Keratinocyte sheets prepared with temperature-responsive dishes show enhanced survival after in vivo grafting on acellular dermal matrices in a rat model of staged bi-layered skin reconstruction

doi:10.1016/j.reth.2019.07.003

.2019年7月27:11:167-175。

doi:10.1016/j.reth.2019.07.003。 eCollection 2019年12月。

用温度响应培养皿制备的角质形成细胞片显示体内脱细胞真皮基质在大鼠分阶段双层皮肤重建模型中的移植

Hajime Matsumine先生¹, 乔治·贾西迪斯², 大田忠义¹, 龟井和太郎¹, 藤木浩史¹, 冢本康弘¹, 桥本和贵¹, 藤井考里¹, 樱井裕久¹

附属公司

¹东京女子医科大学整形与重建外科，日本东京新宿区川大町8-1号，邮编：162-8666。
²美国马萨诸塞州波士顿市弗朗西斯街75号哈佛医学院百翰女子医院整形外科。

PMID： 31388519
预防性维修识别码： PMC6669809型
内政部： 2016年10月10日/j.reth.2019.07.003

用温度响应培养皿制备的角质形成细胞片显示体内脱细胞真皮基质移植在大鼠分阶段双层皮肤重建模型中的应用

Hajime Matsumine先生等。再生热. 2019.

.2019年7月27:11:167-175。

doi:10.1016/j.reth.2019.07.003。 eCollection 2019年12月。

作者

Hajime Matsumine先生¹, 乔治·贾西迪斯², 大田忠义¹, 龟井和太郎¹, 藤木浩史¹, 冢本康宏¹, 桥本和贵¹, 藤井花里¹, 樱井裕久¹

附属公司

¹东京女子医科大学整形与重建外科，日本东京新宿区川大町8-1号，邮编：162-8666。
²美国马萨诸塞州波士顿市弗朗西斯街75号哈佛医学院百翰女子医院整形外科。

PMID： 31388519
预防性维修识别码： PMC6669809型
内政部： 2016年10月10日/j.reth.2019.07.003

摘要

简介：通过分期移植脱细胞真皮基质（ADMs）和培养的上皮角质形成细胞片（KSs）可以实现双层皮肤重建。KS和ADM都使用了很长时间；然而，它们的联合使用效果不佳。这一结果与KSs制备过程中使用的酶处理有关，酶处理会削弱KSs对ADMs的粘附潜力和基底膜（BM）的形成。温度响应（TR）培养皿允许无酶制备KSs，同时保存BMs和细胞间粘附蛋白；然而，它们以前还没有应用于分期双层皮肤重建。使用体内在大鼠模型中，我们验证了TR培养物在序贯移植ADMs后提高KSs存活率和BM保存率的假设。

方法：在裸鼠（n=9/组）中，用商业ADM修复9 cm[2]的全层背部皮肤缺损。在手术后2周，我们用KSs（圆形，直径25 mm）移植ADM，KSs是通过酶解Dispase处理（DT对照组）或TR培养皿（TR实验组）从人细胞制备的。一周后，通过数字成像、组织学（苏木精和伊红）、免疫组织化学（IV型胶原、泛细胞角蛋白）和免疫荧光（细胞角蛋白1-5-6、层粘连蛋白）评估KSs的存活率和BMs的保存情况。

结果：TR组KSs存活率显著高于对照组（120±49 vs.63±42 mm²; 与对照DT组相比，（p<0.05）和表皮厚度（165±79 vs.65±54μm；p<0.01），以及更高的表皮成熟度（细胞角蛋白）和BMs中更密集的层粘连蛋白和IV型胶原表达在体外和体内.

结论：这些发现表明，用TR培养皿制备的KSs在移植到ADMs上时显著提高了生存率；这些结果可能有助于通过皮肤重建改善当前伤口护理的临床策略。

关键词：脱细胞真皮基质；脱细胞真皮基质；人工真皮；DMEM，Dulbecco改良的Eagle介质；表皮角质形成细胞片；HE、苏木精和曙红；IHC、免疫组织化学；KCM，角质形成细胞培养基；KSs，角质形成细胞片；角质细胞；PBS，磷酸盐缓冲盐水；温度感应盘。

PubMed免责声明

数字

图2
人KSs移植大鼠模型。（A）全厚方形皮肤缺损（30×30 mm²)用手术剪刀在实验大鼠背部制作。（B）在伤口上植入ADM覆盖的缺损。（C）从温度响应（TR）培养皿和正常培养皿（DT）中收集的培养KS通过CellShifter™细胞片回收系统（圆形，直径25mm）转移到新皮层的中央。（D）在35mm直径的皮氏培养皿中，用软膏填充纱布将移植的KS切割成35mm直径圆圈。比例尺代表10 mm。

