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.2020年1月15日；15（1）：e0227814。
doi:10.1371/journal.pone.0227814。 eCollection 2020。

收集前的淋巴管在淋巴流受阻后形成迂回，起到收集淋巴管的作用

基米·阿萨诺 1 2, 中岛由纪夫 三, 卡奈·穆凯 三, 塔玛·乌赖 4, 马尤米·奥库瓦 三, Junko Sugama公司 5, Chizuko Konya公司 6, 中田俊雄 三
附属公司

收集前的淋巴管在淋巴流受阻后形成迂回，起到收集淋巴管的作用

基米·阿萨诺等。 公共科学图书馆一号. .

摘要

背景：此前，我们发现淋巴管（LV）在淋巴阻塞后形成迂回，有助于预防淋巴水肿。在这项研究中，我们使用小鼠淋巴结扎法开发了绕道，并从组织学上对绕道进行了鉴定。

方法和结果：在麻醉下，将小鼠的双侧后肢皮下注射Evans蓝色染料以检测LVs。我们将右侧收集的左心室绑在穿过腹股沟淋巴结（LN）的腹部的两点。右侧和左侧分别包括手术侧和假手术侧。使用近红外荧光成像系统进行淋巴造影，以研究淋巴结扎后至第30天的淋巴流量。用抗磷脂抗体和5-乙炔脱氧尿苷（EdU）检测LVs和淋巴管生成。在30天内，62.5%的小鼠出现了迂回。在两个结扎部位之间观察到的Detours增大且形状不规则。足蛋白+LV位于肉苁蓉肌上部的皮下组织中，在颅骨结扎部位的上部和尾骨结扎处的下部与收集LV相连。在这些弯道中未观察到EdU+细胞。假手术侧淋巴流量正常，直到第30天，收集前LV才出现增大。

结论：淋巴结扎后的迂回不是由淋巴管生成形成的，而是通过淋巴结扎前收集LV的扩大形成的，而收集LV在淋巴结扎之后起收集LV作用。为了治疗和有效护理人类淋巴水肿，需要进一步研究淋巴绕道的发育机制。

