Long-label-retaining mammary epithelial cells are created early in ductal development and distributed throughout the branching ducts

doi:10.1016/j.mod.2019.103565

.2019年10月：159:103565。

doi:10.1016/j.mod.2019.103565。 Epub 2019年7月20日。

在导管发育的早期就产生了长标签的乳腺上皮细胞，并分布在分支导管中

劳伦·拉格尔¹, 罗伯特·D·布鲁诺², 科琳娜·布朗格¹, 吉尔伯特·H·史密斯³

附属公司

¹美国马里兰州贝塞斯达国家癌症研究所乳腺干细胞科，BRL，CCR，邮编：20892。
²美国弗吉尼亚州诺福克市Old Dominion大学健康科学学院医学诊断和转化科学学院，邮编23529。
³美国马里兰州贝塞斯达国家癌症研究所乳腺干细胞科，BRL，CCR，邮编：20892。电子地址：smithg@mail.nih.gov。

PMID： 31336167
预防性维修识别码： PMC6759405型
内政部： 2016年10月10日/j.mod.2019.103565

在导管发育的早期就产生了长标签的乳腺上皮细胞，并分布在分支导管中

劳伦·拉格尔等。机械开发. 2019年10月.

.2019年10月：159:103565。

doi:10.1016/j.mod.2019.103565。 Epub 2019年7月20日。

作者

劳伦·拉格尔¹, 罗伯特·D·布鲁诺², 科琳娜·布朗格¹, 吉尔伯特·H·史密斯³

附属公司

¹美国马里兰州贝塞斯达国家癌症研究所乳腺干细胞科，BRL，CCR，邮编：20892。
²美国弗吉尼亚州诺福克市Old Dominion大学健康科学学院医学诊断和转化科学学院，邮编23529。
³美国马里兰州贝塞斯达国家癌症研究所乳腺干细胞科，BRL，CCR，邮编：20892。电子地址：smithg@mail.nih.gov。

PMID： 31336167
预防性维修识别码： PMC6759405型
内政部： 2016年10月10日/j.mod.2019.103565

摘要

长链保留被许多人用来证明凯恩斯的不朽链假说并鉴定潜在的干细胞。在这里，我们描述了使用5-乙炔-2’-脱氧尿苷（EdU）识别和了解小鼠乳腺导管系统形成过程中长标记乳腺上皮细胞的分布的两种策略。首先，在第4周到第10周期间，每周连续两天给予EdU，并在13周龄时分析标签保留情况。或者，从28日龄开始至42日龄结束连续14天给予EdU。分析在>91天大（13周）时进行。第二种标记方法检测到更多的LREC，并在随后发育的导管中分布。这一发现表明，保留标记的早期标记细胞分布在EdU治疗结束后（即42->91天）形成的腺体部分。这些观察结果对于之前证明的尽管年龄或生殖史，但在整个小鼠乳腺中保持再生能力具有重要意义。这些结果表明，LREC可能代表负责乳腺稳态的长寿祖细胞。此外，这些细胞可能作为多能干细胞，能够在随机片段移植到去上皮的乳腺脂肪垫后再生乳腺。

关键词：发展；EDU标记；长线保持；乳房；干细胞。

Elsevier B.V.出版。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益声明：作者没有兴趣声明。

数字

**图1。小鼠给药方法1。**
15只Balb/c小鼠连续两天（周一和周二）腹腔注射0.1mg EdU。4次给药后（第2周），对两只小鼠进行安乐死以进行分析。其余的小鼠接受EdU共8周。第8周对三只小鼠实施安乐死以进行分析。其余的小鼠在2周内未接受任何治疗（追逐），然后连续两次（周一和周二晚上）服用溴脱氧尿苷（BrdU），并在第二天早上（周三）实施安乐死。

**图2。12周内乳腺发育。**
在20到22天大的时候，小鼠有内源性上皮细胞，从乳头开始生长（左侧面板），剩下的乳腺脂肪垫是空的，只剩下淋巴结（LN）。出生后42至45天，上皮导管树已经穿过淋巴结，进入乳头远端的腺体部分（中间面板）。乳房脂肪垫的远端在大约84天大的时候被填满（右图）。

