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.2019年5月28日12:4167-4179。
doi:10.2147/OTT。S204004。 2019年eCollection。

microRNA-612通过直接靶向溴多巴胺蛋白4抑制非小细胞肺癌的恶性发展

附属公司

microRNA-612通过直接靶向溴多巴胺蛋白4抑制非小细胞肺癌的恶性发展

康晓文等。 Onco目标Ther. .

缩回

摘要

背景:据报道,在非小细胞肺癌(NSCLC)中,microRNAs(miRNAs)的异常表达。miRNAs的失调对非小细胞肺癌的病理和生物学行为具有抑瘤或促瘤作用。miR-612与多种人类癌症相关;然而,miR-612在非小细胞肺癌中的表达、潜在作用和调控机制尚不清楚。材料和方法:这里,通过RT-qPCR评估miR-612在非小细胞肺癌组织标本和一组细胞系中的表达水平。细胞计数试剂盒8、流式细胞术、Transwell迁移和侵袭,以及体内进行肿瘤生长试验以确定miR-612在NSCLC细胞恶性表型中的功能作用。研究了miR-612在非小细胞肺癌中抑制肿瘤作用的分子机制。结果:miR-612在非小细胞肺癌中低水平表达,且低水平表达与肿瘤坏死分期和淋巴结转移显著相关。miR-612低表达的非小细胞肺癌患者总生存率低于高表达的患者。外源性miR-612表达降低了NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进了细胞凋亡体外.miR-612上调抑制非小细胞肺癌肿瘤生长体内.含溴蛋白4(巴西雷亚尔4)被证实为NSCLC细胞中miR-612的直接靶基因。BRD4在人非小细胞肺癌组织中明显过度表达,与miR-612表达呈负相关。抑制BRD4表达模拟了非小细胞肺癌细胞中miR-612过度表达的肿瘤抑制功能。miR-612表达的重新引入消除了miR-612介导的对NSCLC细胞的抑制作用。BRD4上调抑制非小细胞肺癌细胞PI3K/Akt通路的激活体外体内.结论:这项研究支持了miR-612在NSCLC细胞侵袭行为中发挥肿瘤抑制作用的第一个证据体外体内通过直接靶向BRD4并停用PI3K/Akt途径。因此,miR-612可能是非小细胞肺癌患者抗癌治疗的一个有希望的靶点。

