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.2020年1月；21（1）:123-130。
doi:10.3892/mmr.2019.10832。 Epub 2019年11月20日。

七氟烷通过抑制脑缺血再灌注大鼠自噬和凋亡减轻脑损伤

村仙市 # 1, 金进 # 1, 王雪芹 2, 藤松（Teng Song） 三, 李广宏 三, 李克忠 1, 贾海玛 1
附属公司

七氟烷通过抑制脑缺血再灌注大鼠自噬和凋亡减轻脑损伤

村仙市等。 分子医学代表. 2020年1月.

摘要

本研究旨在研究七氟醚后处理对大鼠脑缺血再灌注（I/R）模型的影响，并探讨其可能的机制。将大鼠随机分为六组：Sham对照组（Sham）、I/R组、七氟醚组（Se）、Toll‑like receptor‑4（TLR4）抑制剂组（Tak‑242）、核因子（NF）‑κB抑制剂组（QNZ）和sevoflurane后处理联合TLR4‑NFκB信号通路抑制剂组（Se+Tak‑）。采用Morris水迷宫试验和氯化四氮唑染色研究I/R损伤。TUNEL和透射电镜分别检测皮层组织中的神经细胞凋亡和自噬。免疫组织化学染色观察皮层组织TLR4蛋白的表达。western blot分析检测皮质组织中自噬和凋亡相关蛋白的表达以及TLR4‑NF‑κB信号通路的活性。七氟醚后处理改善了脑I/R损伤引起的学习记忆功能障碍。七氟醚治疗后，脑梗死面积、神经细胞凋亡和自噬空泡形成减少。七氟醚给药后，轻链3II/I、Beclin‑1、Bad和Cleaved‑Caspase‑3蛋白的表达受到抑制，Bcl‑2蛋白的表达上调。七氟烷后处理还抑制TLR4蛋白和NF‑κB磷酸化，并增加kBα磷酸化抑制剂。Tak‑242组和QNZ组的治疗效果与Se组相比无显著差异（P>0.05），Se+Tak‑）242组效果最好。本研究表明，七氟醚后处理可以通过抑制自噬和凋亡来保护大脑中动脉闭塞诱导的脑损伤大鼠，其机制与TLR4‑NF‑κB信号通路有关。

关键词：七氟醚；脑缺血再灌注损伤；自噬；细胞凋亡；Toll样受体-4-核因子-κB。

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数字

图1。
图1。
硒后处理对水迷宫实验中（A）寻找隐藏平台的逃避潜伏期和（B）跨平台次数的影响。数值为平均值±标准偏差*与Sham组相比P＜0.05；#与I/R组相比P<0.05；&与硒组相比P<0.05；^与Tak-242组相比，P<0.05。缺血再灌注；硒，七氟醚；Tak-242，Toll-like受体-4抑制剂；核因子κB抑制剂。
图2。
图2。
硒后处理可减少I/R（A）TTC染色大鼠的脑梗死面积，正常脑组织呈红色，梗死组织呈白色。（B） 不同组梗死面积占非梗死面积的百分比。数值为平均值±标准偏差*与Sham组相比P<0.05；#与I/R组相比P<0.05；&与硒组相比P<0.05；^与Tak-242组相比，P<0.05。硒，七氟醚；缺血再灌注；TTC，四氮唑氯化物；Tak-242，Toll-like受体-4抑制剂；核因子κB抑制剂。
图3。
图3。
硒后处理可减少神经细胞凋亡。（A） TUNEL染色，正常细胞核为蓝色，凋亡阳性细胞为棕色（放大倍数为×400）。（B） 不同组凋亡细胞阳性。数值为平均值±标准偏差*与Sham组相比P<0.05；#与I/R组相比P<0.05；&与硒组相比P<0.05；^与Tak-242组相比，P<0.05。硒，七氟醚；缺血再灌注；Tak-242，Toll-like受体-4抑制剂；核因子κB抑制剂。
图4。
图4。
硒后处理对脑组织TLR4蛋白表达的影响。（A） 各组脑组织TLR4蛋白表达的免疫组织化学（放大倍数×400）。（B） 每组脑组织中蛋白质阳性细胞的数量。数值为平均值±标准偏差*与Sham组相比P<0.05；#与I/R组相比P<0.05；&与硒组相比P<0.05；^与Tak-242组相比，P<0.05。硒，七氟醚；TLR4，Toll-like接收器-4；缺血再灌注；Tak-242，TLR4抑制剂；核因子κB抑制剂。
图5。
图5。
硒后处理可以减少自噬空泡的数量。（A） 各组自噬空泡形态（放大倍数，×1200）。（B） 每组自噬空泡的数量。数值为平均值±标准偏差*与Sham组相比P<0.05；#与I/R组相比P<0.05；&与硒组相比P<0.05；^与Tak-242组相比，P<0.05。硒，七氟醚；缺血再灌注；Tak-242，Toll样受体4抑制剂；核因子κB抑制剂。
图6。
图6。
硒后处理对自噬和凋亡相关蛋白表达的影响。（A） 各组（B）LC3II/I、（C）Beclin-1、（D）Caspase-3、（E）Bad和（F）Bcl-2蛋白的Western blot分析和定量分析。数值为平均值±标准偏差*与Sham组相比P<0.05；#与I/R组相比P<0.05；&与硒组相比P<0.05；^与Tak-242组相比，P<0.05。硒，七氟醚；LC3，轻链3；缺血再灌注；Tak-242，Toll-like受体-4抑制剂；核因子κB抑制剂。
图7。
图7。
硒后处理对TLR4-NF-κB信号通路活性的影响。（A） Western blot分析和各组（B）TLR4、（C）p-NF-κB/NF-κB和（D）p-IkBα/IkBα蛋白的定量分析。数值为平均值±标准偏差*与Sham组相比P<0.05；#与I/R组相比P<0.05；&与硒组相比P<0.05；^与Tak-242组相比，P<0.05。硒，七氟醚；TLR4，Toll-like接收器-4；p-，磷酸化；NF，核因子；缺血再灌注；Tak-242，TLR4抑制剂；QNZ、NF-κB抑制剂。
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