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数字

图1
图1。淋巴结扎的手术程序和组织学观察的切片区域。
（A）埃文斯蓝染料注入后肢（黄色圆圈）。在腹股沟淋巴结（LN）5 mm处，从背侧5 mm处切开1 cm的切口，将收集到的LV穿过腹部的腹股沟淋巴结炎淋巴结；1厘米的比例尺。（B）将切开的皮肤从肌膜上剥离，暴露穿过腹股沟LN的收集LV（蓝色染色）；2 mm的比例尺。（C）在立体显微镜下用6–0尼龙缝合线小心地将其绑在2个点上；2 mm的比例尺。（D）皮肤边缘用6–0尼龙缝合线在3个点缝合；1 cm的比例尺。（E）收集LV（a）穿过腹股沟淋巴结并进入腋窝淋巴结的区域，包括切口位置，以及；收集下腹部出现的LV（b），进行组织学观察（黄色方形）；1厘米的比例尺。开放的白色箭头：切口位置；星号：腹股沟淋巴结。
图2
图2。淋巴结扎后淋巴造影的典型图像。
（A）第30天假手术侧淋巴流量。（B）第30天在腹部发现了一些弯路。这些迂回路线从收集LV（a）的尾部结扎部位（闭合的白色箭头）的下部开始，经过腹股沟LN，并从头颅结扎部位连接到收集LV的上部（闭合的白箭头），通过腹股沟L N。（C）在第30天淋巴结扎后检测到原始路径。（D）第18天手术侧未检测到淋巴流。a： 收集的LV通过髂淋巴结流入腋窝淋巴结；1 cm的比例尺；星号：腹股沟淋巴结；闭合的白色箭头：结扎部位。
图3
图3。近端手术部位绕行的代表性组织学图像。
（A）第30天手术侧淋巴造影。红线是串行段的起点。黄色线是串行段的终点。白色箭头表示剖切方向；1 cm的比例尺。（B） ，（G）苏木精伊红（HE）染色。（C至F）、（H）、（I）抗足蛋白抗体免疫染色。（B）图3A中红线处的截面；比例尺为1毫米。（C）图3B中黑匣子中的高倍图像；标尺为50μm。（D）图3B中蓝色方框中的高倍图像。观察6–0尼龙缝合线（Sut）的横切面；100μm的比例尺。（E）图3D中橙色框中的高倍图像。观察到一个小淋巴管，形成ColL壁的平滑肌似乎更厚；标尺为50μm。（Fi到Fx）图3B中绿色方框中的一系列弯道。很容易识别预收集LV（PcL），棕色染色显示淋巴管内皮细胞中的足蛋白，逐渐从肉苁蓉肌（P）上方穿过肌肉到达肌肉下方的ColL。LV中有许多淋巴细胞（圆形细胞被紫色染色）。可以在PcL中观察到阀门（见图Fiii中的箭头）；F（i）的标尺，20μm；Fii–Fx的比例尺，100μm；比例尺Fvii–Fix，比例尺200μm。（G）图3A中黄线处的截面；1 mm的比例尺。（H）图3G中黑匣子中的高倍图像。ICG显示（a）中LV（a）附近有一组动脉（a）、静脉（V）和ColL（b）；100μm的比例尺。（一）图3G中蓝色框中的高倍图像。仅在侧支动脉（A）和静脉（V）附近观察到ColL；200μm的比例尺。（J至N）。免疫染色检测EdU。（J）第15天未发现EdU染色的PcL；40μm的比例尺。（K和L）第30天未发现EdU染色的带瓣膜（箭头）的PcL；40μm的比例尺。（百万）第30天未发现EdU染色的PcL；40μm的比例尺。（N）EdU检测+细胞；表皮细胞；毛囊细胞；成纤维细胞，表皮和真皮呈棕色；比例尺为50μm。a： LVs通过髂淋巴结进入腋窝淋巴结；A： 动脉；箭头：低压阀门；星号：腹股沟淋巴结（LN）；b： LV从下腹部开始进入腋窝LN；闭合的白色箭头：结扎部位；ColL：收集LV；D： 真皮；E： 表皮；N： 神经；P： 肉苁蓉肌；PcL：预采集LV；Sub：皮下组织；Sut：缝合线；五： 静脉。
图4
图4。远端手术部位和假手术侧迂回的典型组织学图像。
（A）第30天手术侧淋巴造影。红线是串行段的起点。黄色线是串行段的终点。白色箭头表示剖切方向；1 cm的比例尺。（B至E）手术侧HE染色。（B）图4A中红线处的截面；比例尺为200μm。（C）图4B中蓝色方框中的高倍图像。未观察到收集LV（ColL），并观察到大量预收集LV，包括肌肉上部的淋巴细胞（P）；200μm的比例尺。（D）图4B中黑匣子中的高倍图像；100μm的比例尺。（Ei至–Eii）图4B中蓝色方框处的一系列弯道。PcL逐渐接近ColL并与ColL（a）融合（十三）肌肉下部（P）；比例尺为100μm。（F–G）假手术侧用抗足蛋白抗体进行免疫染色。真皮下皮下组织（橙色盒子）中观察到染色的细线状结构；F标尺，200μm；G的比例尺，40μm。（G）图4F中橙色框中的高倍图像。线性结构是一个预收集LV，没有可区分的管腔；因此，在HE染色的正常皮肤中很难找到PcL。（H）手术侧抗足蛋白抗体免疫染色；100μm的比例尺。可见大量扩张的毛细血管LV呈棕色染色。（一）假手术侧用抗足蛋白抗体进行免疫染色。真皮中少数呈棕色的毛细血管LV与H中的毛细血管相比，具有较薄的管；100μm的比例尺。a： 收集的LV通过髂淋巴结进入腋窝淋巴结；A： 动脉；b： 收集LV，从下腹部开始，进入腋窝LN；星号：腹股沟淋巴结（LN）；Cap：毛细血管LVs；闭合的白色箭头：结扎部位；ColL：收集LV；D： 真皮；E： 表皮；P： 肉苁蓉肌；PcL：预采集LV；Sub：皮下组织；缝合线：缝合线；五： 静脉。
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