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.2019年7月8日；39（7）：英国标准20190700。
doi:10.1042/BSR20190700。 2019年7月31日印刷。

下调microRNA-142-3p通过抑制核因子-κB信号传导抑制类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的侵袭性表型

强建宏 1, 吕婷婷 2, 吴振彪 三, 杨喜超 4
附属公司

下调microRNA-142-3p通过抑制核因子-κB信号传导抑制类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的侵袭性表型

强建宏等。 Biosci代表. .

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摘要

本研究旨在研究miR-142-3p对类风湿关节炎（RA）人成纤维细胞样滑膜细胞（RA-HFLS）侵袭性表型的调节作用，并揭示与核因子-κB（NF-κB）信号转导相关的潜在机制。通过定量实时PCR（qRT-PCR）和Northern blot分析检测miR-142-3p在RA滑膜组织和RA-HFLS中的表达。用miR-142-3p抑制剂转染RA-HFLS和/或用10µg/l肿瘤坏死因子α（TNF-α）治疗。检测存活率、集落形成、凋亡、迁移、侵袭以及白细胞介素（IL）-6和基质金属蛋白酶3（MMP-3）水平。qRT-PCR检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bax、Bad、IL-6和MMP-3的mRNA表达。此外，Western blot检测Bcl-2、IL-1受体相关激酶1（IRAK1）、Toll样受体4（TLR4）、NF-κB p65和磷酸化NF-κ的B p65的表达。通过双荧光素酶报告基因分析鉴定IRAK1与miR-142-3p的相互作用。MiR-142-3p在RA滑膜组织和RA-HFLS中上调。TNF-α激活RA-HFLS的攻击性表型，包括增强增殖、迁移、侵袭和炎症，并抑制凋亡。miR-142-3p抑制剂显著降低TNF-α处理的RA-HFLS的细胞活力、细胞克隆数、迁移率、侵袭细胞数、IL-6和MMP-3的含量和表达，增加凋亡率和Bax和Bad的表达，降低Bcl-2的表达。MiR-142-3p抑制剂显著逆转TNF-α诱导的TNF-α治疗的RA HFLS中IRAK1、TLR4和p-NF-κB p65的上调。此外，IRAK1是miR-142-3p的靶点。miR-142-3p的下调通过抑制NF-κB信号传导抑制RA HFLS的侵袭性表型。

