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.2019年6月25日；8（6）:635。
doi:10.3390/cells8060635。

Slit2/Robo1信号通路的激活通过TGF-β/Smads通路促进大肠癌的转移

姚玉英 1, 周子君 2, 李柳友 三, 李俊晨 4, 黄立勋 5, 李江超 6, 崔玲琦 7, 郑凌云 8, 王丽静（Lijing Wang） 9, 钱钱章 10
附属公司

Slit2/Robo1信号传导的激活通过TGF-β/Smads通路的激活促进结直肠癌的肿瘤转移

姚玉英等。 细胞. .

勘误表in

摘要

Slit2（狭缝导向配体2）是Roundabout1（Robo1）跨膜受体的配体，在结直肠癌中经常过度表达。在本研究中，我们在代谢gEne RApid可视化仪（MERAV）数据库中进行了数据挖掘，发现Slit2和TGF-β1（转化生长因子-β1）在癌组织中的表达高于健康志愿者或野生型小鼠的无瘤组织。此外，随着病理分期的增加，CRC中Slit2和TGF-β1的表达增加。CRC和Apc患者血清Slit2水平最小值/+与健康对照组相比，自发性肠腺瘤小鼠显著增加。Slit2与Robo1结合的特异性阻断使TGF-β/Smads信号失活，并抑制肿瘤细胞的迁移和转移，用TGF-。然而，TGF-β1/Smads信号的特异性抑制减少了CRC肿瘤细胞的迁移和侵袭，而不影响细胞增殖。本研究表明，CRC中Slit2/Robo1信号的激活部分通过TGF-β/Smads通路的激活诱导肿瘤转移。

