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.2019年6月26日；10(7):505.
doi:10.1038/s41419-019-1742-7。

长非编码RNA Neat1通过招募Ezh2调节肌生成

王珊珊 1 2, 郝佐 1 2, 金建军 1 2, 魏吕 1 2, 徐再彦 1 三, 范永辉 1 2, 张佳丽 1 2, 博佐 4 5 6
附属公司

长非编码RNA Neat1通过招募Ezh2调节肌生成

王珊珊等。 细胞死亡疾病. .

摘要

Neat1在许多组织和细胞中广泛表达，并对许多癌细胞产生促增殖作用。然而，关于Neat1在肌发生中的作用知之甚少。在这里，我们描述了Neat1在肌肉细胞形成和肌肉再生中的作用。在C2C12细胞中进行的功能增强或丧失研究表明，Neat1可加速成肌细胞增殖，但抑制成肌细胞分化和融合。此外，体内敲除Neat1会增加肌肉纤维的横截面积，但会损害肌肉再生。Neat1主要通过核心结合区（1001-1540 bp）与Ezh2进行机械相互作用，并招募Ezh2作为靶基因启动子。Neat1主要通过降低细胞周期素依赖性激酶抑制剂P21基因的表达来促进成肌细胞增殖，但通过抑制肌生成标记基因（如Myog、Myh4和Tnni2）的转录来抑制成肌细胞分化。总之，我们揭示了之前未知的Neat1在肌肉发育中的功能以及Neat1调节肌肉发生的分子机制。