关键词:生物标志物;溴代多巴胺蛋白4;microRNA-612;非小细胞肺癌。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明,他们在这项工作中没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
miR-612在非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞系中下调。(A类)采用RT-qPCR对57对非小细胞肺癌组织及相应的邻近正常组织(ANTs)中miR-612进行定量*P(P)与ANT相比<0.05。(B类)RT-qPCR用于评估五种人类NSCLC细胞系(H522、H460、H1299、A549和SK-MES-1)和非肿瘤性支气管上皮BEAS-2B中miR-612的表达*P(P)与BEAS-2B相比<0.05。(C类)采用Kaplan-Meier生存分析评估miR-612对非小细胞肺癌患者的预后价值*P(P)与miR-612高表达组相比,<0.05。P(P)-这些值来自Chi-square测试。
图2
图2
miR-612过表达损害H522和A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并诱导其凋亡。(A类)转染agomiR-612或agomiR-NC后,在H522和A549细胞中检测到miR-612的表达*P(P)<0.05 vs agomiR-NC(B类)CCK-8分析检测的细胞增殖结果显示,miR-612上调可降低H522和A549细胞的增殖*P(P)<0.05 vs agomiR-NC(C类)流式细胞术检测凋亡细胞,结果表明miR-612过表达增加了H522和A549细胞的凋亡*P(P)<0.05 vs agomiR-NC(D类E类)利用Transwell迁移和侵袭实验测量miR-612上调后H522和A549细胞的迁移和侵袭*P(P)与agomiR NC相比<0.05。
图3
图3
巴西雷亚尔4是NSCLC细胞中miR-612的直接靶基因。(A类)miR-612及其在BRD4的3′-UTR中的假定结合位点。还显示了突变结合位点。(B类C类)通过RT-qPCR和western blot分析分别测定miR-612过度表达H522和A549细胞BRD4的mRNA和蛋白水平*P(P)<0.05 vs agomiR-NC(D类)采用荧光素酶报告子分析法检测与agomiR-612或agomiR-NC和pMIR-Wt-BRD4-3ʹ-UTR或pMIR-Mut-BRD4-\697\-UTR联合转染后H522和A549细胞中的荧光素酶活性*P(P)与agomiR NC相比<0.05。
图4
图4
非小细胞肺癌组织中BRD4的表达与miR-612的表达呈负相关。(A类)采用RT-qPCR方法检测57对非小细胞肺癌组织及相应ANT中BRD4 mRNA的表达*P(P)与ANT相比<0.05。(B类)采用Spearman相关分析法分析非小细胞肺癌组织中miR-612和BRD4 mRNA水平的表达相关性。R(右)2=0.3470,P(P)<0.0001. (C类D类)miR-612高表达组的BRD4 mRNA和蛋白水平显著低于miR-611低表达组*P(P)与miR-612低表达组相比,<0.05。
图5
图5
BRD4沉默抑制H522和A549细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。收集转染BRD4 siRNA或NC siRNA的H522和A549细胞,并用于以下分析。(A类)转染细胞进行western blot分析以确定BRD4蛋白水平*P(P)<0.05 vs NC siRNA(B类C类)分别用CCK-8法和流式细胞术检测指示细胞的增殖和凋亡*P(P)<0.05 vs NC siRNA(D类E类)使用Transwell迁移和侵袭分析探索上述细胞的迁移和侵袭*P(P)<0.05 vs NC siRNA。
图6
图6
BRD4表达的恢复部分逆转了miR-612介导的对非小细胞肺癌细胞的作用。用BRD4过表达质粒pCMV-BRD4或空pCMV质粒转染miR-612过表达的H522和A549细胞。在不同的孵育期后收集转染细胞并用于随后的检测。(A类)Western blot分析用于量化BRD4蛋白水平*P(P)<0.05 vs agomiR-NC**P(P)<0.05 vs agomiR-612+pCMV。(B类E类)分别使用CCK-8、流式细胞术分析和Transwell迁移和侵袭分析来测定如上所述处理的H522和A549细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭*P(P)<0.05 vs agomiR-NC**P(P)<0.05 vs agomiR-612+pCMV。
图7
图7
miR-612通过直接靶向BRD4降低H522和A549细胞中PI3K/Akt途径的激活。Agomir-612与pCMV-BRD4或pCMV共同转染到H522和A549细胞中。培养72小时后,进行western blot分析,以量化p-PI3K、PI3K和,第页-Akt和Akt表达水平。
图8
图8
miR-612抑制非小细胞肺癌肿瘤生长体内. (A类)移植有agomiR-612或agomiR-NC转染的H522细胞的裸鼠肿瘤异种移植物的代表性图像。(B类)agomiR-612或agomiR-NC组的肿瘤生长曲线*P(P)<0.05 vs agomiR-NC(C类)在移植后4周处死所有裸鼠后,测定肿瘤异种移植物的重量*P(P)<0.05 vs agomiR-NC(D类)对肿瘤异种移植物进行RT-qPCR分析以评估miR-612的表达*P(P)<0.05 vs agomiR-NC(E类)对肿瘤异种移植物进行western blot分析,以确定BRD4、p-PI3K、PI3K,p-Akt和Akt蛋白的表达水平。

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    1. Torre LA、Bray F、Siegel RL、Ferlay J、Lorte-Tieunt J、Jemal A.2012年全球癌症统计。CA癌症临床杂志。2015;第65:87–108页。doi:10.3322/caac.21262-内政部-公共医学
    1. 李霞,张强,樊凯,等。TRPV3的过度表达与非小细胞肺癌的肿瘤进展相关。国际分子科学杂志。2016;17:437.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Harada H,Murayama S。非小细胞肺癌的质子束治疗:最新进展。肺癌。2017;8:141–145. doi:10.2147/LCTT。117647元-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Ettinger DS、Akerley W、Borghaei H等。非小细胞肺癌。《国家康普癌症网络杂志》,2012年;10:1236–1271.-公共医学
    1. Boffetta P,Nyberg F.环境因素对癌症风险的贡献。英国医学牛。2003;68:71–94.-公共医学

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