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.2019年8月：95:1-10。
doi:10.1016/j.oraloncology.2019.05.027。 Epub 2019年6月4日。

细胞内钙保护素（S100A8/A9）控制头颈鳞癌上皮分化和caspase介导的EGFR裂解

Prokopios P Argyris公司 1, 扎卡里·斯拉马 1, 克里斯·马尔兹 1, Ioannis G Koutlas公司 2, 贝蒂·帕克扎德 三, 凯坦·帕特尔 4, 迪帕克·卡德马尼 4, 阿里·坎马尼翁 5, 马克·C·赫茨伯格 6
附属公司

细胞内钙保护素（S100A8/A9）控制头颈鳞癌上皮分化和caspase介导的EGFR裂解

Prokopios P Argyris公司等。 口腔癌. 2019年8月.

摘要

目标：Calprotectin（S100A8/A9）在头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）中发挥抑癌作用，癌细胞中的表达与患者生存率直接相关。我们试图描述钙保护素在HNSCC中的抑制作用。

目的：（1） 研究S100A8/A9表达随口腔癌变进展的变化，（2）确定细胞内钙保护素是否可以调节HNSCC中的表皮生长因子受体（EGFR），这是一种负性预后因子。

材料和方法：用免疫组织化学（IHC）分析HNSCC标本（N=46）中S100A8/A9，包括高分化（WD，N=19）、中分化（MD，N:14）、低分化（PD，N=5）和非角化/基底样细胞（NK/BAS，N=8），以及癌前上皮发育不良（PED，N=16）。同样，在HNSCC中分析EGFR（N=21）。为了确定calprotectin和EGFR表达是否存在机械联系，使用免疫印迹和免疫荧光显微镜比较S100A8/A9表达或沉默（shRNA）的TR146 HNSCC细胞的EGFR水平和caspase-3/7活性。

结果：在正常口腔粘膜上皮中，S100A8/A9在基底上细胞的细胞质和细胞核中强烈染色；基底细胞始终为S100A8/A9阴性。在PED和HNSCC中，S100A8/A9的表达低于相邻正常上皮组织（NAT），并且在WD、MD、PD和NK/BAS HNSCC的表达逐渐下降。S100A8/A9和EGFR水平呈负相关，这是在TR146细胞沉默S100A8/A9时在体外模拟的。沉默S100A8/A9显著降低caspase-3/7活性，而EGFR水平升高。

结论：在HNSCC中，S100A8/A9与细胞分化直接相关，并似乎促进caspase-3/7介导的EGFR裂解，这可以解释为什么S100A8/A9高肿瘤患者生存时间更长。

关键词：钙卫蛋白；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3/7；EGFR；上皮分化；头颈部鳞状细胞癌；NGF；P16+鳞状细胞癌；癌前上皮异型增生；S100A8/A9；VEGF-A；VEGF-C。

