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.2019年10月；9(10):1756-1768.
doi:10.1002/2211-5463.12714。 Epub 2019 9月7日。

三苯氧胺影响实验小鼠模型中的慢性胰腺炎相关纤维化形成：一种超越Cre重组的效应

李轩 1, 克里斯蒂安·克拉皮耶 1, 英戈·克莱特 2, Rainer Heuchel公司 1
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三苯氧胺影响实验小鼠模型中的慢性胰腺炎相关纤维化形成：一种超越Cre重组的效应

李轩等。 FEBS开放式生物. 2019年10月.

摘要

三苯氧胺非常成功地用于Cre的诱导应急响应小组-在条件小鼠模型中介导的基因组重组。然而，最近的研究表明，三苯氧胺在体内外给药后，也可能影响几种疾病模型的纤维化反应。为了研究三苯氧胺对实验性胰腺炎小鼠模型胰腺纤维化形成的可能影响，并评估其最佳治疗方案，我们通过灌胃给雄性和雌性C57BL/6J小鼠服用三苯氧明，然后等待不同的时间，然后用蓝绿色素诱导慢性胰腺炎。通过胶原沉积和肌成纤维细胞和巨噬细胞的数量，我们观察到他莫昔芬对纤维化反应的性别特异性和时间依赖性影响。体外研究的结果支持了我们的体内观察，在体外研究中，天蓝色素与4-羟基三苯氧胺合用或不合用以刺激原代小鼠雌性和雄性胰腺星状细胞。实时PCR也表明，这种效应可能与雌、雄星形细胞ERα表达的差异有关。我们的数据表明，三苯氧胺给药具有不容忽视的副作用，这会影响基于天蓝素的小鼠慢性胰腺炎模型的实验结果。我们建议在给予天蓝蛋白之前等待2周，以将所述雌性小鼠纤维化模型的副作用降至最低。

