跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2020年1月22日；11(1):43.
doi:10.1038/s41419-020-2250-5。

外显子传递miR-567通过抑制乳腺癌中的ATG5逆转曲妥珠单抗耐药性

韩明丽 1, 建国湖 2, 鹏威路 1, Hui Cao公司 3, 赵瑜 4, 李祥科 5, 钱学科 1, 薛扬（音译） 1, 杨云清 1, Na Han（南韩） 1, 东威窦 1, 范张（音译） 6, 叶慕林 6, 长城杨 7, 顾远亭 8, 华蓥洞 9
附属公司

外显子传递miR-567通过抑制乳腺癌中的ATG5逆转曲妥珠单抗耐药性

韩明丽等。 细胞死亡病. .

缩回

摘要

曲妥珠单抗通常用于治疗人类表皮生长因子受体-2阳性（HER-2+）乳腺癌，但其疗效往往因出现化疗耐药性而受到限制。最近的研究表明，外泌体作为异质性肿瘤细胞群体之间交换遗传物质的载体，对癌症的发展和进展产生传播耐药性。然而，人们对乳腺癌来源的外泌体的具体作用知之甚少。在本研究中，利用来自乳腺癌的公开表达谱数据和生物信息学分析来筛选trastuzumab耐药的潜在miRNAs。进行了一系列获得或失去功能的分析，以确定miR-567和ATG5在体外和体内对曲妥珠单抗的耐药性和自噬中的功能。我们的结果表明，与有反应的患者相比，耐曲妥珠单抗患者的miR-567显著降低。此外，与亲代细胞相比，耐曲妥珠单抗细胞中miR-567也下调。miR-567的过度表达逆转了化疗耐药，而miR-566的沉默在体内外均诱导了曲妥珠单抗的耐药。此外，增强的miR-567可以被包装成外显体，并入受体细胞，通过靶向ATG5抑制自噬并逆转化疗耐药性。总之，外体miR-567通过调节自噬在逆转曲妥珠单抗耐药性中起着关键作用，这表明它可能是乳腺癌患者有希望的治疗靶点和预后指标。

