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.2019年10月;23(10):6942-6954.
doi:10.1111/jcmm.14579。 Epub 2019年7月31日。

EZH2通过调节人类OSCC细胞中STAT3和FoxO1信号促进侵袭和肿瘤糖酵解

附属公司

EZH2通过调节人OSCC细胞中STAT3和FoxO1信号传导促进侵袭和肿瘤糖酵解

闵政等。 细胞与分子医学杂志. 2019年10月.

摘要

zeste同源物2(EZH2)的增强子是多梳组(PcG)蛋白的成员,是一种在多种人类癌症中过度表达的癌基因。在这里,我们使用免疫组织化学染色发现EZH2与口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者的低生存率相关。EZH2过度表达导致肿瘤糖酵解、上皮间质转化(EMT)、OSCC细胞迁移和侵袭的显著诱导。相反,EZH2的沉默抑制了OSCC细胞中肿瘤的糖酵解、EMT、迁移和侵袭。EZH2的异位过度表达增加了pY705处STAT3的磷酸化,降低了FoxO1的表达,当抑制STAT3时FoxOl的表达增强。此外,EZH2过表达导致裸鼠异种移植物中FoxO1 mRNA水平显著降低。这些结果表明,调节EZH2可能有可能成为OSCC治疗的靶点。

关键词:福克斯O1;STAT3;zeste同源物2的增强子;上皮-间充质转化;入侵;口腔鳞癌;肿瘤糖酵解。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者报告在这项工作中没有利益冲突。

