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.2019年9月23日;10(1):287.
doi:10.1186/s13287-019-1388-5。

miR-205-5p通过靶向子宫内膜基质细胞中的ANGPT2抑制人类子宫内膜异位症的进展

附属公司

miR-205-5p通过靶向子宫内膜基质细胞中的ANGPT2抑制人类子宫内膜异位症的进展

周晨飞等。 干细胞研究与治疗. .

勘误表in

摘要

背景:异位内膜miRNA表达谱作为病理生理遗传指纹有助于确定子宫内膜异位症的进展;然而,其潜在的分子机制尚不清楚。

方法:miRNA微阵列分析用于确定EC新鲜组织的表达谱。qRT-PCR检测miR-205-5p在EC组织中的表达。miR-205-5p及其候选靶基因血管生成素-2(angiopoietin-2,ANGPT2)在子宫内膜异位症进展中的作用已在体内外系统的基础上得到证实。采用原位杂交和免疫化学方法检测miR-205-5p和ANGPT2的表达,并对其临床意义进行统计学分析。

结果:通过体外原发性异位子宫内膜基质细胞迁移、侵袭和凋亡检测,以及体内子宫内膜样异种移植物生长和凋亡,筛选出miR-205-5p作为子宫内膜异位症的新抑制剂。此外,通过生物信息学靶点预测和荧光素酶报告分析,ANGPT2被确定为miR-205-5p的直接靶点。ANGPT2的再表达和敲除可分别拯救和模拟miR-205-5p诱导的效应。重要的是,发现miR-205-5p-ANGPT2轴在子宫内膜异位症中激活ERK/AKT通路。最后,miR-205-5p和ANGPT2的表达与子宫内膜异位症的严重程度密切相关。

结论:新鉴定的miR-205-5p-ANGPT2-AKT/ERK轴阐明了子宫内膜异位症进展的分子机制,并可能代表一种新的诊断生物标记物和疾病治疗靶点。

关键词:ANGPT2;子宫内膜基质细胞;子宫内膜异位症;miR-205-5p。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明,他们没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
子宫内膜异位症中miR-205-5p作为负性病理miRNA的鉴定。不同基因型间miRNA表达谱的差异(n个 = 3) 和EC(n个 = 3) 各组通过miRNA微阵列进行分析。热图显示,具有代表性的miRNA与子宫内膜异位症显著相关。EN1、EN2和EN3表示3个正常子宫内膜;EC1、EC2和EC3显示3个异位子宫内膜。b条通过qRT-PCR分析用于微阵列分析的子宫内膜中16种差异表达的miRNA的水平。c(c),miR-205-5p、miR-4497、miR-3154和miR-3926的水平通过qRT-PCR在来自EN(n个 = 23)和EC(n个 = 68)组。EN,正常子宫内膜;EC,异位子宫内膜。误差条代表平均值±3个独立实验的SD。n.s.,不重要*P(P) < 0.05; **P(P) < 0.01; ***P(P) < 0.001
图2
图2
miR-205-5p在体外抑制EC109和EC520的迁移和侵袭,但促进细胞凋亡. 显示了与NC相比,过度表达EC109和EC520的miR-205-5p伤口愈合试验的代表性显微照片。在0(白色虚线)和48处采集图像h(黑色虚线)。计算了每个场的平均迁移率。比例尺,20微米。b条显示了与NC相比,miR-205-5p过度表达EC109和EC520的Transwell侵袭试验的代表性显微照片。计算每个场的平均侵袭细胞数。比例尺,50微米。c(c)与NC相比,显示了过度表达EC109和EC520的miR-205-5p细胞凋亡检测的代表性显微照片。分析每次的平均凋亡率。miR-205和miR-205-5p。误差条代表平均值±三个独立实验的SD*P(P) < 0.05; **P(P) < 0.01***P(P) < 0.001
图3
图3
miR-205-5p抑制体内子宫内膜基质细胞产生的子宫内膜样病变的形成. 裸鼠解剖病变的典型显微照片(n个 = 6,每组)植入天数。b条子宫内膜样病变生长曲线。每隔4天测量病变大小。c(c)用qRT-PCR分析稳定转染miR-205-5p或miR-NC的EC109和EC520形成的解剖病变中miR-205-5 p的水平。解剖病变中Annexin V染色的代表性显微照片。比例尺:上面板,100微米;下部面板,20μm。miR-205、miR-205-5p。误差条代表平均值±三个独立实验的SD**P(P) < 0.01; ***P(P) < 0.001
图4
图4
miR-205-5p通过其3′-UTR直接抑制ANGPT2的表达。三种miRNA靶生物信息预测算法的重叠。b条预测靶点在正常子宫内膜基质细胞中的表达。数据来自人类蛋白质图谱。c(c)用qRT-PCR分析与miR-205-5p过度表达的EC109细胞相关的细胞和异种移植物中CDH11、ANGPT2、PLCB1、KPNA1和HIF1AN的RNA水平。miR-205-5p和ANGPT2的3′-UTR之间的RNA序列比对(左),以及miR-NC和miR-205-5p对EC109中含有野生型(WT)或突变型(MT)的荧光素酶报告基因活性的影响,通过双荧光素酶报告基因测定进行测试(右)。e(电子)通过western blot分析检测慢载体转染的EC109和EC520细胞以及这些异位子宫内膜基质细胞建立的异种移植病灶中的ANGPT2蛋白水平。miR-205和miR-205-5p。误差条代表平均值±三个独立实验的SD**P(P) < 0.01
图5
图5
ANGPT2的重新表达可以缓解miR-205-5p对子宫内膜异位症的抑制作用。用qRT-PCR分析经指定处理的细胞中miR-205-5p的水平。b条通过western blot分析检测转染质粒ANGPT2或载体对照的Lenti-miR-205-5p处理细胞和SiANGPT2-或SiRNA-处理细胞中ANGPT2和AKT/ERK通路相关蛋白的表达。c(c)e(电子)通过伤口愈合、Transwell侵袭和细胞凋亡分析,ANGPT2的重新表达挽救了创伤,而ANGPT2的敲除模拟了miR-205-5p过度表达诱导的功能效应。miR-205和miR-205-5p。这些实验是在对48个h.误差条表示平均值±三个独立实验的SD*P(P) < 0.05; **P(P) < 0.01; ***P(P) < 0.001
图6
图6
临床组织中miR-205-5p和ANGPT2表达的相关性。ANGPT2的免疫反应性评分在EN(n个 = 23)和EC(n个 = 68)临床标本。b条EC临床标本中具有代表性的图像以及高、低ANGPT2表达和低或高miR-205-5p水平的组织的百分比。比例尺,100μm。EN,正常子宫内膜;EC,异位子宫内膜。miR-205和miR-205-5p。误差条代表平均值±三个独立实验的SD***P(P) < 0.001

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