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.2020年1月;24(1):1076-1086.
doi:10.1111/jcmm.14832。 Epub 2019年11月21日。

IL-10诱导小鼠MC3T3-E1细胞向成骨细胞方向分化

附属公司

IL-10在小鼠模型中诱导MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化

袁雄等。 细胞与分子医学杂志. 2020年1月.

勘误表in

  • 勘误表。
    [未列出作者] [未列出作者] 《细胞分子医学杂志》,2021年1月;25(1):596-597. doi:10.1111/jcmm.15734。 《细胞分子医学杂志》2021。 PMID:33452748 免费PMC文章。 没有可用的摘要。

摘要

白细胞介素-10(IL-10)显示出有充分证据证明的抗炎作用,但其对成骨细胞分化的影响尚未被研究。在本研究中,我们发现IL-10负调节microRNA-7025-5p(miR-7025-5p),其下调可促进成骨细胞分化。此外,通过荧光素酶报告基因分析,我们发现胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)是一个miR-7025-5p靶基因,正向调节成骨细胞分化。体内研究表明,预先注射IL-10会导致骨形成增加,而注射agomiR-7025-5p会延迟骨折愈合。总之,这些结果表明,IL-10通过调节miR-7025-5p/IGF1R轴诱导成骨细胞分化。因此,IL-10是一种有希望的促进骨折愈合的治疗策略。

关键词:骨折;IGF1R;IL-10;mRNA;miRNA;成骨细胞。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
图1
局部注射IL‐10可增强小鼠骨折愈合。A、 在受伤后第7天、第14天和第21天,对比对照组、0.3µg/kg IL-10组和0.5µg/kg IL-10组的骨折愈合情况。B、 伤后14天和21天,对比对照组、0.3µg/kg IL‐10组和0.5µg/kg IL‐0组的骨折愈合情况。C、 术后14天和21天,通过显微CT建立胼胝体的BV、TV和BV/TV。n=10只小鼠/组。数据为三次试验的平均值±SD*P(P)<0.05**P(P) < .01, ***P(P) < .001
图2
图2
IL‐10促进MC3T3‐E1细胞的成骨细胞分化。A、 MC3T3-E1细胞根据IL‐10治疗分为五组。用qRT‐PCR检测五组中的成骨标志物Col 1a1、ALP、OCN和RunX2。B、 (A)中Col 1a1、ALP、OCN和RunX2的Western blot.C、 转染不同浓度IL‐10 48小时的MC3T3-E1细胞的ALP染色。比例尺=10 mm。D、 用不同浓度的IL-10转染21天后,茜素红介导的MC3T3‐E1细胞钙染色。比例尺=10 mm。数据为三次试验的平均值±SD*P(P) < .05, **P(P) < .01, ***P(P) < .001
图3
图3
MiR‐7025‐5p在IL‐10治疗组中下调并增加成骨分化。A、 用不同浓度的IL-10(0、10、30、50和100 ng/mL)处理MC3T3-E1细胞24小时,IL-10处理组的miR-7025-5p水平显著低于对照组。B、 用脂质体3000和IL-10或IL-10处理MC3T3-E1细胞agomiR‐7025‐5p。通过qRT-PCR分析,观察到IL-10组与其他组相比,成骨标志物的表达显著增加。C、 来自(B)的ALP染色.D、 茜素红介导的钙染色(B)。比例尺=10 mm。数据为三次试验的平均值±SD*P(P) < .05, **P(P) < .01, ***P(P) < .001
图4
图4
局部服用AgomiR‐7025‐5p抑制小鼠的愈合。A、 在骨折愈合早期,基因芯片中miR‐7025‐5p的水平下降。B、 在骨折愈合的早期阶段,骨折模型中miR‐7025‐5p的水平降低。C、 对小动物进行体内成像,以评估agomiR‐7025‐5p在骨折部位的作用。D、 通过qRT‐PCR分析,在第4天和第7天,在agomiR‐7025‐5p动物的胼胝体中发现高水平的miR‐70 25‐5 p。E、 与对照动物相比,agomiR‐7025‐5p治疗的小鼠在X射线中表现出更长的愈合时间。F、 与3D m‐CT中的对照动物相比,用agomiR‐7025‐5p治疗的小鼠显示出较小的骨痂体积和较大的骨折间隙。G、 通过m‐CT数据分析,在骨折后14天和21天,agomiR‐7025‐5p动物相对于对照动物的总骨痂体积减少。数据是三次试验的平均值±SD*P(P) < .05, **P(P) < .01, ***P(P) < .001
图5
图5
MiR‐7025‐5p‐阴性调节体外成骨细胞分化。A、 MC3T3‐E1细胞单独用脂质体胺3000、agomiR‐NC、agomi R‐7025‐5p、antagomi R-NC或antagomiR-7025‐的脂质体胺处理。通过qRT-PCR分析评估,在用agomiR‐7025‐5p处理的细胞中,miR‐7025‐5p上调。B、 (A)中成骨标志物Col 1a1、ALP、OCN和RunX2的qRT‐PCR分析。C、 ALP染色结果来自(A)。D、 (A)中茜素红介导的钙染色。比例尺=10mm。数据为一式三份实验的平均值±标准差*P(P) < .05, **P(P) < .01, ***P(P) < .001
图6
图6
IGF1R是MiR‐7025‐5p的靶基因。A、 AgomiR‐7025‐5p降低WT IGF1R 3′UTR报告活性。B、 各组间突变的3′UTR IGF1R报告子的活性无显著差异。C、 骨折愈合早期(第0天、第3天、第7天、第10天和第14天)检测到骨折动物胼胝体中IGF1R水平升高。D、 通过PCR分析检测到agomiR‐7025‐5p组(第4、7、14和21天)血清样本中IGF1R mRNA水平降低。E、 在第14天和第21天,两组之间的愈伤组织样品中的IGF1R蛋白印迹。F、 PCR分析转染组(对照组、agomiR-NC组、agumiR-7025-5p组、antagomiR‐NC组和antagomi R-7025-5 p组)的IGF1R mRNA水平。G、 (F)中IGF1R mRNA水平的Western blots。H、 转染模拟、siRNA‐NC、siRNA-IGF1R、antagomiR‐7025‐5p+siRNA-NC或antagomi R‐70%‐5p+siRNA-IGF1R的MC3T3‐E1细胞中IGF1R mRNA水平的Western blots。(一) (H)中I型胶原、ALP、OCN和RunX2的qRT‐PCR分析。数据是三次试验的平均值±SD*P(P) < .05, **P(P) < .01, ***P(P) < .001
图7
图7
白细胞介素-10对成骨细胞分化的影响示意图。IL‐10下调miR‐7025‐5p的水平,从而诱导IGF1R的表达,随后刺激成骨表达,增加骨形成

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