数字

图1
图1
zeste同源物2(EZH2)过表达增强与口腔鳞癌(OSCC)患者的转移和不良预后相关。A、 显示了典型口腔鳞状细胞癌标本和正常口腔粘膜的组织切片,用免疫组织化学方法对EZH2进行了染色。放大倍数:左100×,右400×。B、 不同EZH2表达阳性率OSCC患者的分布。对于OSCC标本的免疫组织化学结果中的阴性表达、弱阳性表达、中阳性表达和强阳性表达,百分比分为(−),<5%;(+), 5%‐25%; (++), 25%‐50%; (+++), >50%. C、 OSCC患者的Kaplan-Meier生存分析表明,EZH2的高表达与总生存率较低相关
图2
图2
zeste同源物2(EZH2)过表达增强剂增强口腔鳞癌(OSCC)细胞的迁移、侵袭潜能和EMT。A、 建立稳定EZH2过表达的Cal‐27和Tca8113细胞或对照细胞,并进行RT-PCR和Western blot分析。B、 EZH2过度表达细胞和对照细胞的伤口愈合分析。左侧显示了具有代表性的图像,右侧显示了定量分析。通过ImageJ软件计算的闭合划痕面积(%)在伤口愈合试验中进行量化。C、 EZH2过度表达细胞和对照细胞的Transwell侵袭试验。通过每个细胞系的Matrigel对侵袭细胞的定量显示为其对照组的比例。对五个预先确定的区域中的侵袭细胞进行计数。D、 使用Western印迹和RT-PCR检测Cal‐27/EZH2细胞和对照细胞中E‐钙粘蛋白和β-catenin以及N‐钙粘蛋白和波形蛋白的相对表达。E、 免疫荧光染色用于分析Cal-27/EZH2和对照细胞中E-cadherin、β-catenin、N-cadherin和vimentin(绿色)的表达。细胞核用DAPI(蓝色)染色。F、 流式细胞术用于检测Cal‐27/EZH2和对照细胞中凋亡细胞的百分比。所有分析均一式三份。结果显示为平均值±SD*P(P) < .05; **P(P) < .01; ***P(P) < .001
图3
图3
zeste同源物2(EZH2)敲除增强剂抑制口腔鳞癌(OSCC)细胞的迁移、侵袭潜能和EMT。A、 建立Cal‐27和Tca8113细胞以及稳定的EZH2敲除或打乱的对照细胞,并进行RT-PCR和Western blot分析。B、 EZH2击倒细胞和扰乱对照细胞的伤口愈合分析。左侧显示了具有代表性的图像,右侧显示了定量分析。通过ImageJ软件计算的闭合划痕面积(%)在伤口愈合试验中进行量化。C、 EZH2击倒细胞和扰乱对照细胞的跨阱侵袭分析。通过每个细胞系的Matrigel对侵袭细胞的定量显示为其对照组的比例。对五个预先确定的区域中的侵袭细胞进行计数。D、 使用Western blot和RT-PCR检测EZH2敲除的Cal‐27细胞和打乱的对照细胞中E‐cadherin和β‐catenin以及N‐cadtherin和vimentin的相对表达。E、 免疫荧光染色用于分析EZH2敲除的Cal‐27细胞和扰乱的对照细胞中E‐钙粘蛋白、β‐catenin、N‐钙黏蛋白和波形蛋白(绿色)的表达。细胞核用DAPI(蓝色)染色。F、 流式细胞术用于检测EZH2敲除的Cal‐27细胞和打乱的对照细胞中凋亡细胞的百分比。所有分析均一式三份。结果显示为平均值±SD*P(P)<0.05**P(P) < .01; ***P(P) < .001
图4
图4
zeste同源物2(EZH2)过表达增强剂增强口腔鳞癌(OSCC)细胞的糖酵解。A、 葡萄糖消耗和乳酸生成分析用于检测对照组、对照组5mM 2‐DG、EZH2‐过度表达Cal‐27和Tca8113细胞中的葡萄糖消耗和乳酸盐生成水平。数据表明,EZH2过度表达的Cal‐27和Tca8113细胞的葡萄糖消耗和乳酸生成水平显著增加,而2‐DG抑制EZH2-增加的糖酵解。B、 葡萄糖消耗和乳酸生成分析用于检测EZH2敲低Cal‐27和Tca8113细胞中的葡萄糖消耗和乳酸盐生成水平。数据表明,EZH2的下调导致Cal‐27和Tca8113细胞的葡萄糖消耗和乳酸生成降低。C、 在对照组、对照组、EZH2过度表达Cal‐27和Tca8113细胞中检测了E‐钙粘蛋白和β‐连环蛋白、N‐钙黏蛋白和波形蛋白的相对表达,以及EZH2-过度表达和5mM 2‐DG。每项分析均一式三份。结果显示为平均值±SD*P(P) < 0.05; **P(P) < 0.01; ***P(P)<0.001
图5
图5
zeste同源物2(EZH2)过表达增强剂提高STAT3的磷酸化并下调FoxO1。A、 通过Western blot和RT-PCR检测Cal‐27/EZH2细胞中的FoxO1。Cal‐27/EZH2细胞中FoxO1蛋白和mRNA水平显著降低。B、 通过Western blot检测Cal‐27/EZH2细胞中的pY‐STAT3和STAT3蛋白水平。结果表明,pY‐STAT3蛋白水平随着EZH2表达而增强,而STAT3保持不变。C、 建立具有稳定STAT3敲除或扰乱细胞的Cal‐27细胞,并进行RT‐PCR和Western印迹分析。通过Western blot和RT-PCR检测STAT3敲除的Cal‐27细胞中的FoxO1。STAT3抑制后FoxO1 mRNA和蛋白水平上调。每项分析均一式三份。结果显示为平均值±SD*P(P) < .05; **P(P) < .01; ***P(P) < .001
图6
图6
zeste同源物2(EZH2)过表达增强剂促进裸鼠异种移植模型中口腔鳞癌(OSCC)肿瘤的生长。A、 在裸鼠异种移植模型中评估了EZH2最初过度表达和对照肿瘤的体内荧光图像(A)、肿瘤体积(B)和肿瘤重量(C)。D、 使用RT-PCR评估Cal‐27/EZH2细胞和对照细胞中的EZH2、STAT3和FoxO1 mRNA水平。结果显示为平均值±SD*P(P) < .05; **P(P)<.01***P(P) < .001

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