关键词：Cre-LoxP；纤维化；胰腺炎；他莫昔芬。

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利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
图1
各组慢性胰腺炎组织H&E染色。正常腺泡消失，取而代之的是与腺泡至导管化生相关的进行性纤维化，以及成纤维细胞和炎性细胞的浸润。（A） 每组雌性小鼠慢性胰腺炎组织H&E染色的代表性图像。（B） 每组雄性小鼠慢性胰腺炎组织H&E染色的代表性图像。200倍放大，比例尺：50μm。
图2
图2
慢性胰腺炎组织纤维化指数的量化。（A） 在三天和三周无三苯氧胺期后，三苯氧芬预处理和不同洗脱期显著增加雌性小鼠的胶原纤维指数。（B） 三苯氧胺预处理降低了无三苯氧酚2周和3周后雄性小鼠的表达。比较对象是在最后一次三苯氧胺灌胃后3天开始仅接受玉米油（载体）和天蓝蛋白治疗的小鼠。（C，D）雌性和雄性胰腺在不同时间点的苦味酸红/固绿染色的代表性图像。200倍放大，比例尺：50μm。数值代表平均值±95%CI公司(n个=每组5），（*）P（P） < 0.05, (**)P（P）<0.01，Mann-Whitney检验。
图3
图3
慢性胰腺炎组织中I型胶原的免疫荧光定量。（A） 三苯氧胺预处理后的不同洗脱期显著增加了无三苯氧酚3天和3周后雌性小鼠体内蓝绿色素诱导的I型胶原表达。（B） 三苯氧胺预处理降低了雄性小鼠在1周、2周和3周后的表达。将其与在最后一次三苯氧胺灌胃后3天开始仅接受玉米油（载体）加天蓝素治疗的小鼠进行比较。（C，D）不同时间点雌雄胰腺免疫荧光染色的代表性图像。200倍放大，比例尺：50μm。数值代表平均值±95%CI公司(n个=每组5），（*）P（P） < 0.05, (**)P（P） < 0.01, (***)P（P）<0.001，Mann-Whitney检验。
图4
图4
胶原蛋白的免疫荧光定量四、慢性胰腺炎组织。（A） 三苯氧胺预处理后不同洗脱时间显著降低了水杨酸诱导的胶原蛋白四、雌性小鼠在1周和3周无他莫西芬期后的表达，以及（B）雄性小鼠在3天和1周无他莫西芬期之后的表达。比较对象是只接受玉米油（载体）和蓝绿色素治疗的小鼠。（C，D）不同时间点雌雄胰腺免疫荧光染色的代表性图像。200倍放大，比例尺：50μm。数值代表平均值±95%CI公司(n个=每组5），（*）P（P） < 0.05, (**)P（P） < 0.01, (***)P（P）<0.001，Mann-Whitney检验。
图5
图5
慢性胰腺炎组织中纤维连接蛋白的免疫荧光定量。三苯氧胺预处理后的不同洗脱期显著增加了女性（A）和男性（B）小鼠中由天蓝蛋白诱导的纤维连接蛋白表达。比较对象是只接受玉米油（载体）和蓝绿色素治疗的小鼠。（C，D）不同时间点雌雄胰腺免疫荧光染色的代表性图像。200倍放大，比例尺：50μm。数值代表平均值±95%CI公司(n个=每组5），（**）P（P） < 0.01, (***)P（P）<0.001，曼-惠特尼检验。
图6
图6
相对量化产品分成合同慢性胰腺炎组织中波形蛋白的免疫荧光。（A） 三苯氧胺预处理后的不同洗脱期显著增加了三天无三苯氧碱期后雌性小鼠体内由蓝绿色素诱导的波形蛋白表达。（B） 三苯氧胺预处理降低了雄性小鼠在三天和两周无三苯氧酚期后的百分比。比较对象是只接受玉米油（载体）和蓝绿色素治疗的小鼠。（C，D）不同时间点雌雄小鼠免疫荧光染色的代表性图像。200倍放大，比例尺：50μm。数值代表平均值±95%CI公司(n个=每组5），（**）P（P） < 0.01, (***)P（P）<0.001，Mann-Whitney检验。
图7
图7
通过F4/80免疫荧光对慢性胰腺炎组织中巨噬细胞的相对定量。（A） 在三天、两周和三周无三苯氧胺期后，三苯氧芬预处理后不同的洗脱期显著增加了女性小鼠中蓝蛋白诱导的F4/80表达。（B） 在雄性小鼠无三苯氧胺3天、1周和3周后观察到F4/80表达减少的趋势。比较对象是只接受玉米油（载体）和蓝绿色素治疗的小鼠。（C，D）不同时间点雌雄小鼠免疫荧光染色的代表性图像。200倍放大，比例尺：50μm。数值代表平均值±95%CI公司(n个=每组5），（*）P（P） < 0.05, (**)P（P）<0.01，Mann-Whitney检验。
图8
图8
这个信使核糖核酸的表达水平Col1a1、Ctgf、Tgfb1、Serpine1、，和高级服务1由评估RT公司‐聚合酶链反应在女性小学产品分成合同s.（A）女性PSC公司s的表达显著上调第1a1列和细胞生长因子，但是高级服务1与4-羟基三苯氧胺和天蓝蛋白共同孵育24小时后的表达水平。（B） 女性产品分成合同s显示显著下调丝氨酸1 信使核糖核酸与4-羟基三苯氧胺和天蓝蛋白共同孵育48小时后表达。相对表达水平归一化为女性产品分成合同在24小时和48小时的时间点，仅用天蓝色素加三苯氧胺溶媒（=1.0个任意单位）治疗。数值代表平均值±95%CI公司(n个=每组5），（*）P（P） < 0.05, (**)P（P） < 0.01, (***)P（P）<0.001，学生测试。
图9
图9
这个信使核糖核酸的表达水平Col1a1、Ctgf、Tgfb1、Serpine1、，和高级服务1由评估RT公司‐聚合酶链反应男性初选产品分成合同s.（A）男性产品分成合同s显示显著下调第1a1列但上调Tgfb1型与4-羟基三苯氧胺和天蓝蛋白共同孵育24小时后的表达水平。（B） 男产品分成合同s显示显著下调第1a1列和Ctgf公司但上调Tgfb1型和丝氨酸1与4-羟基他莫昔芬和天蓝素共孵育48小时后的表达。相对表达水平归一化为男性产品分成合同s分别在24小时和48小时的时间点仅用天蓝色素加95%EtOH（＝1.0个任意单位）处理。数值代表平均值±95%CI公司(n个=每组5），（*）P（P） < 0.05, (**)P（P） < 0.01, (***)P（P）<0.001，学生测试。
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