PubMed免责声明

利益冲突声明

提交人声明他们没有利益冲突。

数字

图1
图1。miR-567在耐曲妥珠单抗的乳腺癌中上调。
一,b条原始微阵列数据下载自GEO，GSE104076(n个 = 8). 然后，对原始数据进行归一化，这些GEO数据集中前20个失调的miRNA如所示一和b条.c（c）通过分析GEO数据集显示miR-567在曲妥珠单抗耐药细胞或敏感细胞中的表达。d日通过qRT-PCR评估miR-567在乳腺癌细胞中的表达水平**P（P） < 0.01.e（电子）在对曲妥珠单抗治疗有反应或无反应的乳腺癌患者中测定miR-567水平*P（P） < 0.05之间。（f）与正常组织相比，乳腺癌组织中miR-567表达下调*P（P） < 0.05之间。克显示了高miR-567组和低miR-566组对曲妥珠单抗治疗有反应的患者比例。小时使用TCGA数据库分析乳腺癌组织与非癌组织中miR-567的表达**P（P） < 0.01.我通过分析TCGA数据，miR-567高表达水平与乳腺癌患者的总体生存率较差相关。
图2
图2。MiR-567在体外逆转乳腺癌细胞对曲妥珠单抗的耐药性。
一,b条miR-567沉默(一)或过度表达(b条)通过转染各自的载体**P（P） < 与对照组相比，0.01。c（c）沉默miR-567诱导的父母癌细胞对曲妥珠单抗的耐药性*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01.d日miR-567的增加增加了曲妥珠单抗耐药细胞的化疗敏感性*P（P） < 0.05之间。e（电子）,（f）EdU染色显示miR-567的过度表达抑制了细胞增殖(e（电子）)而miR-567的敲除促进了细胞增殖(（f）); 比例尺：10 微米*P（P） < 与对照组相比，0.05。克,小时TUNEL分析显示miR-567诱导细胞凋亡(克)而miR-567的沉默抑制了细胞凋亡(小时); 比例尺：10 μm时，P（P） < 与对照组相比，0.05。
图3
图3。miR-567提高了曲妥珠单抗体内治疗的化疗敏感性。
一实验设计的示意图大纲。b条miR-567沉默对SKBR-3细胞移植瘤生长的影响。如左图所示的肿瘤和如右图所示的肿瘤生长的代表性图像*P（P） < 0.05之间。c（c）miR-567过表达对SKBR-3-TR细胞移植瘤生长的影响。左侧显示的肿瘤代表性图像和右侧显示的肿瘤生长*P（P） < 0.05之间。d日来自SKBR-3细胞的肿瘤样本的代表性图像，用免疫组织化学Ki67染色（IHC，左面板）并量化（右面板）；比例尺：50 微米**P（P） < 与对照抑制剂相比为0.01。e（电子）取自SKBR-3-TR细胞的肿瘤样本的代表性图像，经IHC Ki67染色（左面板）并量化（右面板）；比例尺：50 微米**P（P） < 与控制模拟相比为0.01。
图4
图4。miR-567抑制曲妥珠单抗诱导的自噬。
一Western blotting显示，与亲代细胞相比，曲妥珠单抗耐药细胞的自噬活性增加，LC3-II水平升高，p62蛋白水平降低。b条转染GFP-LC3质粒48天后 h、 共聚焦显微镜观察到绿色荧光LC3点；比例尺：10 微米**P（P） < 与亲代细胞相比为0.01。c（c）透射电镜（TEM）观察自噬体。显示有代表性的图像，并量化每个细胞的自噬体；比例尺：10 微米**P（P） < 与亲代细胞相比为0.01。d日在SKBR-3-TR和BT474-TR细胞中进行Western blotting，用或不用30 μM CQ。e（电子）在用或不用CQ处理的细胞中检测到细胞活力**P（P） < 0.01.（f）通过免疫印迹法测定miR-567过度表达的耐药细胞中LC3和p62的表达水平。克在用miR-567沉默的亲代细胞中通过蛋白质印迹测量LC3和p62的表达水平。小时用GFP-LC3质粒和小RNA寡核苷酸转染乳腺癌细胞。然后，观察到绿色荧光LC3点；比例尺：10 微米**P（P） < 与对照组相比为0.01。我通过透射电镜在小RNA寡核苷酸处理的细胞中检测到自噬体；比例尺：10 μm**P（P） < 与对照组相比为0.01。
图5
图5。ATG5是乳腺癌中miR-567的直接靶点。
一miR-567和ATG5的3′-UTR形成的假想双工器示意图。b条测定转染miR-567模拟物的细胞中的相对荧光素酶活性*P（P） < 0.05, **P（P） < 与控制模拟相比为0.01。c（c）通过western blotting显示ATG5在曲妥珠单抗耐药细胞或亲本细胞中表达。d日,e（电子）分别用qRT-PCR和western blotting检测ATG5转录和蛋白水平；P（P） < 与对照组相比，0.01。（f）在对曲妥珠单抗治疗有反应或耐药的患者的原发性乳腺癌组织中检测到ATG5 mRNA水平。克采用Spearman相关试验验证miR-567和ATG5 mRNA表达之间的相关性*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01.
图6
