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.2019年5月15日；11(5):2995-3006.
2019年eCollection。

丹参酮ⅡA通过下调PI3K/Akt通路诱导急性单核细胞白血病细胞凋亡和自噬

张艳萍 1, 严庚 1, 何俊涛 1, 董武（Dong Wu） 2, 张彤 1, 李雪 1, 张磊（Lei Zhang） 1, 爱力贺 2
附属公司

丹参酮ⅡA通过下调PI3K/Akt通路诱导急性单核细胞白血病细胞凋亡和自噬

张艳萍等。 美国J Transl Res. .

摘要

急性髓细胞白血病（AML）的特点是髓细胞无限制增殖。研究表明，丹参酮IIA（Tan IIA）对不同类型的癌症具有抗肿瘤活性。然而，Tan IIA调节AML细胞凋亡和自噬的潜在机制尚不清楚。因此，本研究旨在调查Tan IIA对AML的影响在体外和体内分别采用CCK-8法、EdU染色、流式细胞术、MDC染色、免疫荧光、跨孔迁移和侵袭试验检测细胞增殖、凋亡、自噬、迁移和侵袭。此外，用蛋白质印迹法检测细胞中Bax、Bcl-2、活性胱天蛋白酶-3、Beclin-1、Atg-5、p-mTOR和p-Akt的蛋白水平。此外，还进行了动物研究以评估Tan IIA对AML的抗肿瘤作用体内结果表明，Tan IIA显著抑制U937细胞的生长在体外和体内同时，Tan IIA通过上调活性caspase-3和Bax水平，下调Bcl-2水平，诱导U937细胞凋亡在体外和体内此外，Tan IIA抑制了U937细胞的迁移和侵袭能力。此外，Tan IIA通过上调LC3 II、Atg5和Beclin 1的表达在U937细胞中诱导自噬，MDC染色和免疫荧光分析进一步证实了这一点。我们首次发现，自噬抑制剂3MA显著增强了Tan IIA诱导的U937细胞凋亡。此外，Tan IIA通过下调PI3K/Akt途径诱导细胞凋亡和自噬在体外和体内因此，越来越多的证据表明，Tan IIA可能是未来改善AML症状的潜在药物。

关键词：PI3K/Akt途径；丹参酮IIA；急性单核细胞白血病；细胞凋亡；自噬。

PubMed免责声明

利益冲突声明

没有。

数字

图1
图1
Tan IIA抑制U937细胞增殖。A.Tan IIA的化学结构。B.使用CCK-8法测定用大黄素（0、10、20、40或80μM）处理24、48和72小时的U937细胞的细胞活力。C、D用Tan IIA（20或40μM）治疗72小时。用EdU和DAPI染色定量相对荧光表达。E、 对U937细胞进行3天的集落形成试验，并对存活的集落进行计数。（与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01）。
图2
图2
Tan IIA诱导U937细胞凋亡。将U937细胞暴露于20或40μM Tan IIA中72 h。用Annexin V和PI双重染色检测凋亡细胞。B.计算细胞凋亡率。C.通过western blotting分析U937细胞中Bax、Bcl-2和活性caspase-3的表达。D.通过归一化为β-肌动蛋白来量化Bax的表达。E.通过归一化为β-肌动蛋白来量化Bcl-2的表达。F.活性caspase-3的表达通过归一化为β-肌动蛋白来量化。（与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01）。
图3
图3
Tan IIA抑制U937细胞的迁移和侵袭能力。将U937细胞暴露于40μM Tan IIA中24 h。A，B。细胞迁移能力通过跨阱迁移实验检测，×200倍放大。C、 D.细胞侵袭能力采用跨孔侵袭试验检测，×200倍放大**与对照组相比，P<0.01。
图4
图4
抑制自噬增强了Tan IIA诱导的U937细胞凋亡。A.将U937细胞与5mM 3MA孵育1小时。然后，改变培养基，将细胞与40μM Tan IIA再孵育72小时。使用MDC染色观察自噬体的形成，×200放大。B、计数细胞内自噬体的数量。C.通过LC3和DAPI染色，×400倍放大，定量相对荧光表达。D.将U937细胞暴露于20或40μM Tan IIA中72小时。通过蛋白质印迹分析细胞中beclin 1和Atg5的表达。E.通过归一化为β-肌动蛋白来量化Beclin 1的表达。F.通过归一化为β-肌动蛋白来量化Atg5的表达。将G.U937细胞与5 mM 3MA孵育1 h。然后，更换培养基，并将细胞与40μM Tan IIA孵育72 h。使用CCK-8测定细胞活力。H、Annexin V和PI双重染色检测凋亡细胞。一、计算凋亡细胞率。J.通过western blotting分析细胞中活性caspase 3的表达。K.活性半胱天冬酶3的相对表达通过归一化为β-肌动蛋白来量化*与对照组相比，P<0.05，**P<0.01##与Tan IIA组相比，P<0.01。
图5
图5
Tan IIA通过抑制Akt/mTOR通路诱导U937细胞自噬。将U937细胞暴露于20或40μM Tan IIA中72 h。通过western blotting分析U937中p-Akt和p-mTOR的表达。B.将p-Akt的表达归一化为Akt，以量化其表达。C.通过归一化为mTOR来量化p-mTOR的表达**与对照组相比，P<0.01。
图6
图6
Tan IIA通过诱导凋亡抑制肿瘤生长体内A.用Tan IIA（0、30或50 mg/kg）治疗4周的裸鼠肿瘤体积。每周监测肿瘤体积。B.治疗4周后，分离肿瘤并拍照。C.计算小鼠肿瘤重量。D.计算肿瘤生长抑制率。E、 F.计算各组肿瘤组织的TUNEL染色和TUNEL阳性细胞率。通过western blotting分析肿瘤组织中p-Akt、p-mTOR和Beclin 1的表达。H.p-Akt的相对表达通过标准化为Akt来量化。I.通过归一化为mTOR来量化p-mTOR的相对表达。J.通过归一化为β-肌动蛋白来量化Beclin 1的相对表达**与溶媒组相比P＜0.01。
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