图3
人类KSs：组间外观、组织结构和薄板厚度的比较。细胞片采集后，（A）DT培养KS和（B）TR培养KSs的外观差异不大。比例尺代表1 mm。HE染色显示，与（C）DT培养KS相比，（D）TR培养的KS的基底侧细胞结构更加有序和致密。比例尺表示50μm。IV型胶原和层粘连蛋白免疫染色显示IV型胶原及层粘连素在基底侧TR培养KS中广泛表达（F和H）；相反，DT培养的KS仅显示胶原IV和层粘连蛋白（E和G）的稀疏表达。比例尺指示50μm。（一） DT培养KSs的平均厚度为15.2±5.7μm，TR培养KS的平均厚度是17.7±3.5μm；在*在体外*各组KS的厚度。

图4
KSs移植物移植到ADM后一周的外观、病理特征、移植物存活面积和表皮厚度。比例尺代表1 mm。放大×50倍，HE染色显示（D）TR培养KSs移植物的表皮层较（C）DT培养KS移植物厚；比例尺代表500μm。放大×200倍，HE染色显示（E）DT培养KSs移植物的基底细胞稀疏未对齐；相反，（F）TR培养的KS移植物显示真皮肉芽组织和KS之间的基底细胞呈栅栏状。（G）移植到ADMs后一周KSs移植物存活面积为120±49 mm²对于TR培养的KSs移植物，比DT培养的KSs移植物高2倍（63±42 mm²)（p＜0.05）。（H） HE染色显示，TR培养KSs移植物的表皮厚度为165±78μm，是DT培养KS移植物表皮厚度（65±54μm）的2.5倍（p<0.01）。

图5
用分离酶处理（DT）或TR培养皿制备的KSs，并在移植后一周移植到ADM上。抗泛细胞角蛋白双重免疫染色(红色)和抗胶原蛋白IV(绿色)抗体。比例尺代表100μm。

图6
**角质形成细胞的免疫组织化学。**在DT培养KS移植物和TR培养KSs移植物中，尽管厚度不同，但堆叠细胞对细胞角蛋白5（泛表皮细胞标记物）均呈阳性染色。细胞角蛋白1（基底细胞层以上表达的表皮标记物）仅在DT培养KS移植物的极薄层中呈阳性，而在TR培养的KS的较厚且密集堆积的刺细胞层和颗粒细胞层中呈阳性。细胞角蛋白6（过度增殖鳞状细胞标记物）在DT培养KSs移植物的细胞中呈稀疏阳性，但在TR培养KS移植物的所有表皮层均呈阳性。比例尺代表100μm。

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

成纤维细胞生长因子强化胶原蛋白海绵可提高角质细胞片存活率。
长谷川Y、松美H、大田A、早川N、龟井W、新美Y、樱井H。长谷川等人。组织工程A部分2022年4月；28（7-8）：373-382。doi:10.1089/ten。茶2021.0138。Epub 2022年1月21日。组织工程A部分2022。 PMID：34598658
在皮肤缺损模型中，从温度响应培养皿中采集上皮角质形成细胞片可以保存基底膜蛋白并提高细胞存活率。
大阪A、Sekine H、Soejima K、樱井H、清水T。 Osada A等人。《组织工程与再生医学杂志》，2017年9月；11(9):2516-2524. doi:10.1002/term.2149。Epub 2016年4月6日。《组织工程与再生医学杂志》，2017年。 PMID：27061496
用层粘连蛋白5预处理人角质形成细胞片可提高其移植效率。
武田A、Kadoya K、Shioya N、Uchinuma E、Tsunenaga M、Amano S、Nishiyama T、Burgeson RE。武田A等人。《皮肤病学杂志》。1999年7月；113（1）：38-42。doi:10.1046/j.1523-1747.1999.00645.x。《皮肤病学杂志》。1999 PMID：10417616
生物制品和脱细胞真皮基质在头颈部重建中的应用：综述。
Patel S、Ziai K、Lighthall JG、Walen SG。 Patel S等人。美国耳鼻喉科杂志。2022年1月至2月；43(1):103233. doi:10.1016/j.amjoto.2021.103233。Epub 2021年9月15日。美国耳鼻喉科杂志。2022 PMID：34537508 审查。
脱细胞真皮基质上培养的自体上皮移植在深度烧伤治疗中的临床应用。
Fang T、Lineaweaver WC、Sailes FC、Kisner C、Zhang F。 Fang T等人。 Ann Plast Surg.2014年11月；73(5):509-15. doi:10.1097/SAP.0b013e3182840883。 2014年《整形外科年鉴》。 PMID：24322642 审查。

