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.2019年5月12日2019:2301903。
doi:10.1155/2019/201903。 2019年eCollection。

TNF公司α-介导的坏死通过调节炎症反应加重脂肪肝缺血再灌注损伤

杨法吉 1, 龙城尚 1, 王帅（Shuai Wang） 1, 杨柳 1, 任浩珍 1, 魏朱 2, 史晓蕾 1
附属公司

TNF公司α-介导的坏死通过调节炎症反应加重脂肪肝缺血再灌注损伤

杨法吉等。 氧化介质细胞Longev. .

摘要

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）对缺血再灌注损伤（IRI）更为敏感，但目前尚无有效的方法来缓解IRI。坏死，也称为“程序性坏死”，具有坏死和凋亡的特征。然而，脂肪肝IRI中坏死性下垂的作用在很大程度上尚不清楚。在本研究中，我们旨在评估脂肪肝中是否激活了坏死性下垂，以及这种激活是否加速了脂肪肝中的IRI。在这项研究中，我们发现喂食HFD的小鼠肝脏IRI增强，TNF释放更多α肿瘤坏死因子α巨噬细胞上清液可诱导肝细胞坏死在体外NAFLD中坏死被激活，导致更严重的IRI，这种坏死可以被TN3-19.12（TNF的中和单克隆抗体）抑制αNec-1和GSK’872这两种坏死抑制剂的预处理显著降低了HFD喂养小鼠的肝脏IRI和ROS生成。此外，抑制坏死下垂可降低肝细胞的ROS生成在体外炎症反应在IRI期间被激活，坏死下垂抑制剂可以抑制炎症信号通路和炎症细胞浸润。总之，TNFα-诱导性坏死在脂肪肝IRI中起重要作用。我们的研究结果表明，坏死可能是降低脂肪肝相关IRI的潜在靶点。

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数字

图1
图1
TNF的表达和分泌αIRI后脂肪肝中的含量增加。（a）IR后喂食CD和HFD的小鼠肝脏切片的代表性H&E染色。比例尺，200 μm.（b）对喂食CD和HFD的小鼠进行IR后的血清ALT测定(n个= 6 − 8). （c） 肿瘤坏死因子的qPCR分析αIR后喂食CD和HFD的小鼠(n个=每组4−5）。（d） 血清TNFα在喂食CD和HFD的小鼠中进行IR后测量(n个=每组5−6）。（e） PA（500）处理KCs的代表性油红O染色 μM、 Sigma-Aldrich，USA）或24小时PBS h.比例尺，100 μm.（f）肿瘤坏死因子α测定细胞上清液(n个=每组6人）。（g） 肿瘤坏死因子的qPCR分析α在用PA和H/R处理的KCs中。数据为平均值±SEM；∗P（P）< 0.05,∗∗P（P）< 0.01,∗∗∗P（P）<0.001，以及∗∗∗∗P（P）<0.0001由未配对学生t吨-测试。
图2
图2
TNF公司α诱导坏死性下垂在体外用TNF培养肝细胞α（美国PeproTech公司）或KC细胞上清液经PA处理，然后进行H/R处理24 h.（a）用不同浓度TNF处理的肝细胞的RIP1、RIP3和MLKL的免疫印迹分析α（b）用KCs细胞上清液处理24小时的肝细胞的RIP1、RIP3和MLKL的免疫印迹分析 h.（c，d）TNF处理的肝细胞的碘化丙啶（PI）染色的代表性免疫荧光染色α(20 纳克/毫升） h.比例尺，100 μm.（e，f）KCs细胞上清液处理24小时后肝细胞PI的代表性免疫荧光染色 h.比例尺，100 μm.数据为平均值±SEM；∗P（P）< 0.05,∗∗P（P）<0.01，以及∗∗∗P（P）<0.001由未配对的学生t吨-测试。
图3
图3
IRI后在NAFLD中发现坏死。（a）喂食CD或HFD的小鼠的坏死标记物RIP1、RIP3和MLKL的免疫印迹分析。（b） 喂食CD和HFD小鼠60天后RIP1、RIP3和MLKL的免疫印迹分析 缺血min和6 再灌注h。（c） 对喂食CD和HFD的小鼠进行代表性RIP3免疫荧光染色，无论是否喂食60 缺血min和6 再灌注h。比例尺，100 μ米。
图4
图4
抑制坏死性下垂可减轻NAFLD的缺血再灌注损伤。（a） 用Nec-1（1.65）预处理IRI后，喂食CD的小鼠的坏死标记物RIP1、RIP3和MLKL的免疫印迹分析 mg/kg，美国塞勒克），GSK′872（1.9 mM/kg，美国塞勒克）和TN3-19.12（250 μg/只小鼠，Sigma-Aldrich，美国）。（b） 用TN3-19.12、Nec-1和GSK′872预处理IRI后，喂食HFD小鼠的坏死标记物RIP1、RIP3和MLKL的免疫印迹分析。（c，d）IRI后喂食CD的小鼠的血清ALT和AST(n个=每组6−8）。（e，f）IRI后喂食HFD小鼠的血清ALT和AST(n个=每组6−8）。（g） 肝脏切片的典型H&E染色。比例尺，200 μm.（h）PI的代表性免疫荧光染色。比例尺，100 μm.数据为平均值±SEM；∗P（P）<0.05（未成对学生）t吨-测试。
图5
图5
抑制坏死性下垂减少TNF诱导的肝细胞死亡α体外（a）用TNF培养肝细胞α(20 纳克/毫升） h.用Nec-1（100）预处理的肝细胞的坏死标记物RIP1、RIP3和MLKL的免疫印迹分析 μM） 和GSK′872（5 μM） ●●●●。（b） PI的代表性免疫荧光染色。比例尺，100 μ米。
图6
图6
抑制坏死性下垂降低NAFLD IRI后ROS体内和在体外（a）使用Nec-1和GSK′872预处理的CD和HFD喂养小鼠肝脏切片DHE染色的代表性图像。比例尺，100 μm.（b）Nec-1和GSK′872预处理后TNF对肝细胞DE-FHDA染色的代表性图像α刺激。比例尺，100 μ米。
图7
图7
抑制坏死下垂可降低NAFLD IRI后的炎症反应。（a） JNK、cJUN、ERK、IKB的免疫印迹分析α（b）JNK、cJUN、ERK、IKB的免疫印迹分析αNec-1和GSK′872预处理IRI后CD-fed小鼠的p38和p65。（c） JNK、cJUN、ERK、IKB的免疫印迹分析αNec-1和GSK′872预处理IRI后CD-fed小鼠的p38和p65。（d） JNK、c-JUN、ERK、IKB的免疫印迹分析αNec-1和GSK′872预处理的肝细胞的p38和p65。（e） CD-和HFD-喂养小鼠IRI肝切片的代表性F4-80免疫组化。比例尺，100 μm.（f）CD和HFD喂养小鼠IRI肝切片的代表性MPO免疫组织化学。比例尺，100 μ米。
图8
图8
TNF公司α-介导的坏死通过调节炎症反应加重脂肪肝中的IRI。IRI期间巨噬细胞被激活，分泌更多TNFα脂肪肝与正常肝比较。TNF诱发坏死α在NAFLD中被激活，导致更严重的IRI。坏死促进DAMP的产生，从而增加炎症信号通路和炎症细胞浸润，加剧IRI。Nec-1和GSK′872抑制坏死性下垂可减少炎症信号通路和ROS生成，从而保护肝脏免受IRI的影响。
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