图6。MiR-567通过抑制ATG5和自噬逆转曲妥珠单抗耐药性。
一Western blotting显示，ATG5沉默可逆转miR-567抑制诱导的SKBR-3-TR细胞LC3上调和p62下调。b条ATG5的敲除消除了miR-567抑制剂诱导的SKBR-3-TR细胞LC3点形成**P（P） < 与相比0.01miR-567型抑制剂 + 硅-碳组。c（c）蛋白质印迹显示，增加的ATG5逆转了miR-567模拟物诱导的SKBR-3-TR细胞中LC3的抑制和p62的增加。d日ATG5的过度表达逆转了miR-567模拟物诱导的SKBR-3细胞LC3点抑制**P（P） < 与相比0.01miR-567型 + p-NC公司组。e（电子）CCK8测定显示，敲低ATG5显著逆转曲妥珠单抗耐药性**P（P） < 0.01.（f）ATG5水平升高诱导SKBR-3和BT474细胞对曲妥珠单抗的化疗耐药*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01.克,小时敲除ATG5逆转miR-567抑制剂引起的化疗耐药性(克)而ATG5的过度表达消除了miR-567模拟物诱导的化疗敏感性(小时).
图7
图7。细胞外miR-567被包装成外泌体。
一细胞外miR-567通过同时用RNAse A和Triton处理而降解**P（P） < 与RNase A组相比为0.01。b条TEM扫描显示SKBR-3-TR和BT474-TR细胞释放的外体图像；比例尺：200 纳米。c（c）用Zetasizer分析外显子的大小分布。d日通过纯化外显体和外显体缺失细胞提取物的western blotting检测外显体蛋白标记物（TSG101和HSP70）。e（电子）培养基和外显子中miR-567表达的qRT-PCR分析。（f）qRT-PCR分析表明，与敏感细胞相比，曲妥珠单抗耐药细胞外体miR-567下调*P（P） < 0.05之间。
图8
图8。外显子介导的miR-567转移逆转曲妥珠单抗耐药性。
一用PKH26染料标记的单个外泌体在不同细胞系间的细胞间转运；比例尺：10 微米。b条MCF-10A细胞来源的外泌体处理增加miR-567水平；然而，当用miR-567沉默MCF-10A细胞时，这种增加被消除*P（P） < 0.05之间。c（c）Western blotting显示，经MCF-10A衍生外体处理的细胞可诱导自噬。d日CCK8分析表明，MCF-10A衍生的外泌体在SKBR-3-TR和BT474-TR细胞中诱导了化疗敏感性*P（P） < 0.05之间。e（电子）纳米颗粒追踪分析经nSMase处理的SKBR-3-TR细胞外泌体的大小分布和数量，GW4869**P（P） < 与DMSO组相比为0.01。（f）CCK8分析表明，用GW4869处理的MCF-10A细胞的外泌体培养未能逆转曲妥珠单抗对受体细胞的耐药性。克CCK8分析证实miR-567的沉默抑制了共同培养的亲代细胞获得化学反应的能力。小时拟议机制的方案。MCF-10A细胞中高表达的miR-567通过包装进入外泌体分泌。然后，将细胞外miR-567并入受体细胞，抑制自噬，并通过抑制ATG5表达逆转化疗耐药性。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Scott Lia C.、Mobley Lee R.、Kuo Tzy‐Mey、Il'yasova Dora。美国三阴性乳腺癌差异的最新情况：美国癌症统计数据库2010年至2014年的一项基于人群的研究。癌症。2019;125(19):3412–3417. doi:10.1002/cncr.32207。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Ziaeemehr A等。乳腺癌患者HER-2/neu过度表达中腋窝淋巴结受累的相关性。《2019年乳腺杂志》；25:537–538. doi:10.1111/tbj.13282。-内政部-公共医学
    1. Giannone G等人。治疗HER-2阳性乳腺癌的最佳药物治疗策略是什么？专家操作。药物治疗。2019;20:5–9. doi:10.1080/14656566.2018.1543406。-内政部-公共医学
    1. Daniels B等，用曲妥珠单抗治疗的HER2阳性转移性乳腺癌患者的长期生存率：澳大利亚全人群队列中的实际结果和治疗模式（2001-2016年），《乳腺癌研究与治疗》。2018;171:151–159. doi:10.1007/s10549-018-4804-0。-内政部-公共医学
    1. Adamczyk A等。HER2基因状态与与曲妥珠单抗耐药性相关的选定潜在生物学特征之间的关系及其对接受曲妥珠单抗辅助治疗的乳腺癌患者生存期的影响。Onco目标治疗。2018;11:4525–4535. doi:10.2147/OTT。S166983。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语