查看所有类似文章

引用人

细胞膜工程的最新进展：从制造到临床翻译。
Thummarati P、Laiwattanapaisal W、Nitta R、Fukuda M、Hassametto A、Kino-Oka M。 Thummarati P等人。生物工程（巴塞尔）。2023年2月6日；10(2):211. doi:10.3390/生物工程10020211。生物工程（巴塞尔）。2023 PMID：36829705 免费PMC文章。审查。
碱性成纤维细胞生长因子-强化胶原蛋白-明胶海绵在2周内完成真皮样组织的形成：一项前瞻性队列研究。
Matsumine H，Niimi Y。 Matsumine H等人。再生热。2022年8月23日；21:210-215. doi:10.1016/j.reth.2022.07.007。eCollection 2022年12月。再生热。2022 PMID：36092504 免费PMC文章。

工具书类

1. Yannas I.V.Hesitant从人造皮肤走向器官再生。再生生物材料。2018;5:189.-项目管理咨询公司-公共医学
1. Bhardwaj N.、Chouhan D.、Mandal B.B.组织工程皮肤和伤口愈合：当前策略和未来方向。当前药物设计。2017;23:3455.-公共医学
1. Abaci H.E.、Guo Z.、Doucet Y.、Jacków J.、Christiano A.下一代人类皮肤构建作为药物开发的先进工具。2017年《实验生物医学》；242:1657.-项目管理咨询公司-公共医学
1. Rheinwald J.G.，Green H.人类表皮角质形成细胞株的连续培养：由单细胞形成角化集落。单元格。1975;6:331.-公共医学
1. Gardien K.L.、Middelkoop E.、Ulrich M.M.基于细胞的烧伤伤口治疗进展。Regen Med.2014；9点201分。-公共医学

LinkOut-更多资源

全文源

[1] Yannas I.V.Hesitant从人造皮肤走向器官再生。再生生物材料。2018;5:189.-项目管理咨询公司-公共医学

[2] Yannas I.V.Hesitant从人造皮肤走向器官再生。再生生物材料。2018;5:189.-项目管理咨询公司-公共医学

[3] Bhardwaj N.、Chouhan D.、Mandal B.B.组织工程皮肤和伤口愈合：当前策略和未来方向。当前药物设计。2017;23:3455.-公共医学

[4] Bhardwaj N.、Chouhan D.、Mandal B.B.组织工程皮肤和伤口愈合：当前策略和未来方向。当前药物设计。2017;23:3455.-公共医学

[5] Abaci H.E.、Guo Z.、Doucet Y.、Jacków J.、Christiano A.下一代人类皮肤构建作为药物开发的先进工具。2017年《实验生物医学》；242:1657.-项目管理咨询公司-公共医学

[6] Abaci H.E.、Guo Z.、Doucet Y.、Jacków J.、Christiano A.下一代人类皮肤构建作为药物开发的先进工具。2017年《实验生物医学》；242:1657.-项目管理咨询公司-公共医学

[7] Rheinwald J.G.，Green H.人类表皮角质形成细胞株的连续培养：由单细胞形成角化集落。单元格。1975;6:331.-公共医学

[8] Rheinwald J.G.，Green H.人类表皮角质形成细胞株的连续培养：由单细胞形成角化集落。单元格。1975;6:331.-公共医学

[9] Gardien K.L.、Middelkoop E.、Ulrich M.M.基于细胞的烧伤伤口治疗进展。Regen Med.2014；9点201分。-公共医学

[10] Gardien K.L.、Middelkoop E.、Ulrich M.M.基于细胞的烧伤伤口治疗进展。Regen Med.2014；9点201分。-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

您的RSS源

用温度响应培养皿制备的角质形成细胞片显示体内脱细胞真皮基质在大鼠分阶段双层皮肤重建模型中的移植

附属公司

用温度响应培养皿制备的角质形成细胞片显示体内脱细胞真皮基质移植在大鼠分阶段双层皮肤重建模型中的应用

作者

附属公司

摘要

数字

类似文章

引用人

工具书类

LinkOut-更多资源

全文源

摘要

数字

类似文章

引用人

工具书类

相关信息

LinkOut-更多资源

全文源