跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2020年1月；21(1):89-96.
doi:10.3892/mmr.2019.10793。 Epub 2019年11月5日。

抑制miR‑101a‑3p通过调节JAK2/STAT3通路减轻H9C2细胞H/R损伤

刘晶莹 1, 王娟娟 1, 玉贞宁 1, 陈凤英 1
附属公司

抑制miR‑101a‑3p通过调节JAK2/STAT3通路减轻H9C2细胞H/R损伤

刘晶莹等。 分子医学代表. 2020年1月.

摘要

缺氧/复氧（H/R）被用作缺血/再灌注损伤的体内模型，心肌缺血可导致心脏病。因此，有必要预防心肌H/R损伤，以避免心脏病的风险。本研究的目的是研究抑制microRNA（miR）‑101a‑3p是否减轻H9C2细胞H/R损伤、凋亡机制和关键靶蛋白。通过细胞计数试剂盒-8分析和使用细胞凋亡试剂盒的流式细胞术分别测定细胞活力和凋亡。采用比色法检测肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）的含量。进行双重荧光素酶分析以确定miR‑101a‑3p是否抑制Janus激酶（JAK）2。Western blot分析和逆转录定量PCR用于测定蛋白质水平和mRNA表达。研究发现，在H/R损伤过程中，miR‑101a‑3p的抑制增加了H9C2细胞的生长，并降低了H9C1细胞的凋亡。miR‑101a‑3p的抑制降低了H/R模型H9C2细胞中CK和LDH的数量。miR‑101a‑3p的抑制降低了H9/R损伤处理后H9C2细胞中Bax、白细胞介素‑6和肿瘤坏死因子‑α的水平，但提高了磷酸化（p）‑STAT3和p‑JAK2的水平。发现miR‑101a‑3p模拟物在H/R损伤期间抑制H9C2细胞活性，升高p‑JAK2水平，并略微增加p‑STAT3。AG490诱导H9C2细胞凋亡，降低H/R损伤过程中p‑JAK2和p‑STAT3的水平。数据表明，在H/R损伤期间，抑制miR‑101a‑3p可减少H9C2细胞的H/R损害，并通过Bax/Bcl‑2信号降低细胞凋亡。此外，研究表明，抑制miR‑101a‑3p通过调节JAK2/STAT3信号通路降低H9C2细胞H/R损伤。