关键词：炎症；MicroRNA-142-3p；核因子-kappa B；增殖；肿瘤坏死因子α。

PubMed免责声明

利益冲突声明

本研究是在获得第四军医大学第一附属医院伦理委员会批准后进行的。这项研究是根据《世界医学协会赫尔辛基宣言》进行的，所有受试者都获得了书面知情同意书。

作者声明，与手稿没有任何利益冲突。

数字

图1
图1。qRT-PCR检测miR-142-3p的表达
(A类)OA和RA患者滑膜组织中miR-142-3p mRNA的相对表达(n个=10); (B类)III期和IV期OA患者滑膜组织中miR-142-3p mRNA的相对表达(n个=5）；(C类)OA人成纤维细胞样滑膜细胞（OA-HFLS）、RA-HFLS和正常HFLS中miR-142-3p mRNA的相对表达；(D类)OA和RA患者滑膜组织miR-142-3p的Northern印迹分析(n个=10); (E类)OA-HFLS、RA-HFLS和正常HFLSs中miR-142-3p的Northern blot分析，P（P）与OA（A）RAIII（B）或HFLS和OA-HFLS（C）相比，<0.05。
图2
图2。RA-HFLS的增殖
(A类)生存能力（OD495不同浓度TNF-α处理下RA-HFLS的值(n个=5）；(B类)采用实时定量PCR检测miR-142-3p的mRNA表达；(C类)10µg/l TNF-α处理不同时间后RA-HFLS的活性(n个=5）。(D类)TNF-α处理的RA-HFLS形成的细胞克隆数(n个=5）。未经治疗的模拟RA-HFLS；TNF-α、RA-HFLS与TNF-；转染miR-142-3p INC的INC+TNF-α、RA-HFLS和TNF-；抑制剂+TNF-α，RA-HFLS转染miR-142-3p抑制剂并用TNF-。a、 b和c，P（P）分别<0.05和0、5、10、20 mg/l TNF-α（A）。*，P（P）与Mock和INC（B）相比<0.05。*，P（P）与Mock相比<0.05；#，P（P）与TNF-α和INC+TNF-α（B和C）相比<0.05。
图3
图3。RA-HFLS的凋亡
(A类)RA-HFLS显微镜下TUNEL染色（×100）；(B类)RA-HFLS的凋亡率(n个=5）；(C类)Bcl-2、Bax和Bad的相对mRNA表达。(D类)Bcl-2、Bax和Bad的相对蛋白表达。未经治疗的模拟RA-HFLS；TNF-α、RA-HFLS与TNF-；转染miR-142-3p INC的INC+TNF-α、RA-HFLS和TNF-；抑制剂+TNF-α，RA-HFLS转染miR-142-3p抑制剂并用TNF-，P（P）<0.05与模拟；#，P（P）与TNF-α和INC+TNF-。
图4
图4。RA-HFLS的迁移和入侵
(A类)伤口愈合试验检测的迁移率(n个=5）；(B类)穿孔法检测的侵袭细胞数量(n个=5）。未经治疗的模拟RA-HFLS；TNF-α、RA-HFLS与TNF-；转染miR-142-3p INC的INC+TNF-α、RA-HFLS和TNF-；抑制剂+TNF-α，RA-HFLS转染miR-142-3p抑制剂并用TNF-，P（P）<0.05与模拟；#，P（P）与TNF-α和INC+TNF-。
图5
图5。RA-HFLS中炎症因子的水平
(A类)IL-6含量；(B类)MMP-3含量；(C类)qRT-PCR检测IL-6 mRNA的相对表达；(D类)qRT-PCR检测MMP-3 mRNA的相对表达。未经治疗的模拟RA-HFLS；TNF-α、用TNF-α治疗的RA HFLS；INC+TNF-α，用miR-142-3p INC转染并用TNF-α处理的RA HFLSs；抑制剂+TNF-α、用miR-142-3p抑制剂转染并用TNF-α处理的RA HFLS。*，P（P）<0.05与模拟；#，P（P）与TNF-α和INC+TNF-。
图6
图6。Western blot检测RA-HFLS中IRAK1、TLR4、NF-κB p65和p-NF-κ）B p65的表达
未经治疗的模拟RA-HFLS；TNF-α、RA-HFLS与TNF-；转染miR-142-3p INC的INC+TNF-α、RA-HFLS和TNF-；抑制剂+TNF-α，RA-HFLS转染miR-142-3p抑制剂并用TNF-，P（P）<0.05与模拟；#，P（P）与TNF-α和INC+TNF-。
图7
图7。miR-142-3p与IRAK1的相互作用
(A类)用Target Scan软件预测IRAK1 3′-UTR处miR-142-3p的结合位点；(B类)联合转染IRAK1-wild-type（WT）/IRAK1-突变体（MT）和miR-142-3p-mimics（mimics）/miR-142-3p mimics NC的HEK-293T细胞的相对荧光强度*，P（P）与MT+模拟、MT+NC和WT+NC相比，<0.05。
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    1. Shrivastava A.K.和Pandey A.（2013）炎症和类风湿关节炎。《生理学杂志》。生物化学。69、335–34710.1007/s13105-012-0216-5-DOI程序-公共医学
    1. 纳克维A.A.et公司al.（2017）巴基斯坦类风湿关节炎患者循证疾病教育文献的开发。疾病5，pii:E27.10.3390/diseases5040027-DOI程序-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Burmester G.R.和Pope J.E.（2017）《类风湿关节炎的新治疗策略》。柳叶刀389，2338–234810.1016/S0140-6736（17）31491-5-DOI程序-公共医学
    1. Arend W.P.和Dayer J.M.（2014）抑制类风湿关节炎中白细胞介素-1和肿瘤坏死因子α的产生和作用。大黄性关节炎。38、151–16010.1002/第1780380202条-DOI程序-公共医学

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