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。2019年7月23日；24(14):2665.
doi:10.3390/分子24142665。

二烯丙基二硫通过PI3K/Akt/mTOR途径诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡和自噬

紫起月 1, 新冠 1, 芮超（Rui Chao） 1, 黄灿灿 1, 李东方 1, 潘潘阳 1, 刘珊珊 1, 长谷川智子 2, 郭洁（音译） 1, 李敏琦 三
附属公司

二烯丙基二硫化物通过PI3K/Akt/mTOR途径诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡和自噬

紫起月等。 分子。 。

摘要

二烯丙基二硫（DADs）是一种天然有机化合物，从大蒜和葱中提取，具有抗多种肿瘤的作用。本研究探讨了DADs在人骨肉瘤细胞中的抗肿瘤活性及其作用机制。MG-63细胞暴露于DAD（0、20、40、60、80和100μM）不同时间长度（24、48和72小时）。CCK8检测结果表明，DAD以剂量和时间依赖性的方式抑制骨肉瘤细胞活性。FITC-Annexin V/碘化丙啶染色和流式细胞术显示，细胞凋亡率增加，细胞周期在G2/M期随着DAD浓度的增加而增加。采用蛋白质印迹分析来检测胱天蛋白酶-3、Bax、Bcl-2、LC3-II/LC3-I和p62的水平以及mTOR途径的抑制。LC3-II蛋白的高表达表明DAD诱导自噬体的形成。此外，添加3-甲基腺嘌呤后，DADs诱导的凋亡减弱，表明DADs治疗导致MG-63细胞自噬介导的死亡。此外，DADs抑制p-mTOR激酶活性，抑制PI3K/Akt/mTOR通路增加DADs诱导的细胞凋亡和自噬。总之，我们的结果表明DAD诱导G2/通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路实现人骨肉瘤细胞的M停滞、凋亡和自噬死亡。

关键词：PI3K/Akt/mTOR通路；细胞凋亡；自噬；二烯丙基二硫；骨肉瘤。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
图1
抑制细胞增殖并诱导G2/骨肉瘤MG-63细胞中的M细胞周期阻滞。(A类)二烯丙基二硫（DAD）的化学结构。(B)细胞活力。用指定剂量的DAD（0、20、40、60、80和100μM）处理MG-63细胞不同时间（24、48和72小时）。通过CCK8分析检测细胞活力(n=3). (C类,D类)克隆形成。用0、20、60和100μM DAD处理MG-63细胞，9天后用克隆形成试验测定细胞集落数。(E类,F类)DAD处理细胞24 h，流式细胞仪检测细胞周期。G公司2/MG-63细胞中观察到M细胞周期阻滞。子G的百分比1，G0/G公司1、S和G2/M期细胞群由至少三个独立实验的平均值±SD表示。统计差异由学生的t检验(*第页< 0.05,**第页与对照组相比<0.01）。
图2
图2
诱导MG-63细胞中caspase依赖性凋亡。(A类,B)细胞经Annexin V-FITC/PI染色后，室温黑暗放置15分钟，流式细胞仪检测细胞凋亡率。数据以平均值±SD表示(n=3). (C类,D类)用不同剂量的DAD处理细胞24小时，或用DAD（60μM）孵育不同小时。Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、裂解caspase 3、Bax和Bcl-2。GAPDH被用作负荷控制。(*第页< 0.05,**第页与对照组相比<0.01）。
图3
图3
触发MG-63细胞的自噬通量，抑制自噬减少DADs诱导的凋亡。(A类,B)用不同剂量的DAD处理细胞约24小时，或用DAD（60μM）孵育不同小时。采用Western blotting分析蛋白质表达，并检测抗LC-3-I、LC3-II和p62的抗体。(*第页< 0.05, **第页与对照组相比<0.01）。(C类,D类)用3-MA（2.5 mM）预处理细胞2小时，然后用100μM DAD处理细胞24小时。用流式细胞仪检测细胞凋亡。直方图显示了三个独立实验中凋亡细胞的比例。(E类,F类)Western blot显示DAD或3-MA处理后凋亡相关蛋白LC3和p62的表达。(G公司,H（H）)Western blot结果显示，与仅DAD治疗组相比，3-MA治疗后caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。GAPDH被用作负荷控制。(*第页< 0.05, **第页与对照组相比<0.01，#第页< 0.05,##第页与仅DAD治疗组相比<0.01）。
图4
图4
通过mTOR途径诱导OS细胞凋亡和自噬。(A类,B)通过Western blot分析PI3K/Akt/mTOR途径蛋白的表达。用DAD处理细胞24小时(C类)在DAD治疗24小时后（0、60和100μM），CCK8检测细胞活力。(n=3). (D类,E类)用雷帕霉素（mTOR抑制剂）预处理细胞，然后用100μM DAD孵育24小时。使用蛋白质印迹分析测定自噬相关蛋白（LC3-II/LC-3-I和p62）、凋亡相关蛋白（caspase-3、Bax和Bcl-2）和p-mTOR的水平。GAPDH被用作负荷控制。(*第页< 0.05,**第页与对照组相比P<0.01，#第页< 0.05,##第页与仅DAD治疗组相比<0.01）。
图5
图5
DAD诱导人OS细胞自噬和凋亡。
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