关键词：R5；Slit2/Robo1信令；TGF-β/Smads信号转导；大肠癌；转移。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
图1
Slit2在CRC和Apc患者中的表达最小值/+老鼠。(A类)分析MERAV数据库中CRC患者正常和原发肿瘤组织中Slit2的相对基因表达水平。CRC患者原发肿瘤组织中Slit2的相对表达显著增加(n个=321）与正常样品相比(n个= 19). (B)MERAV数据库中CRC患者正常组织和不同级别原发肿瘤组织中Slit2的相对基因表达水平。随着原发性CRC患者病理分级的增加，相对Slit2表达逐渐不受调控。Slit2表达式没有统计差异，如t吨-正常组间测试(n个=19）和1级原发性CRC患者(n个= 13). 正常组和2级组之间Slit2表达显著增加(n个=241），等级3(n个=63），4级(n个=4）原发性CRC患者。(C类)采用ELISA法检测健康志愿者和CRC患者血清中Slit2蛋白浓度。结直肠癌患者血清中Slit2表达的增加(n个=23）与正常健康志愿者相比(n个= 18). (D类)野生型（C57）小鼠或Apc中Slit2的蛋白浓度最小值/+ELISA法检测不同病理阶段小鼠。Apc血清中Slit2增加最小值/+小鼠与野生型小鼠比较。此外，Slit2在肿瘤发展过程中逐渐增加。*：第页< 0.05, **:第页<0.01和***：第页< 0.001.
图2
图2
Slit2/Robo1信号的特异性阻断抑制体内CRC的肿瘤生长和转移。仅根据肿瘤直径将肿瘤分为微腺瘤（MA，<2mm）和腺瘤（AD，≥2mm）。数字(A类)和负担(B与mIgG组相比，R5对Slit2/Robo1信号传导的特异性阻断显著抑制了微腺瘤肿瘤和总类型肿瘤（微腺瘤和腺瘤）的总体积。R5治疗的Apc的肠腺瘤数量和负担也减少最小值/+小鼠与mIgG处理的小鼠进行比较。然而，由于小鼠的个体差异，两组之间的肿瘤数量和肿瘤负担没有显著差异。(C类)R5治疗降低了Apc肿瘤的病理分期最小值/+小鼠与mIgG处理的小鼠进行比较。在mIgG治疗的Apc中，大多数肠道肿瘤是腺瘤最小值/+小鼠，R5处理的Apc的肠道中可以看到大多数增生最小值/+老鼠。构建Lovo细胞的肺转移瘤模型，并用R5（一种特异识别人类、大鼠和小鼠Robo1和mIgG的单克隆抗体）治疗。与mIgG治疗组相比，R5治疗组肺组织表面的肺转移灶数量显著减少。(D类)将肺组织切片并用苏木精和伊红染色。统计肺组织切片中肺转移灶的数量。与mIgG处理的小鼠相比，R5可以显著减少肺组织切片中的转移灶数量。(E类)R5和mIgG处理的小鼠肺组织切片中转移灶的代表性。与mIgG处理的小鼠相比，R5处理的小鼠切片中的肺转移灶更少。(F类)n个= 6. *:第页< 0.05, **:第页<0.01，以及***：第页<0.001。比例尺：500μm。
图3
图3
阻断Slit2/Robo1信号抑制Lovo细胞的生长、迁移、趋化和侵袭能力。(A类)将指示浓度的R5添加到Lovo细胞中，并在48小时后使用CCK8（细胞计数试剂盒-8）测定细胞活力。R5以剂量依赖的方式抑制细胞活力，IC50Lovo细胞中的半数最大抑制浓度为~0.7μg/mL。以1000个细胞的密度接种Lovo细胞，并用0.7μg/mL mIgG或R5处理。(B)与mIgG处理井相比，R5处理井中单个菌落的大小较小。(C类)对Lovo和SW480细胞的R5处理和mIgG处理孔中的菌落总数进行了计数，与mIgG-处理孔相比，R5处理孔中可以看到更少的菌落。(D类)采用伤口愈合试验检测阻断Slit2/Robo1信号对细胞迁移的抑制作用。用mIgG或R5处理Lovo细胞，24h后检测细胞迁移距离。与Lovo细胞中的mIgG相比，R5显著抑制了细胞迁移。(E类)采用Transwell迁移法检测Lovo细胞的趋化能力。与mIgG治疗组相比，R5治疗组迁移至下膜的细胞数量减少。(F类)用Matrigel侵袭试验检测其对细胞侵袭的抑制作用。将Lovo细胞加入上部腔室中，同时用mIgG或R5处理，20小时后测量细胞对腔室底部的侵袭。与mIgG相比，使用R5特异性阻断Slit2/Robo1信号显著抑制Lovo细胞的细胞侵袭***第页<0.001。比例尺：100μm。结果代表了三个独立的实验。
图4
图4
TGF-β1/Smad2/3通路与CRC中Slit2/Robo1信号通路相关。(A类)从MERAV数据库中获得的相对TGF-β1表达在CRC患者的原发肿瘤组织中显著增加(n个=321）与正常样品相比(n个= 19). (B)MERAV数据库显示，随着原发性CRC患者病理分级的增加，TGF-β1的相对表达逐渐上调。TGF-β1的表达没有统计学差异，如t吨-测试，在正常组之间(n个=19）和1级原发性CRC患者(n个= 13). 正常组和2级之间TGF-β1表达显著增加(n个=241），等级3(n个=63）和4级(n个=4）原发性CRC患者。(C类)利用MERAV数据库分析TGF-β1和Slit2之间的关系。TGF-β1的表达与Slit2呈正相关。(D类)通过蛋白质印迹法检测用mIgG或R5处理的Lovo细胞中TGF-β1/Smads信号通路的蛋白质表达。使用Quantity One软件对蛋白带进行密度定量，并将其归一化为GAPDH表达。与mIgG处理的Lovo细胞相比，使用R5阻断Slit2/Robo1信号显著抑制TGF-β1和磷酸化Smad2/Smad3的表达。(E类)mIgG或R5处理的Apc肿瘤组织中TGF-β1/Smads信号通路的蛋白表达最小值/+通过IHC试验检测小鼠。使用IPP软件量化切片中的蛋白质表达水平。ns：无显著差异，*：第页< 0.05, **:第页< 0.01, ***:第页< 0.001.
图5
图5
阻断Slit2/Robo1信号抑制细胞迁移、趋化和侵袭能力，这部分依赖于TGF-β1/Smad2/3通路。(A类)Lovo细胞的细胞增殖在接受过与未接受过P144（一种特异性TGF-β1抑制剂）处理的细胞之间没有显著差异，持续48小时(B)和入侵(C类)检测到能力。P144显著抑制Lovo细胞的迁移和侵袭能力。(D类)通过Western blotting分析检测到的TGF-β1处理可以消除R5对smad2和smad3磷酸化的抑制。伤口愈合试验(E类)，Transwell迁移分析(F类)和Matrigel侵袭试验(G公司)检测TGF-β1通路是否参与Slit2/Robo1信号介导的细胞迁移和侵袭。用R5或TGF-β1处理Lovo细胞，或同时用R5和TGF-α1处理，以进一步检测细胞迁移、趋化和侵袭能力。R5抑制Lovo细胞的细胞迁移、趋化性和侵袭能力。相反，TGF-β1治疗增加了Lovo细胞的迁移、趋化和侵袭能力。进一步用R5和TGF-β1治疗可以部分逆转R5对细胞迁移、趋化性和侵袭能力的抑制作用。*：第页< 0.05, **:第页<0.01和***：第页<0.001。蛋白质条带用密度计定量，并归一化为GAPDH表达。比例尺：100μm。
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    1. Siegel R.L.，Miller K.D.，Jemal A.癌症统计。加州癌症杂志临床。2018;68:7–30. doi:10.3322/caac.21442。-内政部-公共医学
    1. 王伟生，陈鹏明，苏勇。大肠癌：从肿瘤发生到治疗。细胞和分子生命科学。CMLS公司。2006;63:663–671. doi:10.1007/s00018-005-5425-4。-内政部-公共医学
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    1. El-Shami K.、Oeffinger K.C.、Erb N.L.、Willis A.、Bretsch J.K.、Pratt-Chapman M.L.、Cannady R.S.、Wong S.L.、Rose J.、Barbour A.L.等。美国癌症学会结直肠癌生存护理指南。加州癌症杂志临床。2015;65:428–455. doi:10.3322/caac.21286。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

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