跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

政府意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息,确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https(https)://确保您连接到官方网站,并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2019年9月10日;9(1):12934.
doi:10.1038/s41598-019-49016-0。

钙化主动脉瓣中的间质细胞分化潜能和干细胞样特性降低

附属公司

钙化主动脉瓣中的间质细胞分化潜能和干细胞样特性降低

玛丽亚·博格达诺娃等。 科学代表. .

摘要

瓣膜间质细胞(VIC)在钙化性主动脉瓣疾病的发展中起着关键作用。本研究的目的是比较钙化和健康主动脉瓣细胞的表型、分化潜能和干细胞样特性。从健康人和钙化的主动脉瓣分离出VIC。用成骨介质诱导钙化。与来自健康瓣膜的VIC不同,来自未经成骨培养基培养的钙化瓣膜的VICs的钙沉积染色呈阳性,茜素红证实了其钙化表型。用成骨介质刺激钙化瓣膜的VIC增加钙化(p=0.02),但与健康VIC无显著差异。当用肌成纤维细胞培养基刺激时,与健康的VICs相比,通过流式细胞术和RT-qPCR测量,钙化瓣膜的VICs的肌成纤维细胞标志物表达较低。钙化瓣膜细胞中胶原凝胶的收缩(肌纤维母细胞活性的测量)减弱(p=0.04)。此外,与健康瓣膜的细胞不同,钙化瓣膜的VIC分化为脂肪生成途径的潜能较低,干细胞相关标记物CD106(p=0.04)和醛脱氢酶(p=0.04.)的表达较低。总之,与健康瓣膜的细胞相比,钙化主动脉的VIC的多能性降低,这在研究主动脉瓣钙化的可能药物治疗时应予以考虑。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
()用茜素红染色法对健康人(n)的间质细胞进行钙化显微镜观察(10倍客观) = 7) 和钙化(n = 7) 主动脉瓣,在标准生长培养基(对照)或成骨培养基中培养21天。(b)405吸光度法定量茜素红染色纳米。各组通过Wilcoxon配对配对符号秩检验(对照组vs成骨介质+)或Kolmogorov-Smirnov检验(健康组vs钙化组)进行比较。散点图中的线表示中值。
图2
图2
通过定量逆转录PCR测定钙化和肌纤维母细胞相关基因的相对基因表达:(a) ACTA2公司(α-平滑肌肌动蛋白2),(b) CNN1型(钙粘蛋白),(c) TAGLN公司(transgelin),(d) 骨形态发生蛋白2(骨形态发生蛋白2),(e) OPG公司(骨蛋白),(f) 邮政编码(骨膜炎素)和(g) TSP-1型从健康(n = 6-7)或钙化(n = 5–7)主动脉瓣,并在标准生长培养基(对照)或成骨培养基中培养21天。各组通过配对数据的Student’s t检验(参数)或Wilcoxon配对配对符号秩检验(非参数)进行比较(对照组vs成骨培养基+),未配对数据的Student’st检验(参变量)或Mann-Whitney检验(非参变量)进行对比(健康组vs钙化组)。散点图中的线表示中值。
图3
图3
通过定量逆转录PCR测定钙化和肌纤维母细胞相关基因的相对基因表达:(a) ACTA2公司(α-平滑肌肌动蛋白2),(b) CNN1型(钙粘蛋白),(c) TAGLN公司(transgelin),(d) 骨形态发生蛋白2(骨形态发生蛋白2),(e) OPG公司(骨蛋白),(f) 邮政编码(骨膜炎素)和(g) TSP-1型从健康人(n)分离的间质细胞中的(血小板反应蛋白1) = 5-7)或钙化(n = 5–7)主动脉瓣,并在标准生长培养基(对照)或肌纤维母细胞培养基中培养4天和14天。各组通过配对数据的Student’s t检验(参数)或Wilcoxon配对配对符号秩检验(非参数)进行比较(对照组vs肌纤维母细胞培养基+),未配对数据的Student’st检验(参变量)或Mann-Whitney检验(非参变量)进行比较。散点图中的线表示中值。
图4
图4
()肌纤维母细胞标记物免疫荧光染色的代表性图片(10张客观照片):从健康人(n)分离的间质细胞中的α-平滑肌肌动蛋白(αSMA)和钙粘蛋白 = 6) 和钙化(n = 5) 主动脉瓣,在标准生长培养基(对照)或肌纤维母细胞培养基中培养14天。αSMA(红色)、钙调素(绿色)、细胞核(Hoechst 3342/蓝色)。(b–e)流式细胞术分析健康人骨髓间质细胞αSMA和calponin的表达 = 6) 或钙化(n = 5) 主动脉瓣,并用标准培养基(对照)或肌成纤维细胞培养基培养4或14天。(b)c)数据以归一化平均荧光强度(nMFI)表示。对各组进行配对数据的Student t检验(对照组vs肌纤维母细胞培养基+)和未配对数据(健康组vs钙化组)。散点图中的线表示中值。(d)e)数据以健康(绿色曲线)或钙化主动脉瓣(红色曲线)单个样本的直方图叠加形式表示。(f)健康人(n)间质细胞胶原凝胶收缩的比较 = 4) 和钙化(n = 4) 主动脉瓣在对照或肌纤维母细胞培养基中培养7天。数据以相对凝胶尺寸的测量值表示,单位为百分比。第0天的凝胶大小被视为100%。数据通过重复测量进行双向方差分析。健康和钙化供体之间的差异通过Sidak的多重比较确定,检验后显著的p值显示在5第个测量日期。值表示为平均值±SD。双向方差分析的总体p值以粗体显示。
