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.2019年7月18日；14（7）：e0219780。
doi:10.1371/journal.pone.0219780。 2019年eCollection。

重组兔β神经生长因子的产生及其对兔精子和排卵的生物学效应

安娜·桑切斯·罗德里格斯 1, 帕洛马·阿巴德 2, 玛丽亚·阿里亚斯·阿尔瓦雷斯 三, Pilar G Rebollar公司 4, 何塞·M·包蒂斯塔 2, 佩德罗·洛伦佐 1, 罗莎·加西亚-加西亚 1
附属公司

重组兔β神经生长因子的产生及其对兔精子和排卵的生物学效应

安娜·桑切斯·罗德里格斯等。 公共科学图书馆一号. .

勘误表in

  • 更正：重组兔β神经生长因子的产生及其对兔精子和排卵的生物学效应。
    Sanchez-Rodriguez A、Abad P、Arias-Alvarez M、Millán P、Rebollar PG、Bautista JM、Lorenzo PL、GarcíA-Garcí）RM。 Sanchez-Rodriguez A等人。 《公共科学图书馆·综合》。2019年9月23日；14（9）：e0223091。doi:10.1371/journal.pone.0223091。2019年eCollection。 《公共科学图书馆·综合》。2019 采购管理信息：31545852 免费PMC文章。

摘要

在一些诱导排卵的物种中，β-神经生长因子（β-NGF）在排卵中发挥着重要作用，尽管兔子的数据仍不确定。在本研究中，我们首先从兔组织中合成了功能性重组β-NGF（rrβ-NGF），以解决以下目标：1）比较兔β-NGF-氨基酸序列与其他诱导或自发排卵物种的氨基酸序列；2） 评估rrβ-NGF对家兔精子活力和运动能力的影响，以及3）检测在家兔精液剂量中添加rrβ-NGF的体内促排卵作用。用cDNA末端快速扩增法对兔前列腺组织中的NGF基因进行测序，并在GenBank（KX528686）中进行注释。在CHO细胞中产生重组rβ-NGF并通过亲和层析纯化。一旦通过Western blotting and mass spectrometry（MALDI-TOF）证实重组蛋白的氨基酸序列与β-NGF对应，其功能性在PC12细胞中通过8天的成功剂量反应研究得到验证。前列腺兔NGF的氨基酸序列与其他物种的差异主要在于其受体结合位点。与兔子相比，在所有被检测的自发排卵物种中，与高亲和力受体相互作用的丙氨酸和脯氨酸残基被丝氨酸取代。在兔子体内，天冬酰胺和蛋氨酸在低亲和力受体结合位点被赖氨酸取代。在时间和剂量反应实验中，体外向射精液中添加rrβ-NGF不会影响精子活力，而添加1μg/mL神经肽可以提高精子活力参数。在通过阴道途径给精的剂量中加入相同浓度的rrβ-NGF，可诱导排卵，LH峰值延迟，导致血浆孕酮增加、妊娠和分娩。我们的研究结果表明，rrβ-NGF可能是兔生物技术和生殖辅助技术的有用选择，但还需要进一步研究。

