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.2019年7月4日；11（7）:1515。
doi:10.3390/nu11071515。

Picetannol通过调节PI3K/Akt信号通路保护人视网膜色素上皮细胞抵抗过氧化氢诱导的氧化应激和凋亡

郝一鸣 1 2, 刘杰（音译） 三, 王子源 1, 梁丽·露西·余 4, 王静（音译） 5 6
附属机构

Picetannol通过调节PI3K/Akt信号通路保护人视网膜色素上皮细胞抵抗过氧化氢诱导的氧化应激和凋亡

郝一鸣等。 营养物. .

摘要

本研究探讨了苦皮藤醇对过氧化氢（H）的保护作用及其分子机制2O（运行）2)-诱导视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）损伤。Piceatannol治疗显著抑制H2O（运行）2-诱导RPE细胞死亡和活性氧（ROS）生成分别为64.4%和75.0%。流式细胞术结果显示H2O（运行）2-通过补充piceatannol，以及Bax/Bcl-2、Cleave-Caspase-3和Cleave-PARP的相对蛋白表达降低，可以改善诱导的ARPE-19细胞凋亡。此外，皮卡他诺治疗可诱导NF-E2-related factor 2（Nrf2）信号传导激活，抗氧化基因、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基（GCLc）、SOD和HO-1的转录增加证明了这一点。通过靶向siRNA敲低Nrf2可减轻piceatannol介导的HO-1转录，并显著消除piceatannel介导的细胞保护作用。LY294002（PI3K抑制剂）显著阻断了piceatannol介导的Nrf2核转位、HO-1表达和细胞保护活性的增加，表明PI3K/Akt通路参与了picetanol的细胞保护作用。由此得出的结果表明，吡西坦诺在降低年龄相关性黄斑变性风险方面具有潜力。

关键词：ARPE-19小区；PI3K/Akt信号通路；细胞凋亡；氧化应激；皮塞塔诺。

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利益冲突声明

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数字

图1
图1
H诱导的苦皮藤醇细胞保护作用2O（运行）2视网膜色素上皮（ARPE-19）细胞。将ARPE-19细胞接种在96-wel培养板中24小时，然后用皮卡他诺处理24小时，并用或不用h诱导2O（运行）2再持续24小时(A类)苦皮藤醇的化学结构。(B类)皮卡他诺对ARPE-19细胞的细胞毒性。(C类)不同浓度过氧化氢诱导ARPE-19细胞存活。(D类)piceatannol对ARPE-19细胞的细胞保护作用。+用H表示2O（运行）2，-表示没有H2O（运行）2.存在不同的字母第页各组经方差分析计算<0.05。
图2
图2
Picetannol抑制H2O（运行）2-诱导ARPE-19细胞凋亡。将ARPE-19细胞接种在6孔板中24小时，然后用皮卡他诺处理24小时，并用h诱导2O（运行）2持续4小时(A类)通过PI和Annexin V双重染色分析细胞凋亡(B类)Western blotting检测凋亡相关蛋白（Cleave Caspase 3，Cleave PARP，Bax，Bcl-2）用H表示2O（运行）2，-表示没有H2O（运行）2.存在不同的字母第页各组经方差分析计算<0.05。
图3
图3
皮卡他诺增加ARPE-19细胞中抗氧化酶的表达。(A类)Western blotting检测过氧化氢酶、GCLc、SOD、HO-1的相对蛋白表达水平。将ARPE-19细胞与piceatannol孵育24 h，并用h诱导2O（运行）2持续4小时(B类)piceatannol对抗H的活性氧（ROS）生成2O（运行）2ARPE-19单元上。+用H表示2O（运行）2，-表示没有H2O（运行）2.存在不同的字母第页各组经方差分析计算<0.05。
图4
图4
Piceatannol保护H诱导的ARPE-19细胞损伤2O（运行）2通过Nrf2/HO-1信号通路。将ARPE-19细胞与皮卡他诺培养24小时，然后用或不用300μM h处理2O（运行）2持续0.5小时(A类)通过蛋白质印迹测定Nrf2（总蛋白和细胞核）的相对蛋白表达水平。(B类)通过Western blotting检测Nrf2和Keap1的相对蛋白表达水平。(C类)通过Western blotting检测HO-1的相对蛋白表达水平。用皮卡他诺处理ARPE-19细胞24小时，然后用300μM h2O（运行）2持续4小时(D类)通过Western blotting分析Nrf2和HO-1的蛋白表达水平。用siRNA转染ARPE-19细胞12 h，然后与皮卡他诺孵育12 h，并用h2O（运行）2持续4小时(E类)用MTT法分析了苦皮藤醇的细胞保护作用。用siRNA转染ARPE-19细胞12小时，然后用或不用皮卡他诺培养12小时，并用h2O（运行）212小时+用h表示2O（运行）2或piceatannol，-表示没有H2O（运行）2或piceatannol。有不同的字母或*第页<0.05，通过方差分析或学生的t吨对每组进行测试。
图5
图5
H诱导ARPE-19细胞PI3K/Akt信号通路激活2O（运行）2. (A类)通过Western blotting分析ARPE-19细胞中p-Akt（ser 473）和Akt总蛋白的蛋白表达。将APRE-19细胞预处理24小时，然后用h2O（运行）2处理0.5h(B类)通过Western blotting分析ARPE-19细胞中p-Akt（ser 473）和Akt总蛋白的蛋白表达。ARPE-19细胞在含有或不含皮卡他诺的情况下培养24小时，然后由h诱导2O（运行）2分别持续0.5和4小时。(C类)Western blotting分析p-Akt（ser 473）、总Akt、Bax和Bcl-2的蛋白表达。将ARPE-19细胞与皮卡他诺混合培养24小时，然后用h诱导2O（运行）2持续4小时+用h表示2O（运行）2或piceatannol，-表示没有H2O（运行）2或piceatannol。存在不同的字母第页各组经方差分析计算<0.05。
图6
图6
PI3K/Akt信号通路参与RPE细胞对氧化应激和细胞凋亡的细胞保护。(A类)将ARPE-19细胞与皮卡他诺孵育24 h，然后与LY294002（25μM）孵育4 h，并用h2O（运行）20.5 h后，通过Western blotting分析p-Akt（ser 473）、总Akt蛋白和细胞核Nrf2的蛋白表达水平。(B类)Western blotting分析HO-1蛋白表达水平。将ARPE-19细胞与苦味素孵育24小时，然后用或不用LY294002（25μM）预处理4小时，然后用h诱导2O（运行）2持续4小时(C类)用MTT法分析了苦皮藤醇的细胞保护作用。将ARPE-19细胞与皮卡坦醇孵育24 h，然后用或不用LY294002（25μM）预处理4 h，并用h2O（运行）224小时+表示接受治疗，-表示未接受治疗。有不同的字母或*第页<0.05，通过方差分析或学生的t吨对每组进行测试。
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