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.2019月,20(2):1575-1582.
DOI:1038 92/MMR.2019.1039。 EPUB 2019 6月19日。

SIRT6通过ERK1/2信号通路调控肝癌细胞的增殖和凋亡

附属
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SIRT6通过ERK1/2信号通路调控肝癌细胞的增殖和凋亡

张桂生等。 国防部代表. .
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摘要

肝细胞癌(HCC)是最常见的肝癌类型,具有较高的死亡率。Sirtuin(SIRT)6是sirtuin家族的成员,这可能是治疗肿瘤的有用靶点。本研究旨在探讨SIRT6在肝癌细胞系中的表达,探讨SIRT6在肝癌细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。用合成过表达和小干扰RNA(siRNA)质粒转染HuH 7细胞,进行siRT6的过度表达和沉默。用细胞计数试剂盒8测定细胞增殖。流式细胞仪检测细胞凋亡率。使用平板克隆形成试验评估克隆效率。通过逆转录-定量PCR和Western blot分析分别检测mRNA和蛋白的表达。SIPRT6在HEP3B、HuH 7、MHCC-97、MHCC-97、MHCC、LM6、MHCCC、LM3、YY 8103和SK-HEP 1细胞中均表达过多,与MIHA和HL 7702正常肝细胞系比较。SIRT6的过度表达增加了HuH 7细胞的增殖,上调了Bcl 2的表达和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)的磷酸化,并降低了HuH 7细胞中裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和Bcl 2相关X蛋白(Bax)的表达。siRNA介导的siRT6沉默降低了HuH 7细胞的增殖和凋亡,下调了Bcl 2和磷酸化ERK的表达,促进了Caspase 3和Bax的表达。用ERK1/2抑制剂U0126抑制HuH 7细胞增殖。结果表明,SIRT6通过调节ERK1/2途径影响HCC细胞增殖和凋亡,改变内源性凋亡途径的激活。SIRT6可能是肝癌治疗的潜在靶点,但其作用有待进一步研究。

数据

图1。
图1。
SIRT6在肝癌细胞中的表达通过逆转录-定量PCR检测SIRT6在不同肝癌细胞和正常细胞系中的表达。数据以平均±标准差表示。*p<0.01 vs HL-7702。SIRT6,sirtuin 6;肝细胞癌,肝癌。
图2。
图2。
过度表达SIRT6后,HUH-7细胞的增殖、凋亡和克隆效率(a)通过逆转录-定量PCR分析确定SIRT6的mRNA表达。(b)通过Western印迹法测定SIRT6的蛋白水平。(c)用细胞计数KIT-8法测定转染后12, 24和48小时的细胞增殖。(d)通过流式细胞术测定转染细胞的凋亡。(e)克隆形成试验和克隆效率相对于对照。数据以平均±标准差表示。*P<0.05,*P<0.01与对照组比较。SIRT6,SIRTUIN 6;NC,阴性对照。
图3。
图3。
siHRT6敲除后HuH-7细胞增殖、凋亡和克隆效率的研究(a)通过逆转录-定量PCR分析确定SIRT6的mRNA表达。(b)通过Western印迹法测定SIRT6的蛋白水平。(c)用细胞计数KIT-8法测定转染后12, 24和48小时的细胞增殖。(d)通过流式细胞术测定转染细胞的凋亡。(e)克隆形成试验和克隆效率相对于对照。数据以平均±标准差表示。*P<0.05,*P<0.01与对照组比较。SIRT6,sirtuin 6;NC,阴性对照;SIZRT6,siRT6小干扰RNA。
图4。
图4。
Bcl-2、Bax、Caspase-3、ERK1、2和pRERK1/2在肝癌细胞SIRT6过度表达或沉默后的表达(a)siRT6过度表达后HUH-7细胞Bcl-2和Bax mRNA表达。(b)SIRT6沉默后HUH-7细胞Bcl-2和Bax mRNA的表达。(c)SIRT6过度表达后HUH-7细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白水平的变化。(d)SIRT6沉默后HUH-7细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白水平的变化。(e)量化(c)。(f)量化(d)。(g)SIRT6过度表达后,HUH-7细胞中ERK1/2和P- ERK1/2蛋白水平的变化。(h)SIRT6沉默后HUH-7细胞中ERK1/2和P- ERK1/2蛋白水平的变化。(i)量化(g)。(j)量化(h)。数据以平均±标准差表示。*P<0.05,*P<0.01。SIRT6,sirtuin 6;NC,阴性对照;SISIRT6,siRT6小干扰RNA;P,磷酸化。
图5。
图5。
抑制ERK信号后SIRT6过度表达肝癌细胞的增殖。用细胞计数KIT-8测定用siRT6过表达质粒转染和/或用ERK抑制剂U0126处理的HUH-7细胞的增殖。数据以平均±标准差表示。*P<0.05 vs对照;^P<0.05 vs SIRT6+U0126。SIRT6,SIRTUIN 6。

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