跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2019年8月；20(2):1797-1807.
doi:10.3892/mmr.2019.10408。 Epub 2019年6月20日。

microRNA‑21过表达通过靶向MKK3抑制黑色素瘤细胞的生长和转移

蒙州 1, 余晓倩 2, 镇海井 三, 魏武 4, 成龙路 5
附属公司

microRNA‑21过表达通过靶向MKK3抑制黑色素瘤细胞的生长和转移

蒙州等。 分子医学代表. 2019年8月.

摘要

黑色素瘤是一种侵袭性皮肤癌，预后不良，在世界范围内普遍存在。研究表明，microRNA（miR）‑21和丝裂原活化蛋白激酶激酶3（MKK3）均参与多种肿瘤的发生发展；然而，它们在黑色素瘤进展中的详细作用尚不清楚。采用逆转录定量PCR（RT‑qPCR）和western blot分析检测黑色素瘤患者和黑色素瘤细胞系临床标本中miR‑21和MKK3的表达水平。进行了双荧光素酶报告分析，以验证miR‑21和MKK3之间的靶相互作用。转染miR‑21模拟物和抑制剂后，分别使用RT‑qPCR和western blot分析检测MKK3的mRNA和蛋白表达。随后，进行细胞计数试剂盒‑8、集落形成分析和流式细胞术，以评估miR‑21和MKK3对黑色素瘤细胞生长的影响。进行细胞迁移和侵袭实验，以评估miR-21和MKK3对黑色素瘤细胞转移的影响。研究表明，黑色素瘤患者和黑色素瘤细胞系中MKK3上调，miR‑21下调。MKK3被证明是miR‑21的直接靶点。此外，研究表明，上调miR‑21表达和下调MKK3表达可抑制细胞增殖和集落形成，促进凋亡，延缓细胞周期，并抑制细胞迁移和侵袭。本研究结果表明，miR‑21通过负调控MKK3而抑制黑色素瘤细胞的生长和转移。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
黑色素瘤组织中MKK3和miR-21的表达水平失调。（A） RT-qPCR分析15对黑色素瘤组织和邻近正常组织中MKK3 mRNA水平。（B） 15对黑色素瘤组织和邻近正常组织中MKK3蛋白水平的Western blot分析。测定条带强度以量化蛋白质表达水平。黑色素瘤组织中MKK3和miR-21表达水平失调。（C） 15对黑色素瘤组织和邻近正常组织中miR-21水平的RT-qPCR分析。结果表示为每个组织样品三个重复的平均值±标准偏差。MKK3，丝裂原活化蛋白激酶3；miR-21，microRNA-21；RT-qPCR、逆转录定量PCR；P、 患者。
图1。
图1。
黑色素瘤组织中MKK3和miR-21表达水平失调。（A） RT-qPCR分析15对黑色素瘤组织和邻近正常组织中MKK3 mRNA水平。（B） 15对黑色素瘤组织和邻近正常组织中MKK3蛋白水平的蛋白质印迹分析。测定条带强度以量化蛋白质表达水平。黑色素瘤组织中MKK3和miR-21表达水平失调。（C） 15对黑色素瘤组织和邻近正常组织中miR-21水平的RT-qPCR分析。结果表示为每个组织样品三个重复的平均值±标准偏差。MKK3，丝裂原活化蛋白激酶3；miR-21，microRNA-21；RT-qPCR、逆转录定量PCR；P、 患者。
图1。
图1。
黑色素瘤组织中MKK3和miR-21表达水平失调。（A） RT-qPCR分析15对黑色素瘤组织和邻近正常组织中MKK3 mRNA水平。（B） 15对黑色素瘤组织和邻近正常组织中MKK3蛋白水平的Western blot分析。测定条带强度以量化蛋白质表达水平。黑色素瘤组织中MKK3和miR-21的表达水平失调。（C） 15对黑色素瘤组织和邻近正常组织中miR-21水平的RT-qPCR分析。结果显示为每个组织样品三个重复的平均值±标准偏差。MKK3，丝裂原活化蛋白激酶3；miR-21，microRNA-21；RT-qPCR、逆转录定量PCR；P、 患者。
图2。
图2。
黑色素瘤和皮肤细胞系中MKK3和miR-21水平的定量。（A） 分别通过RT-qPCR和western blot分析测定MKK3的mRNA和（B）蛋白表达水平。（C） RT-qPCR结果显示miR-21的表达水平。结果显示为至少三个独立实验的平均值±标准偏差，一式三份*与A2058细胞相比，P<0.05。MKK3，丝裂原活化蛋白激酶3；miR-21，microRNA-21；RT-qPCR，逆转录定量PCR。
