TP53BP2 decreases cell proliferation and induces autophagy in neuroblastoma cell lines

doi:10.3892/ol.2019.10148

.2019年6月；17(6):4976-4984.

doi:10.3892/ol.2019.10148。 Epub 2019年3月15日。

TP53BP2降低神经母细胞瘤细胞增殖并诱导自噬

易庞¹, 潘莲红², 张永辉¹, 刘桂元^三

附属公司

¹重庆三峡医学院抗肿瘤天然药物工程研究中心，重庆404110，中国。
²重庆大学生物工程学院教育部生物流变学科学与技术重点实验室国家创新与吸引人才“111”基地，重庆400030。
^三重庆三峡医学院附属医院普外科，重庆404110，中国。

PMID： 31186708
预防性维修识别码： PMC6507348型
内政部： 10.3892/ol.2019.0148

TP53BP2降低神经母细胞瘤细胞增殖并诱导自噬

易庞等。 Oncol Lett公司. 2019年6月.

.2019年6月；17(6):4976-4984.

doi:10.3892/ol.2019.10148。 Epub 2019年3月15日。

作者

易庞¹, 潘莲红², 张永辉¹, 刘桂元^三

附属公司

¹重庆三峡医学院抗肿瘤天然药物工程研究中心，重庆404110。
²重庆大学生物工程学院教育部生物流变学科学与技术重点实验室国家创新与吸引人才“111”基地，重庆400030。
^三重庆三峡医学院附属医院普外科，重庆404110，中国。

PMID： 31186708
预防性维修识别码： PMC6507348型
内政部： 10.3892/ol.2019.0148

摘要

肿瘤蛋白p53结合蛋白2（TP53BP2）是p53（ASPP）家族凋亡刺激蛋白的一个成员，先前已被报道与肿瘤发展有关。然而，据我们所知，TP53BP2在神经母细胞瘤中的作用尚未阐明。本研究旨在探讨TP53BP2在神经母细胞瘤增殖和自噬中的作用。实验组使用表达TP53BP2-特异性短发夹RNA（shTP53BP2）的表达载体，对照组使用绿色荧光蛋白短发夹RNA。细胞增殖用MTT法测定，自我更新用软琼脂法评价，轻链3（LC3）II表达水平用western blot和免疫荧光分析检测，自噬相关3同源物（ATG3）、自噬相关性5同源物（ATM5）和自噬关联9同源物（ATA7）用逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测表达水平。基因组学分析表明，TP53BP2的表达与神经母细胞瘤患者的生存率相关。Western blot和RT-qPCR分析表明，TP53BP2可能与神经母细胞瘤有关，因为实验组的增殖能力与对照组相比降低（P<0.001），并且与自噬相关的基因（包括LC3 II）的表达水平也降低。实验组ATG3、ATG5和ATG7增加。总之，神经母细胞瘤患者TP53BP2表达增加可能与生存率低有关，shTP53BP1可能降低神经母细胞癌细胞（包括be（2）C和SK-N-DZ细胞系）的增殖能力。此外，LC3 II、ATG3、ATG5和ATG7表达水平增加，并与TP53BP2上调后自噬率增加相关。

关键词：自噬；神经母细胞瘤；增殖；肿瘤蛋白p53结合蛋白2。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
TP53BP2表达增加与预后不良相关。（A）使用Versteeg数据集的数据对总体生存率进行Kaplan-Meier分析。给出了使用对数秩检验计算的P值。（B）使用SEQC数据集的数据对总体生存率进行Kaplan-Meier分析。给出了使用对数秩检验计算的P值。（C）使用Kocack数据集的数据对总体生存率进行Kaplan-Meier分析。给出了使用对数秩检验计算的P值。（D）采用逆转录定量聚合酶链反应检测了TP53BP2在5种神经母细胞瘤细胞系中的mRNA表达水平。数据表示为平均值±标准偏差。（E）采用western blot分析检测TP53BP2的蛋白表达水平。采用Tubulin作为负荷控制。（F） western blot数据的量化。数据表示为平均值±标准偏差。TP53BP2，肿瘤蛋白p53结合蛋白2。

**图2。**
TP53BP2击倒效率。逆转录定量聚合酶链反应用于测定敲低TP53BP2后（A）BE（2）C和（B）SK-N-DZ细胞中TP53BP2的表达水平。Western blot分析检测TP53BP2敲除后在（C）BE（2）C和（D）SK-N-DZ细胞中的表达水平。以管蛋白为对照。敲低TP53BP2后，关于（E）BE（2）C和（F）SK-N-DZ细胞中TP53BP2表达的蛋白质印迹数据的定量。数据表示为平均值±标准偏差***P<0.001。sh，短发夹RNA；TP53BP2，肿瘤蛋白p53结合蛋白2。

**图3。**
BrdU免疫荧光染色法。BrdU在（A）BE（2）-C和（B）SK-N-DZ细胞中的免疫荧光染色。比例尺，20µm。BrdU-阳性（C）BE（2）-C和（D）SK-N-DZ细胞的定量。数据表示为平均值±标准偏差**P<0.01，***P<0.001。sh，短发夹RNA；TP53BP2，肿瘤蛋白p53结合蛋白2；BrdU，5-溴-2-脱氧尿苷。

**图4。**
TP53BP2敲除抑制细胞增殖并抑制神经母细胞瘤细胞的集落形成。（A） MTT分析用于评估TP53BP2敲除后（A）BE（2）C和（B）SK-N-DZ细胞的增殖。（C）用TP53BP2-敲除BE（2）C和SK-N-DZ细胞进行软琼脂集落分析。（D）软琼脂试验中菌落形成数的量化。在五个选定的字段中对细胞进行计数。数据表示为平均值±标准偏差**P<0.01，***P<0.001。sh，短发夹RNA；TP53BP2，肿瘤蛋白p53结合蛋白2；外径，光密度。

**图5。**
抑制TP53BP2可诱导神经母细胞瘤细胞自噬。（A） TP53BP2敲低BE（2）C和SK-N-DZ细胞中LC3 I和LC3 II的免疫荧光分析。比例尺，10µm。（B） Western blot检测LC3 II在TP53BP2敲低的BE（2）C细胞和对照细胞中的表达。（C） Western blot检测LC3 II在TP53BP2敲低的SK-N-DZ细胞和对照细胞中的表达。BE（2）C细胞中（D）LC3 I和（E）LC3 II表达的蛋白质印迹数据的定量。定量SK-N-DZ细胞中（F）LC3 I和（G）LC3 II表达的western blot数据。采用逆转录定量聚合酶链反应检测TP53BP2-敲除（H）BE（2）C细胞和（I）SK-N-DZ细胞与对照细胞自噬相关基因的表达水平。数据以平均值±标准差表示**P<0.01，***P<0.001。sh，短发夹RNA；TP53BP2，肿瘤蛋白p53结合蛋白2；LC3，轻链3。

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