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数字

图1：
图1:。S100A8/A9在头颈部癌变分化和进展过程中的表达。
（A）正常粘膜上皮和癌前上皮发育不良（PED）的组织病理学和S100A8/A9免疫组织化学特征。钙卫蛋白复合物的S100A8和S100A9亚单位在除基底细胞层外的复层鳞状口腔上皮中广泛而强烈地表达。PED中丢失S100A8和S100A9的焦点（黑色箭头）（N=16）；总体而言，与正常邻近组织（NAT）相比，免疫染色强度较弱（比例尺=200μm）。（B）HNSCC的组织病理学和S100A8/A9免疫组织化学特征。HNSCC标本（N=46）分为WD（N=19）、MD（N:14）、PD（N=5）和NK/BAS（N=8）肿瘤。WD HNSCC表现出与口腔粘膜上皮相似的表型，表现出较强的弥漫性S100A8和S100A9免疫染色。S100A8/A9在间变性PD标本中表达缺失。S100A8/A9持续阴性，p16+NK/BAS肿瘤通常失去鳞状特征（比例尺=100μm）。还显示了同种抗体阴性对照。免疫反应物的定量（C）S100A8和（D）S100A9在正常邻近上皮组织（NAT，N=8）、癌前上皮发育不良（PED，N=16）和头颈部鳞癌（HNSCC，N=46）中表达。S100A8和S100A9蛋白水平在NAT向癌前病变过渡期间逐渐降低。与NAT或高分化肿瘤相比，S100A8/A9在低分化或非角化/基底样HNSCC中接近完全缺失（中位数，**p<0.01，**p<0.001，***p<0.0001，非参数Kruskal-Wallis检验）。
图2：
图2:。Calprotectin与HNSCC中EGFR的表达呈负相关。
（A）S100A8/A9-高（N=11）和S100A8-A9-低（N=10）HNSCC中EGFR免疫反应。（B）S100A8/A9高肿瘤中膜相关免疫反应性EGFR低于S100A8/A9低肿瘤（比例尺=100μm，中位数，**p<0.01，Mann-Whitney U检验）。（C）使用S100A8和S100A9的shRNA（TR146-S100A8/A9-KD）、TR146-scrambled shRNA-control和永生化口腔角质形成细胞（TERT2）敲除之前和之后TR146细胞中的S100A8-（红色）和S100A09（绿色）。有代表性的免疫印迹（来自至少两个独立重复）显示，β-肌动蛋白用于总蛋白负荷控制。（D）沉默S100A8/A9上调EGFR蛋白表达在体外TR146、TR146-S100A8/A9-KD和TR146-shRNA对照中的EGFR（绿色）和TERT2细胞中的β-actin用于总蛋白负荷控制。所示为来自两个独立重复序列的代表性免疫印迹。表达钙保护素的TR146、TR146对照和TERT2细胞表达的EGFR蛋白少于TR146-S100A8/A9-KD。（E）用免疫荧光显微镜观察S100A8/A9-KD中相对于亲代和shRNA-control TR146细胞的EGFR（绿色）表达。DAPI（蓝色）突出显示细胞核。S100A8/A9-敲除TR146-S100A8/A9KD细胞的EGFR水平似乎高于S100A8-A9-阳性TR146和TR146-shRNA对照HNSCC细胞（至少三个生物复制品的代表性图像，比例尺=5Ĉm）。插入物中显示了阴性同型对照。（F）定量TR146、TR146-S100A8/A9-KD和TR146-shRNA对照细胞的免疫荧光密度（平均值±SEM，*p<0.05，单向Anova-Tukey HSD试验）。
图3：
图3:。S100A8/A9的缺失抑制了辐射后胱天蛋白酶3/7的凋亡活性。
（A）TR146、TR146-S100A8/A9-KD和TR146-shRNA对照组暴露于5-Gy的X射线照射下，诱导caspase介导的细胞凋亡。暴露后30分钟、3小时和24小时观察半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7活性。辐射敏感性、钙保护素表达、TR146和TR146-shRNA-control凋亡细胞具有许多橙红色溶酶体和不太强烈的蓝色细胞核。TR146-S100A8/A9-KD细胞似乎对X射线不太敏感，但可以避免凋亡，并显示出缺少或减少的橙红色溶酶体染色（来自三个生物复制品的代表性图像，比例尺=60μm，插图；相应高功率复制品的低倍图像）。（B）TR146、TR146-S100A8/A9-KD和TR146-shRNA对照中活化caspase-3/7的定量。随着时间的推移，X射线照射激活了表达TR146 HNSCC细胞S100A8/A9的caspase-3/7，而沉默S100A8/A9则显著降低了辐射后30分钟、3小时和24小时caspase-3/4的活性（平均值±SEM，*p<0.05，**p<0.01，单向Anova-Tukey HSD试验）。（C）将HNSCC的TCGA病例分为两组，并根据弱（百万读数，或RPM⩽100计数）或强（RPMͮ1000计数）表达水平分为低S100A8和高S100A9队列。（D） 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1、3、7、和8S100A8/A9-低和高肿瘤标本中的表达：S100A8-A9-高HNSCC显著上调caspase mRNA水平。对S100A8/A9-低（n=89）和高（n=104）HNSCC样本进行比较分析（平均值±SEM，双尾Student t检验，方差相等）。
图4：
图4:。相对于S100A8和S100A9，正常和HNSCC样本中的EGFR、NGF、VEGF-A和VEGF-C。
（A）使用TCGA RNA-seq数据将正常邻近组织（N=43）和HNSCC（N=521）中的EGFR、NGF、VEGF-A和VEGF-C基因表达（mRNA）谱归一化为GAPDH。表达数据显示为平均值±SEM***p=0.0006（方差相等的双尾学生t检验）。（B）TCGA病例被分为两组，并如上所述分为低（n=89）和高（n=104）S100A8/A9队列。S100A8/A9高表达的HNSCC肿瘤中VEGF-A/C和NGF的mRNA表达水平显著高于低表达的HNSCC肿瘤。EGFR mRNA在S100A8/A9高低肿瘤中的表达相似。数据显示为平均值（log10)±扫描电镜**p=0.008，*p=0.02（等方差双尾学生t检验）。RPM：每百万读取数。
图5。
图5.HNSCC中S100A8/A9驱动的caspase介导的EGFR裂解的拟议保护机制。
半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1、3和7可以蛋白水解切割和翻译后修饰EGFR[20、21]。当在HNSCC肿瘤中表达时，假设钙卫蛋白增加胱天蛋白酶1、3和7的转录水平和活性，从而导致C末端膜性EGFR的翻译后蛋白水解切割。S100A8/A9相关的EGFR下调可能有助于提高S100A8/A9高HNSCC患者的总体生存率。
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工具书类

    1. Cai Y，Dodhia S，Su GH.PI3K通路中的失调和头颈部鳞癌的靶向治疗。Oncotarget公司。2017;8:22203–17。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Ferlay J、Shin HR、Bray F、Forman D、Mathers C、Parkin DM。2008年全球癌症负担估计：GLOBOCAN 2008。国际癌症杂志。2010;127:2893–917.-公共医学
    1. Sivasithamparam J，Visk CA，Cohen EE，King AC。头颈癌患者的可改变风险行为。癌症。2013;119:2419–26.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. D’Souza G、Kreimer AR、Viscidi R、Pawlita M、Fakhry C、Koch WM等。人类乳头瘤病毒和口咽癌的病例对照研究。《新英格兰医学杂志》，2007年；356:1944–56.-公共医学
    1. Miller KD、Siegel RL、Lin CC、Mariotto AB、Kramer JL、Rowland JH等，2016年癌症治疗和生存统计。CA癌症临床杂志。2016;66:271–89.-公共医学

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