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数字

图1
图1。整洁1在肌肉发生和肌肉再生过程中上调。
一qPCR结果表明整洁1从分化后第0天（增殖细胞）到第5天，C2C12细胞中的表达上调，但在第8天下调。b条,c（c）qPCR结果表明米格表达在第0、2和5天上调，但在第8天下调(b条)，而Myhc公司在成肌细胞分化过程中表达上调(c（c）).d–f日后肢肌肉接受CTX注射，并在损伤后0、1、2、3、5和8天采集，以进行RNA分析。qPCR结果显示整洁1(d日),Myod公司(e（电子）)、和第7页(如果)基因在肌肉再生的早期被诱导，但随后被下调。相对RNA水平归一化为β-肌动蛋白。所有值均表示平均值 ± 三个独立实验的标准偏差
图2
图2。整洁1促进C2C12细胞增殖，但抑制肌源性分化和融合。
一qPCR结果显示基辅67和太平洋航空公司显著减少了整洁1击倒。b条Western blotting分析显示，Ki67蛋白表达在整洁1击倒。c（c）RTCA xCELLigence分析表明，细胞生长动力学因整洁1击倒。d日EdU-PI流式细胞术的定量结果表明，S期细胞的比例显著降低整洁1击倒。e（电子）qPCR结果显示Myod公司,米格,Myhc公司、α-肌动蛋白和Tnni2号机组显著增加了整洁1分化后第2天C2C12细胞中的敲除。如果Western blotting分析显示，Myod、Myog、Myhc和α-actin的蛋白表达在整洁1分化后第0、2和4天C2C12细胞中的敲除。克Myog的免疫荧光染色显示整洁1转染后第2天敲除。细胞核用DAPI染色。Myog的数量+使用ImageJ软件对细胞进行量化。小时Myhc的免疫荧光染色显示C2C12分化显著上调整洁1转染后第3天敲除。Myhc的数量+使用ImageJ软件对细胞进行量化。我分化5天的C2C12细胞肌球蛋白免疫荧光染色显示整洁1成肌细胞融合显著增强。相对RNA和蛋白质水平归一化为β-肌动蛋白水平。所有值均表示平均值 ± 三个独立实验的s.d*第页 < 0.05, **第页 < 0.01，N.S.表示不显著
图3
图3。击倒整洁1改善体内肌肉生长。
一LV3-sh注入方案整洁1或LV3-shNC颗粒进入C57小鼠的右后肢或左后肢肌肉。每周注射一次，持续一个月。b条qPCR结果表明整洁1LV3-sh后表达降低整洁1粒子注射，同时米格,Myhc公司,α-肌动蛋白、和Tnni2号机组LV3-sh后显著增加整洁1粒子注入。c（c）Western blotting分析显示，LV3-sh后Myog、Myhc、α-actin和Tnni2的蛋白表达增加整洁1粒子注入。使用ImageJ软件量化这些基因的蛋白质水平。d日右后肢或左后肢三块肌肉的代表性照片显示，右后肢屈、TA和Gas肌肉的体积大于左后肢的体积。e（电子）对12只注射小鼠右后肢或左后肢三块肌肉的重量进行量化，结果表明右后肢屈、TA和Gas肌肉的重量高于左后肢。如果注射LV3-sh后右或左后肢屈、TA和Gas肌肌球蛋白免疫荧光染色的代表性照片整洁1或LV3-shNC颗粒。与LV3-shNC粒子注入相比，LV3-sh整洁1粒子注射增加了指定肌肉的平均横截面积。使用ImageJ量化屈肌、TA肌和Gas肌的纤维大小。相对RNA和蛋白质水平归一化为Gapdh的水平。所有值均表示平均值 ± 三个独立实验的s.d*第页 < 0.05, **第页 < 0.01
图4
图4。整洁1体内注射CTX后，抑制延迟肌肉再生。
一LV3-sh方案整洁1或LV3-shNC颗粒注射和CTX注射到Gas肌肉和采集时间点，以进行后续分析。b条H&E染色结果显示LV3-sh整洁1与LV3-shNC颗粒注射相比，颗粒注射显著延迟肌肉再生。在CTX注射后第0、3、7和15天采集注射肌肉，并用于H&E染色。c（c）注射CTX后15天具有中心定位细胞核（CLN）的纤维百分比的定量。结果表明，LV3-sh中含有CLN的纤维百分比显著升高整洁1与LV3-shNC组相比。d日qPCR结果显示整洁1,第7页,Myod公司,米格,eMyhc公司、和基辅67LV3-sh后基因显著减少整洁1粒子注入。注射肌肉在CTX注射后第7天采集。e（电子）Western blotting分析显示，LV3-sh后Pax7、Myod、Myog和eMyhc的蛋白表达水平降低整洁1粒子注入。使用ImageJ软件量化这些基因的蛋白质水平。注射肌肉在CTX注射后第7天采集。如果CTX注射后第3天肌肉切片中Pax7、EdU和DAPI的免疫荧光染色显示Pax7+LV3-sh后SCs和增殖SCs减少整洁1粒子注入。Pax7的百分比+SCs表示Pax7的数量比例+细胞核在DAPI总数中的比例，增殖卫星细胞的百分比表示Pax7的数量比例+/教育部+Pax7总数中的核+核。克,小时Myog的免疫荧光染色(克)和eMyhc(小时)CTX后第3天的肌肉切片显示LV3-sh后这些蛋白的表达显著降低整洁1粒子注入。相对RNA和蛋白质水平归一化为Gapdh的水平。所有值均表示平均值 ± 三个独立实验的s.d*第页 < 0.05, **第页 < 0.01，N.S.表示不显著
图5
图5。整洁1与Ezh2交互。