关键词：mir-101a-3p；缺氧/复氧损伤；H9c2细胞；aG490。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
在H/R损伤期间，I对H9C2细胞凋亡、生存能力以及CK、LDH和miR-101a-3p水平的影响。在h/R模型中，我被转染到H9C2细胞中48小时。通过逆转录定量PCR分析测定H9C2细胞中（A和B）miR-101a-3p的表达水平。（C） 用比色法分析H9C2细胞中CK和（D）LDH的含量。（E） 使用细胞计数试剂盒-8检测H9C2细胞活性。使用死细胞凋亡试剂盒，通过流式细胞术测定（F和G）H9C2细胞凋亡。数据以平均值±标准偏差表示，并使用Tukey-Kramer多重比较检验进行方差分析*与对照组相比，P<0.05，**P<0.01；^P<0.05，^^与H/R相比P<0.01；+P<0.05，++与IC+H/R相比P<0.01；##P<0.01。miR，microRNA；肌酸激酶；乳酸脱氢酶；H/R，缺氧/复氧；一、 miR-101a-3p抑制剂；IC，miR-101a-3p抑制剂控制；M、 miR-101a-3p模拟物；MC，miR-101a-3p模拟控制；LT，左上象限；LB，左下象限；RT，右上象限；RB，右下象限；PI，碘化丙啶。
图2。
图2。
I对H9C2细胞H/R损伤时Bax、Bcl-2、IL-6和TNF-α表达水平的影响。H9C2细胞在h/R环境中用I处理48小时。通过逆转录定量PCR分析测定（A）Bcl-2、（B）Bax、（C）IL-6和（D）TNF-α的mRNA水平。western blot分析检测Bax、Bcl-2、IL-6和TNF-α的（E和F）蛋白水平。数据以平均值±标准差表示，并通过方差分析和Tukey-Kramer多重比较检验进行分析*与对照组相比，P<0.05，**P<0.01；^P<0.05，^^与H/R相比P<0.01；+P<0.05，++与IC+H/R.miR，microRNA相比P<0.01；白细胞介素；肿瘤坏死因子；H/R，缺氧/复氧；一、 miR-101a-3p抑制剂；IC，miR-101a-3p抑制剂控制。
图3。
图3。
I和AG490对H9C2细胞在H/R损伤期间JAK2、p-JAK2，STAT3和p-STAT3表达水平的影响。（A） 使用含有JAK2 3′UTR和M或I的psi-CHECK-2转染细胞，并使用双荧光素酶检测试剂盒检测荧光素酶活性。（B） TargetScan7.2用于预测miR-101a-3p的靶基因。（C） western blot分析检测JAK2、p-JAK2，STAT3和p-STAT3蛋白水平。使用（D）p-JAK2/JAK2和（E）JAK2总量的比值来评估JAK2的激活。（F） 使用p-STAT3/STAT3和（G）总STAT3评估STAT3的激活。数据以平均值±标准偏差表示，并通过方差分析和Tukey-Kramer多重比较进行分析*与空白对照组相比，P<0.05，**P<0.01；#P<0.05，##P<0.01；^P<0.05，^^P<0.01。miR，microRNA；JAK、Janus激酶；H/R，缺氧/复氧；p-，磷酸化；UTR，非翻译区；WT，野生型；MUT，突变体；一、 miR-101a-3p抑制剂；IC，miR-101a-3p抑制剂控制；M、 miR-101a-3p模拟物；MC，miR-101a-3p模拟控制。
图4。
图4。
I和AG490对H9/R损伤时H9C2细胞凋亡的影响。流式细胞术检测H9C2细胞凋亡。数据以平均值±标准差表示，并通过方差分析和Tukey-Kramer多重比较检验进行分析*与对照组相比，P<0.05，**P<0.01；^与H/R相比P<0.05；+与IC+H/R相比，P＜0.05；−P<0.05，−−与I+H/R.miR，microRNA相比P<0.01；H/R，缺氧/复氧；一、 miR-101a-3p抑制剂；IC，miR-101a-3p抑制剂控制；LT，左上象限；LB，左下象限；RT，右上象限；RB，右下象限；PI，碘化丙啶。
图5。
图5。
AG490抑制H9C2细胞活性。H9C2细胞在35 mm培养皿中以1.5×10的比例培养5细胞/培养皿或在1.5×10的96 well板中三细胞/平板。然后在H/R期间用不同的转染剂处理细胞48小时。与对照组相比，P<0.05，**P<0.01；^与H/R相比P<0.05；+与MC+H/R.miR，microRNA相比P<0.05；H/R，缺氧/复氧；M、 miR-101a-3p模拟物；MC，miR-101a-3p模拟控制。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Li Y，Shi X，Li J，Zhang M，Yu B.KLF11基因敲除通过H9c2的JAK2/STAT3信号减轻缺氧/复氧损伤。细胞凋亡。2017;22:510–518. doi:10.1007/s10495-016-1327-1。-内政部-公共医学
    1. Zhang Y，Chen G，Zhong S，Zheng F，Gao F，Chen Y，Huang Z，Cai W，Liu W，Liw X，等。碘化N-正丁基氟哌啶醇通过细胞外钙依赖和非依赖机制改善心肌细胞缺氧/复氧损伤。氧化介质细胞Longev。2013;2013:912310. doi:10.1155/2013/912310。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Ouyang F，Huang H，Zhang M，Chen M，黄H，黄F，Zhou S.HMGB1诱导心肌细胞H/R损伤后细胞凋亡和EMT与自噬增加相关。国际分子医学杂志2016；37:679–689. doi:10.3892/ijmm.2016.2474。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. 刘S，满Y，赵L.青藤碱通过调节角质形成细胞中miR-101/MKP-1/JNK通路抑制脂多糖诱导的炎症损伤。生物药物治疗。2018;101:422–429. doi:10.1016/j.biopha.2018.02.086。-内政部-公共医学
    1. Liu J，Hua R，Gong Z，Shang B，Huang Y，Guo L，Liu T，Xue J.人羊膜上皮细胞通过影响miR-101-c-Rel-IL-2通路抑制急性肾损伤患者CD4+T细胞活化。分子免疫学。2017;第81:76-84页。doi:10.1016/j.molimm.2016.11.019。-内政部-公共医学