图3。
图3。
miR-21直接靶向MKK3。（A） 人类MKK3基因3′-UTR和MKK33突变的3′-UTR的相互作用位点以红色突出显示。在293T细胞中使用双核糖核酸酶分析测试miR-21和MKK 3之间的靶相互作用*P<0.05。（B） 转染miR-21模拟物和抑制剂后，采用逆转录定量PCR和western blot分析检测A2058细胞中MKK3和miR-21的表达水平*与NC相比P<0.05。（C）15对肿瘤组织中MKK3表达和miR-21表达的线性回归。结果表示为至少三个独立实验的平均值±标准偏差，一式三份。MKK3，丝裂原活化蛋白激酶3；miR-21，microRNA-21；UTR，非翻译区；NC，阴性对照；mut，突变体。
图4。
图4。
miR-21的恢复减少，MKK3的过度表达诱导增殖和肿瘤发生。（A） 转染A2058细胞中MKK3的表达*与NC相比P<0.05。（B）使用CCK-8分析A2058细胞增殖*与NC相比P<0.05。（C）集落形成分析的代表性图像。MKK3，丝裂原活化蛋白激酶3；miR-21，microRNA-21；NC，阴性对照；CCK-8，细胞计数试剂盒-8；OD，光密度；小干扰RNA。
图5。
图5。
miR-21上调和MKK3下调增强A2058细胞凋亡并延迟细胞周期。（A） 用流式细胞仪分析细胞凋亡率。（B） 用流式细胞术分析细胞周期分布。结果显示为至少三个独立实验的平均值±标准偏差，一式三份*与NC.MKK3、丝裂原活化蛋白激酶3相比，P<0.05；miR-21，microRNA-21；PI，碘化丙啶；小干扰RNA；NC，阴性对照。
图5。
图5。
miR-21上调和MKK3下调增强A2058细胞凋亡并延迟细胞周期。（A） 用流式细胞仪分析细胞凋亡率。（B） 用流式细胞术分析细胞周期分布。结果显示为至少三个独立实验的平均值±标准偏差，一式三份*与NC.MKK3、丝裂原活化蛋白激酶3相比，P<0.05；miR-21，microRNA-21；PI，碘化丙啶；小干扰RNA；NC，阴性对照。
图6。
图6。
miR-21抑制，MKK3促进黑色素瘤细胞迁移和侵袭。（A） 使用Transwell分析法分析A2058细胞的迁移能力。（B） 使用Matrigel分析比较细胞的侵袭能力。比例尺，20µm（放大倍数，×200）**P<0.01。结果显示为至少三个独立实验的平均值±标准偏差，一式三份。MKK3，丝裂原活化蛋白激酶3；miR-21，microRNA-21；NC，阴性对照；小干扰RNA。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. 欧文斯·B·黑色素瘤。自然。2014;515（补充）：S109。doi:10.1038/515S109a。-内政部-公共医学
    1. Mohammadpour A、Derakhshan M、Darabi H、Hedayat P、Momeni M.黑色素瘤：我们在哪里，我们去哪里。细胞生理学杂志。2019;234:3307–3320. doi:10.1002/jcp.27286。-内政部-公共医学
    1. Little EG、Eide MJ。黑素瘤发病率现状更新。皮肤临床。2012;30:355–361。doi:10.1016/j.det.2012.04.001。-内政部-公共医学
    1. Ko JS公司。黑素瘤的免疫学。《临床实验室医学》2017；37:449–471. doi:10.1016/j.cll.2017.06.001。-内政部-公共医学
    1. Hayward NK、Wilmott JS、Waddell N、Johansson PA、Field MA、Nones K、Patch AM、Kakavand H、Alexandrov LB、Burke H等。主要黑色素瘤亚型的全基因组景观。自然。2017;545:175–180. doi:10.1038/nature22071。-内政部-公共医学