**图3。EdU在导管伸长过程中并入，并在追踪后保留在上皮细胞的一个子群中。**
A） EdU（绿色）合并2周、8周、10周和11周的代表性图像。第2周，在芽体细胞和芽帽细胞中均可见EdU阳性细胞。在第8周最后一次EdU给药后，上皮导管和导管周细胞中均可见EdU细胞。经过2周追踪（第10周）或3周追踪（11周），EdU+LREC仍存在于管腔上皮细胞和导管周细胞的一个子群中。B）用抗SMA和EdU染色的10周样品的代表性切片图像显示EdU阳性LREC位于管腔层内。C）第2、8、10和11周时总MEC、管腔MEC和肌上皮细胞的定量。EdU阳性LRC几乎只存在于追踪后的管腔层中。

**图4。一小部分EdU阳性LRC包含BrdU和/或express ki67。**
BrdU治疗10周后腺体的典型图像，有或没有雌激素（E）和孕酮（P）治疗。所有病例均发现EdU（绿色）和BrdU（红色）或ki67（红色）共阳性细胞，但E+P治疗增加了两者的百分比。箭头表示双标记单元格。右侧面板显示了对Ki67或BrdU阳性的EdU阳性细胞百分比的量化***p<0.001*p<0.05

**图5。与一般MEC人群相比，处于细胞周期G2期的LREC比例更高。**
如文中所述，在第10周（2周追踪）从小鼠中提取分离的MEC。通过7-AAD测量样本的EdU荧光和细胞周期分布。左上面板显示用于设置EdU+门的阴性对照样本。右上角显示了测试样本，其门对EdU+和EdU−MEC具有选择性。底部面板显示EdU+分数（左）和EdU−分数（右）的细胞周期分布。

**图6。的比较体外和*在体内*长标记细胞向腺体远端转移的分析。**
顶部面板显示通过标记Athymic裸鼠形成的类器官中的EdU+菌落。经过15周的追逐期后，两只小鼠各产生100个菌落（平均每个菌落100个细胞），显示EdU阳性菌落的平均百分比（计数的100个菌群中）。底部面板显示了对标记Balb/C小鼠乳腺切片的分析。近端早期和远端早期包括所有EdU+细胞，而不是LREC。近端晚期和远端晚期仅显示在追踪期间保留标记（LREC）的EdU+细胞***p<0.001

**图7。SMA（红色）用于指示导管系统内远端EdU+细胞的位置。**
追逐期之前，所有EdU+细胞都留在导管内。然而，追逐期过后，一些EdU+（sic LREC）变成导管周。此外，如前所示，在腹股沟腺追逐后，乳头远端的EdU阳性细胞（绿色）数量增加。EdU+单元在同位图像中用白色箭头表示。这些部分用DAPI（蓝色）复染。

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1. 凯恩斯J，突变选择和癌症的自然史。《自然》，1975年。255（5505）：第197-200页。-公共医学
1. Smith GH，小鼠乳腺中的标签染色上皮细胞不对称分裂并保留其模板DNA链。发展，2005年。132（4）：第681-7页。-公共医学
1. Smith GH和Boulanger CA，《乳腺干细胞储备：衰老上皮细胞群的新见解》。机械老化发展，2002年。123（11）：第1505-19页。-公共医学
1. Daniel CW等人，《致乳激素对连续移植小鼠乳腺的影响》。Exp Gerontal，1971年。6（1）：第95-101页。-公共医学
1. Raafat A等人，《年龄和胎次对FVB/N-RC小鼠乳腺病变和祖细胞的影响》，载于《公共科学图书馆·综合》。2012年：美国。第43624页。-项目管理咨询公司-公共医学

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[1] 凯恩斯J，突变选择和癌症的自然史。《自然》，1975年。255（5505）：第197-200页。-公共医学

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[9] Raafat A等人，《年龄和胎次对FVB/N-RC小鼠乳腺病变和祖细胞的影响》，载于《公共科学图书馆·综合》。2012年：美国。第43624页。-项目管理咨询公司-公共医学

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