一使用Ezh2抗体在C2C12细胞中进行RNA免疫沉淀（RIP）分析。检索到的整洁1通过PCR评估转录本。b条生物素标记全长整洁1被用来拉下鄂尔多斯2号。Western blotting分析检测沉淀的Ezh2蛋白。Myod和Pcna作为阴性对照。c（c）一系列整洁1通过RNA下拉分析评估片段（FL、F1、F2、F3、F4）和Ezh2。d日转染一系列整洁1片段（FL、F1、F2、F3和F4）进入C2C12细胞，转染后第2天细胞进行EdU染色。EdU染色结果的定量显示F3的过度表达，而非其他片段，以及全长整洁1显著促进C2C12细胞增殖。e（电子）,如果转染一系列整洁1片段（FL、F1、F2、F3和F4）进入C2C12细胞，然后在分化后2天对Myog和Myhc进行免疫荧光染色。免疫荧光染色的定量结果显示F3的过度表达，而不是其他片段，以及全长整洁1显著抑制Myog蛋白表达(e（电子）)和C2C12细胞分化(如果). 使用U1作为RIP分析的对照。Myod和Pcna被用作RNA下拉测定的对照。所有值均表示平均值 ± 三个独立实验的s.d*第页 < 0.05, **第页 < 0.01，N.S.表示不显著
图6
图6。整洁1禁止第21页通过Ezh2表达。
一Western blotting分析表明整洁1敲除增强了C2C12细胞中P21蛋白的表达，但降低了Cdk4蛋白的表达。使用ImageJ软件定量P21和Cdk4的相对蛋白水平。b条,c（c）ChIP-qPCR结果显示Ezh2的富集(b条)和H3k27me3(c（c）)在第21页启动子在整洁1击倒。d日,e（电子）ChIP-qPCR结果显示Ezh2的富集(d日)和H3k27me3(e（电子）)在第21页启动子在整洁1过度表达。如果共转染鄂尔多斯2siRNA片段和整洁1表达载体在C2C12细胞中培养2天。对P21进行免疫荧光染色，并用ImageJ定量P21的表达。P21免疫荧光染色结果的定量显示整洁1抑制P21蛋白的表达，但与鄂尔多斯2siRNA片段。克 整洁1siRNA片段和鄂尔多斯2表达载体共转染C2C12细胞，转染后2天进行EdU染色。教育程度百分比+对细胞进行定量。EdU染色结果的量化显示整洁1敲低可抑制成肌细胞增殖。联合转染后鄂尔多斯2表达式向量，整洁1敲除不能抑制成肌细胞增殖。小时 整洁1和第21页将siRNA片段联合转染到C2C12细胞中，转染后2天对细胞进行EdU染色。EdU染色结果的量化显示整洁1击倒显著降低了EdU的百分比+细胞，但没有减少EdU的数量+联合转染后的细胞第21页siRNA片段。蛋白质水平标准化为β-肌动蛋白水平。所有值均表示平均值 ± 三个独立实验的s.d*第页 < 0.05, **第页 < 0.01，N.S.表示不显著
图7
图7。整洁1通过Ezh2抑制肌源性基因的表达。
一,b条ChIP-qPCR结果表明整洁1击倒显著降低了鄂尔多斯2号的富集程度(一)和H3k27me3(b条)在米格,我的4、和Tnni2号机组发起人。c（c）,d日ChIP-qPCR结果显示整洁1过度表达显著增加了Ezh2的富集(c（c）)和H3k27me3(d日)在Myog公司,我的4、和Tnni2号机组发起人。e（电子） 整洁1表达式向量和鄂尔多斯2siRNA片段共转染C2C12细胞。用qPCR法检测实验后指示基因的表达整洁1表达式向量和鄂尔多斯2siRNA片段在分化后3天联合转染。结果表明整洁1抑制米格,Myhc公司和Tnni2号机组，但与鄂尔多斯2siRNA片段。如果 整洁1siRNA片段被转染鄂尔多斯2在分化后5天将表达载体导入C2C12细胞，对细胞进行Myhc免疫荧光染色。Myhc免疫荧光染色结果的定量显示整洁1单独敲除可增加Myhc蛋白的表达，但与鄂尔多斯2表达式向量。克,小时ChIRP-qPCR结果显示整洁1直接绑定到米格,我的4、和Tnni2号机组发起人，但不是Myod公司C2C12细胞中的启动子(克)和原代成肌细胞(小时). 相对RNA水平归一化为β-肌动蛋白水平。所有值均表示平均值 ± 三个独立实验的s.d*第页 < 0.05, **第页 < 0.01，N.S.表示不显著
图8
图8。的示意模型整洁1肌肉发生的调节。
在增殖的成肌细胞中，整洁1引导Ezh2到达第21页启动子和抑制剂第21页表达，促进成肌细胞增殖。分化后，整洁1招募Ezh2来抑制肌肉特异性基因的表达，例如米格,我的4、和Tnni2号机组，并抑制肌源性分化
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    1. Sabourin LA，Rudnicki MA。肌肉发生的分子调控。临床。遗传学。2000;57:16–25.-公共医学
    1. Rudnicki MA等。骨骼肌的形成需要MyoD或Myf-5。单元格。1993;75:1351–1359.-公共医学
    1. Tapscott SJ等。MyoD1：一种需要Myc同源区将成纤维细胞转化为成肌细胞的核磷蛋白。科学。1988;242:405–411.-公共医学
    1. Choi J等。MyoD将原代皮肤成纤维细胞、成软骨细胞、平滑肌和视网膜色素上皮细胞转化为条纹状单核成肌细胞和多核肌管。程序。美国国家科学院。科学。美国，1990年；87:7988–7992.-项目管理咨询公司-公共医学

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