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数字

图1
图1。PC12细胞中不同浓度rrβ-NGF（0、5、10、25、50和100 ng/mL）的剂量反应研究。
（A） PC12细胞在不同rrβ-NGF浓度下培养48小时后的存活率。不同的字母表示测试剂量之间的显著差异（p<0.05）。（B） 在不同rrβ-NGF浓度的培养物中，随着时间的推移（直到第8天）分化的PC12细胞的百分比。不同的字母表示同一天检测到的受试剂量之间存在显著差异（p<0.05）。（C） 在具有不同rrβ-NGF浓度的培养物中，随着时间的推移（直到第8天），PC12细胞带有轴突的百分比。不同的字母表示同一天检测到的受试剂量之间存在显著差异（p<0.05）。（D） 不同rrβ-NGF浓度培养第8天PC12细胞的神经突起长度（μm）。不同的字母表示测试剂量之间的显著差异（p<0.05）。NS：无显著差异。所有数据均表示为平均值±SEM。
图2
图2。在第8天用25 ng/mL rrβ-NGF处理的PC12细胞中β-III微管蛋白的免疫检测在体外文化。
绿色信号表示与β-III微管蛋白（胞体和神经突）结合，蓝色信号表示细胞核被Hoescht 33342染色。右侧面板为阴性对照（缺乏一级抗体）。
图3
图3。体外用k-252a培养的PC12细胞中TrkA受体的抑制。
（A） 未经处理的细胞（阴性对照）。（B） 用25 ng/mL rrβ-NGF处理的细胞（阳性对照）。（C） 用K-252a+25 ng/mL rrβ-NGF处理的细胞。箭头：神经突。比例尺：100μm。
图4
图4。诱导和自发排卵物种中β-NGF的氨基酸序列比对。
IND（诱导排卵种）。NGF_KX528686：美洲大羚羊，KX528686；Llama_OIF_SP：来自SP的排卵诱导因子喇嘛喇嘛，4EFV_B；单峰骆驼，XP_010979007.1；羊驼，XP_015102944.1；双峰驼，XP_010967135.1。SPONT（自发性排卵物种）。褐家鼠，NP_001263984.1；小家鼠，NP_001106168.1；Bos金牛座，NP_001092832.1；智人，NP_002497.2。信号肽显示在方框中。潜在残留物（N69，个114和N166)显示Pro-NGF的糖基化位点。β-NGF的β链呈浅灰色。参与二硫键的半胱氨酸以深灰色显示（Cys136，塞浦路斯179，塞浦路斯189，塞浦路斯201，塞浦路斯229，塞浦路斯231). 参与TrkA和p75结合的氨基酸以粗体（Trp142和Ile152). TrkA结合位点用黑框表示（N末端，Phe175，苯丙氨酸207). P75结合位点以白色显示，以黑色突出显示。在兔β链中观察到的差异用白色表示。
图5
图5
在添加不同剂量的rrβ-NGF（0，20，100 ng/mL，1μg/mL）新鲜兔精液样本.rrβ-NGF的浓度（0、20、100 ng/mL、1μg/mL）用分级蓝色表示。除VAP外，各时间点不同浓度之间的统计差异用线条表示（p<0.05），VAP的线条表示时间差异。NS：无显著差异。数据表示为平均值±SEM。
图6
图6。经静脉注射GnRH和人工授精（阳性对照）、用1μg/mL rrβ-NGF授精（NGF组）或用空导管授精（阴性对照）的排卵期和非排卵期女性的LH和孕酮浓度。
（A） 排卵期女性LH浓度（阳性对照组和NGF组）。（B） 非排卵女性（阴性对照组和NGF组）的LH浓度。NS：无显著差异。同一时间点的显著差异用不同的字母表示（p<0.05）。数据表示为排卵女性（阳性对照组和NGF组）的平均±SEM.（C）孕酮浓度。（D） 未排卵雌性（NGF和阴性对照组）的孕酮浓度。各组之间的显著差异以字母表示，天数之间的差异以线条表示（p<0.05）。
图7
图7。在人工授精后4小时内，评估用1μg/mL rrβ-NGF治疗的排卵期和非排卵期雌性大鼠的LH浓度。
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    1. Adams GP、Ratto MH、Huanca W、Singh J.羊驼和骆驼精浆中的排卵诱导因子。生物再现。2005;73: 452–457. 10.1095/生物制品.105.040097-内政部-公共医学
    1. Silva M、Nino A、Guerra M、Letelier C、Valderrama XP、Adams GP等。兔子精浆中是否存在促排卵因子（OIF）？动画再现科学。2011;127:213-221。2016年10月10日/j.anireprosci.2011.08.004-内政部-公共医学
    1. 科尔肖-杨CM、德鲁亚特X、沃恩J、麦克斯韦WM。β-神经生长因子是羊驼精浆的主要成分，可诱导雌性羊驼排卵。Reprod Fertil Dev.2012；24: 1093–1097. 10.1071/RD12039-内政部-公共医学
    1. Berland MA、Ulloa-Leal C、Barria M、Wright H、Dissen GA、Silva ME等。精浆在缺乏交配刺激的情况下诱导Llamas排卵：神经生长因子作为排卵诱导因子的作用。内分泌2016；157: 3224–3232. 2016-1310年10月10日-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

赠款和资金

这项工作得到了西班牙经济和竞争力部的支持[授予AGL2015-65572-C2]、ASR的UCM-Santander产前合同、教育委员会的青年就业合同、马德里社区的青少年就业合同和PA的欧洲社会基金。资助者在研究设计中没有任何作用，数据收集和分析、决定出版或准备手稿。