BALB/c裸鼠肿瘤形成试验的实验设计。将HEY或UWB1.289细胞（8 × 106第六周，荷瘤小鼠腹腔注射Olaparib（50 mg/kg，每天一次）2周，然后处死以容纳肿瘤组织，称重并拍照。d日,e（电子）在小鼠出生后第八周，显示各组的肿瘤，并比较四组的肿瘤重量（数据均为平均值 ± SD、，n个 = 5） 在HEY和UWB1.289中。Olaparib和miR-509-3联合治疗显示四个亚组中肿瘤重量（g）最低（HEY，0.76 ± 0.05, 0.39 ± 0.14, 0.33 ± 0.14, 0.12 ± 0.06; UWB1.289、1.02 ± 0.17、0.48 ± 0.26, 0.41 ± 0.14, 0.15 ± 0.008)
图4
图4
HMGA2和RAD51是miR-509-3的直接靶点。一HMGA2 3'UTR中的推定结合位点。有三个推测的miR-509-3结合位点，结合序列被删除为突变型，分别克隆到pmirGLO载体中。b条HEK293T细胞用于双球荧光素酶检测系统。带有野生型HMGA2 3′UTR的pmirGLO质粒在HEK293T细胞（位点2，P（P） < 0.001; 站点3，P（P） < 0.0001).c（c）miR-509-3与HMGA2的相关性。在RT-qPCR检测肿瘤样本中，HMGA2 mRNA相对水平与miR-509-3水平呈负相关（Pearson第页 = − 0.3844,P（P） = 0.015).d日——（f）展示了对RAD51的类似研究，并得出结论，miR-509-3也直接针对RAD51。克,小时miR-509-3过度表达细胞中HMGA2和RAD51 mRNA水平。当细胞转染A2780、HEY和UWB1.289中的miR-509-3模拟物时，相对mRNA表达下调。我Western blot分析表明，miR-509-3显著降低了HEY和UWB1.289中HMGA2和RAD51的蛋白表达水平。小时皮下肿瘤的IHC代表性图像。肿瘤组织用福尔马林固定，切割成4μm厚的切片，用HMGA2或RAD51一抗孵育。miR-509-3可降低HEY和UWB1.289的IHC图像中HMGA2和RAD51的表达
图5
图5
MiR-509-3通过下调RAD51并损害卵巢癌细胞中的HMGA2-ATM轴来增加对Olaparib的敏感性。一,b条HEY和UWB1.289的相对细胞存活率，这两个细胞被两个HMGA2 siRNAs转染，然后按照之前的浓度梯度用Olaparib处理48小时。活性曲线表明HMGA2下调显著增强了细胞对Olaparib的反应。c（c）Western blot分析证实了两种HMGA2 siRNA的干扰效率。总ATM和活化ATM蛋白水平均随着HMGA2的下调而降低。d日HMGA2和ATM蛋白的共免疫沉淀。将HEY细胞裂解并与兔抗人HMGA2多克隆抗体或正常兔IgG混合。抗-HMGA2抗体可协同免疫沉淀ATM和HMGA2，而免疫球蛋白G（IgG）无作用。e（电子）,（f）HMGA2对Olaparib反应的拯救作用。转染HMGA2 cDNA（pEnter载体）可以消除miR-509-3诱导的Olaparab对HEY和UWB1.289细胞系中Olaparab的敏感性。用四种颜色绘制不同组的细胞存活曲线。克四个救援组的蛋白质水平。对于四个治疗组，HMGA2 cDNA的转染确实可以上调HMGA2蛋白水平，并且通过上调miR-509-3过表达细胞中HMGA2的表达来挽救ATM总表达下调。小时用不同剂量（0，2，4，6Gy）的miR-509-3或NC照射HEY和UWB1.289细胞，诱导DNA损伤和修复系统。MiR-509-3过表达组明显显示ATM-CHK1/2通路（phospho-ATM、phosphoy-CHK1、phosphal-CHK2和phosphan-H2AX.）和RAD51的蛋白质水平较低。我HEY和UWB1.289中RAD51焦点的中频图像。用4Gy照射细胞，4h后，通过IF摄影检测到RAD51功能性核病灶的形成，发现miR-509-3显著降低了RAD51的功能性核灶形成。细胞核用DAPI染色（蓝色）
图6
图6
PDX模型中已确定PDX病例和Olaparib或miR-509-3治疗反应的基因组特征。一卵巢癌驱动基因突变的病例景观。通过WES对9名登记患者的肿瘤和配对正常组织进行测序，并注释了157个与卵巢癌和/或乳腺癌易感性或肿瘤发生相关的基因。9例PDX患者的情况显示这些HGSOC患者的主要突变基因。TP53突变率为88.89%（8/9）。b条病例HR途径基因突变景观。景观显示44.44%（4/9）的病例存在HR基因突变，其中BRCA1/2占75%（3/4）。c（c）本研究中PDX模型的建立和应用程序。P0肿瘤组织取自妇科手术，作为P1植入皮下。在治疗组（P3）中，在一周内腹腔注射AAV-miR-509-3或AAV-NC两次，然后每天一次用Olaparib（50 mg/kg）治疗2周。d日miR-509-3致敏的典型病例。PDX1和PDX9是miR-509-3能够提高Olaparib敏感性的代表性病例（NC+DMSO、NC+Olaparab或miR-509-3+Olapasib组的平均肿瘤重量分别为：PDX1、1.073 ± 0.244, 0.553 ± 0.135, 0.143 ± 0.042；PDX9，0.973 ± 0.195, 0.570 ± 0.087, 0.183 ± 0.110). NCG小鼠腹部肿瘤部位周围有红色斑点。e（电子）总结每个PDX病例的详细特征，包括治疗状态、样本来源、HR基因突变状态、内源性miR-509-3表达、HMGA2阳性率、RAD51阳性率和三个治疗组的平均肿瘤重量（以平均值表示 ± SD）。在本图中，标签“*”表示该病例对奥拉帕利敏感。标签“#”表示miR-509-3具有敏化作用
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Siegel RL、Miller KD、Jemal A.癌症统计，2019年。CA癌症临床杂志。2019;69(1):7–34. doi:10.3322/caac.21551。-内政部-公共医学
    1. Bookman MA。卵巢癌的最佳初级治疗。安·昂科尔（Ann Oncol）。2016;27（补充1）：i58–i62。doi:10.1093/annonc/mdw088。-内政部-公共医学
    1. Vaughan S，Coward JI，Bast RC，Jr，Berchuck A，Berek JS，Brenton JD等。重新思考卵巢癌：改善预后的建议。Nat Rev癌症。2011;11(10):719–725. doi:10.1038/nrc3144。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Roos WP、Thomas AD、Kaina B.癌症生物学中DNA损伤和生存与死亡之间的平衡。Nat Rev癌症。2016;16(1):20–33. doi:10.1038/nrc.2015.2。-内政部-公共医学
    1. Pilie PG、Tang C、Mills GB、Yap TA。针对癌症中DNA损伤反应的最新策略。Nat Rev临床肿瘤学。2019;16(2):81–104. doi:10.1038/s41571-018-0114-z。-内政部-公共医学

出版物类型

MeSH术语