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.2019年6月9日;11(11):3639-3649.
doi:10.18632/aging.102003。

MORC2促进人胆管癌细胞生长和转移,并受miR-186-5p负调控

附属公司

MORC2促进人胆管癌细胞生长和转移,并受miR-186-5p负调控

廖冠群等。 老龄化(纽约州奥尔巴尼市). .

摘要

微睾家族CW型锌指蛋白2(MORC2)是一种广泛表达的蛋白质,有助于染色质重塑、DNA修复和脂肪生成。然而,其在胆管癌(CCA)中的作用尚不清楚。本研究的目的是研究MORC2的表达谱及其在CCA进展中的潜在功能。结果表明,MORC2在人CCA标本和细胞系中上调。MORC2表达与血清CA19-9水平(P=0.009)、TNM分期(P=0.003)和淋巴结浸润(P=0.004)显著相关。此外,MORC2高表达与5年生存率低相关(P=0.016)。功能实验表明,MORC2敲除可以抑制CCA细胞的增殖、迁移和侵袭体内在体外从机制上讲,我们发现MORC2通过EMT过程促进CCA细胞转移,并通过Akt信号通路促进增殖。此外,miR-186-5p对MORC2负调控。MiR-186-5p通过调节MORC2影响CCA细胞的增殖、迁移和转移。总之,本研究的发现证明了MORC2在CCA肿瘤发生和转移中的致癌作用,并阐明了介导MORC2上调的潜在调节机制,这可能为CCA治疗提供一个新的治疗靶点。

关键词:MORC2;胆管癌;转移;miR-186-5p;增殖。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突:作者声明没有与这份手稿有关的利益冲突。

数字

图1
图1
MORC2在CCA中高表达,与预后不良相关. (一个)在44对CCA样本中测定了MORC2mRNA的表达。(B类)通过免疫组织化学染色证实了队列2配对CCA样本中MORC2的表达。显示了MORC2染色的典型示例。(C类)检测MORC2蛋白在8对CCA肿瘤组织(T)和相应正常组织(N)中的表达。(D类)比较了MORC2蛋白的相关密度,结果显示在散点图中。(E类)进行Kaplan-Meier生存率分析,以评估MORC2对总生存率的影响。(F类——G公司)用RT-qPCR和western blotting检测6株CCA细胞系中MORC2 mRNA和蛋白的表达水平***P<0.001,**P<0.01,*P<0.05。
图2
图2
敲除MORC2抑制CCA细胞增殖在体外. (一个)稳定HuCCT1和RBE细胞中的MORC2蛋白水平。每个细胞株被分为以下三组:sh-NC组(感染Lv-sh-CTRL的细胞)、sh-MORC2-1组(感染了Lv-sh-MORC2-1的细胞)和sh-MORC 2-2组(感染有Lv-sh-MORC2-2的细胞)。(B类——C类)细胞计数试剂盒-8检测MORC2稳定敲除HuCCT1和RBE细胞的细胞增殖;在24、48、72和96h测定细胞活力(D类)CCA细胞平板集落形成的代表性图像和定量克隆形成分析。(E类——F类)通过EdU掺入试验分析转染相应shRNA的CCA细胞的DNA合成。(G公司)western blotting检测p-AKT和AKT在MORC2敲除的HuCCT1和RBE细胞中的表达水平。所有实验均一式三份,**P<0.01,*P<0.05。
图3
图3
MORC2敲除损害CCA细胞的迁移和侵袭能力. (一个)伤口愈合试验用于测定MORC2稳定击倒的HuCCT1和RBE细胞的迁移。(B类)通过跨阱实验研究MORC2稳定敲除HuCCT1和RBE细胞的细胞侵袭性。(C类)western blotting检测并定量MORC2稳定敲除HuCCT1和RBE细胞中的Slug、E-cadherin、N-cadherin和vimentin蛋白水平。所有实验均一式三份,***P<0.001,**P<0.01。
图4
图4
MORC2基因敲除抑制体内肿瘤生长和肝转移。(一个——C类)MORC2表达的敲除显著抑制裸鼠CCA细胞的生长和肿瘤重量(B类)和肿瘤体积(C类)与sh-NC组相比,sh-MORC2组显著降低。(D类)敲除MORC2显著降低体内Ki-67的表达。(E类)将MORC2稳定敲除的HuCCT1细胞注射到脾脏远端(左),建立实验性转移动物模型。显示了每组的代表性图像(右侧)。(F类)显示了两组肝脏表面肿瘤结节的数量**P<0.01。
图5
图5
MORC2是CCA细胞miR-186-5p的直接靶点。(一个)TargetScan和miRanda靶预测算法分析表明,MORC2的3'UTR包含多个miRNAs的假定结合位点。(B类——C类)用miR-186-5p模拟物或其抑制剂转染HuCCT1和RBE细胞系后MORC2表达水平的qRT-PCR分析。(D类)miR-186-5p在邻近正常组织和CCA组织中的相对表达水平。(E类)临床样本中miR-186-5p表达与MORC2表达的相关性。(F类)miR-186-5p在指示的CCA细胞系中的表达水平。(G公司)miR-186-5p与WT或Mut MORC2潜在结合位点的示意图。(H(H)——)将荧光素酶构建物与MORC2的野生型或位点突变体3′-UTR与pre-miR-186-5p或miR-NC融合后,WT或Mut MORC2共转染荧光素素酶活性。所有实验均一式三份,***P<0.001,**P<0.01,*P<0.05。
图6
图6
miR-186-5p参与MORC2介导的CCA细胞生长和转移。(一个)在HuCCT1细胞系中转染miR-186-5p抑制剂和sh-MORC2质粒后CCK-8细胞活性分析。(B类——C类)转染miR-186-5p抑制剂和sh-MORC2质粒后HuCCT1细胞系细胞侵袭潜能的Transwell分析。(D类——E类)Western blot分析转染miR-186-5p抑制剂和sh-MORC2质粒后HuCCT1细胞系中p-AKT、AKT、Slug、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的水平。所有实验均一式三份,**P<0.01,*P<0.05。

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