图5
图5
软骨生成标记物的相对基因表达(通过定量逆转录PCR测定):(a) 棘皮(aggrecan),(b) COL2A1公司(II型胶原α1链),在从健康(n = 6) 和钙化(n = 6) 主动脉瓣,在标准生长培养基(对照)或软骨生成培养基中培养21天。对各组进行配对数据的Wilcoxon配对秩检验(对照组vs软骨生成介质+)和未配对数据的Mann-Whitney检验(健康组vs钙化组)。散点图中的线表示中值。
图6
图6
(a)通过油红O染色对健康人(n)间质细胞的脂质积聚进行显微镜观察(20 x客观) = 6) 和钙化(n = 6) 主动脉瓣,在标准生长培养基(对照)或成脂培养基中培养21天。(b)通过490的吸光度定量油红O染色纳米。采用Wilcoxon配对秩检验(对照组vs成脂培养基+)或Mann-Whitney检验(健康组vs钙化组)对各组进行比较。散点图中的线表示中值。(c-f)通过定量逆转录聚合酶链反应测定脂肪生成标记物的相对基因表达:(c) 帕尔格(过氧化物酶体增殖物激活受体γ),(d) 计算流体力学(补充因子D),(e) 低密度脂蛋白(脂蛋白脂肪酶)和(f) CEBPA公司(CCAAT增强子结合蛋白α)在健康(n = 6) 和钙化(n = 5-6)主动脉瓣,并在标准生长培养基(对照)或成脂培养基中培养4天和21天。各组通过配对数据的Student’s t检验(参数)或Wilcoxon配对配对符号秩检验(非参数)进行比较(对照组vs成脂培养基+),未配对数据的Student’st检验(参变量)或Mann-Whitney检验(非参变量)进行对比(健康组vs钙化组)。散点图中的线表示中值。
图7
图7
(a)b)流式细胞术分析健康人骨髓间质细胞中间质干细胞相关标记CD106的表面表达 = 5) 或钙化(n = 5) 主动脉瓣。(a)CD106的相对百分比明亮的健康或钙化瓣膜的细胞显示为散点图。各组通过Student t检验进行比较。散点图中的线表示中值。(b)健康(绿色曲线)或钙化(红色曲线)主动脉瓣单个样本的直方图叠加。(c)d)健康人(n)间质细胞的整体醛脱氢酶(ALDH)活性 = 5) 和钙化(n = 5) 主动脉瓣在单细胞染色后通过流式细胞术进行分析,采用酶荧光分析。(c)ALDH的相对百分比明亮的健康或钙化瓣膜的细胞显示为散点图。各组通过Student t检验进行比较。散点图中的线表示中值。(d)典型点图显示了从健康和钙化瓣膜分离的间质细胞群,这些瓣膜被确定为ALDH昏暗的(红色)和ALDH明亮的(绿色)。
图8
图8
健康人(n)间质细胞增殖 = 5) 和钙化(n = 5) 主动脉瓣测量为在生长培养基中培养0、2、4和6天时三倍的平均细胞数。数据通过重复测量进行双向方差分析。健康和钙化供体之间的差异通过Sidak的多重比较后测试确定,显著的p值显示在6第个测量日期。值表示为平均值±SD。双向方差分析的总体p值以粗体显示。

类似文章

引用人

工具书类

    1. Iung B等人,《欧洲心脏瓣膜病患者的前瞻性调查:欧洲心脏瓣膜疾病调查》。《欧洲心脏杂志》2003年;24:1231–1243. doi:10.1016/S0195-668X(03)00201-X。-内政部-公共医学
    1. Iung B等人,《社区瓣膜性心脏病:欧洲经验》。当前心电探头。2007;32:609–661. doi:10.1016/j.cpcechodil.2007.07.002。-内政部-公共医学
    1. 奥布莱恩KD。钙化性主动脉瓣疾病的流行病学和遗传学。《投资医学杂志》,2007年;55:284–291. doi:10.2310/6650.2007.0010。-内政部-公共医学
    1. Towler DA。钙化性主动脉瓣疾病的分子和细胞方面。Circ Res.2013;113:198–208. doi:10.1161/CIRCRESAHA.113.00155。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Yutzey KE等人,钙化性主动脉瓣疾病:钙化性动脉瓣疾病研究者联盟的共识总结。动脉硬化血栓血管生物学。2014;34:2387–2393。doi:10.1161/ATVBAHA.114.02523。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语

补充概念