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.2019年7月2日11时114-122分。
doi:10.1016/j.reth.2019.06.005。 eCollection 2019年12月。

脂肪间充质干细胞分泌体抑制人角膜上皮上皮细胞间充质转化

顺柴田 1 2, 柳海·哈亚希（Ryuhei Hayashi） 1 3, 托鲁·奥库波 1 2, 久藤裕二 1 2, Koichi Baba公司 3, 本田洋一 1 2, 西田幸二 3
附属公司

脂肪间充质干细胞分泌体抑制人角膜上皮上皮细胞间充质转化

顺柴田等。 再生热. .

摘要

简介：上皮-间充质转化（EMT）诱导极化上皮细胞失去细胞间相互作用，并将这些细胞转化为侵袭性间充质样细胞。它还参与组织纤维化，包括发生在一些眼表疾病（如翼状胬肉）和角膜缘干细胞缺乏的上皮下角膜纤维化。在这里，我们研究了人类脂肪来源间充质干细胞（AdMSCs）分泌体对人类角膜上皮细胞（CECs）EMT的影响。

方法：转化生长因子-β（TGF-β）在从人角膜缘分离的原代人CECs中诱导EMT。通过添加AdMSC条件培养基的共培养实验，分析AdMSC分泌体对这些细胞或分层CEC片中EMT的影响。分析EMT相关基因和蛋白在CECs中的表达。扫描电镜观察CECs的超微结构。此外，通过测量跨上皮电阻（TER）分析了CEC板的屏障功能。

结果：研究发现，AdMSC分泌体可抑制EMT相关基因的表达，并减轻TGF-β诱导的角膜上皮功能障碍，包括细胞间相互作用的分离和构建的CEC片中TER的降低。

结论：AdMSCs分泌体可抑制TGF-β诱导的CECs EMT。这些发现表明，这可能是治疗EMT相关眼表疾病的有用来源。

关键词：CEC（s），角膜上皮细胞；EMT；EMT，上皮-间质转化；人MSCs；人角膜上皮细胞；MSC-CM，MSC-条件培养基；MSC-条件培养基（CM）；间充质干细胞；转化生长因子-β；TGF-β，转化生长因子-β。

PubMed免责声明

利益冲突声明

S.S.、T.O.、Y.K.和Y.H.是ROHTO Pharmaceutical Co.，Ltd.的员工。R.H.隶属于ROHTO制药有限公司的捐赠主席。

数字

图1
图1
与间充质干细胞（MSCs）共培养可减弱TGF-β1诱导的角膜上皮细胞（CECs）上皮-间充质转化（EMT）。（a） 经或不经TGF-β1治疗的CECs的相位对比图。比例尺，100μm。（b） 实验方法示意图。（c） 与AdMSC（10000或20000个细胞/插入物）共培养或不共培养的CEC中EMT相关标记物的基因表达分析。数据表示为平均值±SEM；n个=4个细胞样本*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。（d） CECs中VIM（红色）和CLDN1（绿色）的免疫染色。细胞核，蓝色；比例尺，100μm。
图2
图2
来自脂肪衍生间充质干细胞（AdMSC-CM）的条件培养基可减弱TGF-β1诱导的角膜上皮细胞（CECs）上皮-间充质转化（EMT）。（a） 实验方法示意图。（b） CECs中EMT相关标志物的基因表达分析。数据表示为平均值±SEM；n个=6个细胞样本*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。（c） CECs中VIM（红色）和CLDN1（绿色）的免疫染色。细胞核，蓝色；比例尺，100μm（上面板）和50μm（下面板）。
图3
图3
来自脂肪衍生间充质干细胞（AdMSC-CM）的条件培养基可减弱TGF-β1诱导的角膜上皮细胞（CEC）片中的上皮-间充质转化（EMT）。（a） 实验方法示意图。（b） 免疫染色法检测顶部和底部CEC片中的VIM（红色）和CLDN1（绿色）。细胞核，蓝色。比例尺，50μm。（c） 构建成三维图像的CEC片材整张中VIM（红色）和CLDN1（绿色）的免疫染色。细胞核，蓝色。比例尺，20μm。
图4
图4
脂肪衍生间充质干细胞（AdMSC）分泌组可消除TGF-β诱导的细胞-细胞相互作用分离，并降低角膜上皮细胞（CEC）片的跨上皮电阻（TER）。（a） 扫描电子显微镜观察CEC板材表面的超微结构。箭头表示细胞间相互作用受到干扰的区域。比例尺，50μm（上部面板）和5μm（下部放大图像）。（b） 添加hAdMSC-CM后第1天CEC表中TER的定量。结果以平均值±SEM表示，n个=4个细胞样本**p<0.01。
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