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.2019年6月1日；20(11):2702.
doi:10.3390/ijms20112702。

扁桃体间充质干细胞向运动神经元样细胞的分化及其在神经肌肉接头形成中的应用

赛阳公园 1, Ji Yeon Kim先生 2, Seoha Myung先生 三, Namhee Jung女士 4, Yeonzi Choi先生 5, 宋楚荣 6
附属公司

扁桃体间充质干细胞向运动神经元样细胞的分化及其在神经肌肉接头形成中的应用

赛阳公园等。 国际分子科学杂志. .

摘要

人扁桃体来源的间充质干细胞（T-MSCs）是新近发现的MSCs，具有MSCs的典型特征，包括向三个胚层分化的能力和良好的增殖能力。它们来源容易，可用于各种疾病状态下的干细胞治疗。我们之前报道过T-MSCs可以分化为骨骼肌细胞和雪旺样细胞；因此，它们是神经肌肉疾病细胞治疗的一个很有希望的候选药物。调节自发行为的运动神经元（MN）受到广泛的MN疾病（MND）的影响，目前尚无有效的治疗方法。我们研究了来源于T-MSCs的MN样细胞（T-MSC-MNCs）的分化潜能，以应用于MNDs的治疗。MN分化后，MN相关标记物的表达，包括胰岛1、HB9/HLXB9（HB9）和胆碱乙酰转移酶（ChAT），与未分化的T-MSCs相比增加。MN分化后，条件培养液中乙酰胆碱的分泌显著增加。我们共培养了T-MSC-MNC和人类骨骼肌细胞，并证实了乙酰胆碱受体簇的存在，这表明神经肌肉接头的形成。这些T-MSC-MNC提供的潜在功能改善可能有助于治疗由基因突变、病毒感染或环境问题引起的MND。

关键词：乙酰胆碱；运动神经元；运动神经元疾病；神经前体细胞；神经肌肉接头；扁桃体来源的间充质干细胞。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
图1
扁桃体衍生间充质干细胞（T-MSCs）向运动神经元（MN）样细胞（MNC）分化的示意图。(A类)未分化的T-MSCs被诱导为(B类)T-MSC衍生神经前体细胞（T-MSC-NPC）。(C类)T-MSC-NPC在MN分化培养基中培养14天，诱导T-MSC-MNC。多能者的表达(D类; 纳米；红色），神经元(E类,F类; Tuj1；绿色），运动神经元标记物(G公司; 小岛1；绿色）和总细胞(D类–G公司; DAPI；蓝色）用免疫细胞化学方法检测每个阶段的细胞。比例尺=100μm。Tuj1，β-III微管蛋白；DAPI，4′，6-二氨基-2-苯基吲哚；RA，维甲酸；嘘，声音刺猬；脑源性神经营养因子；NGF，神经生长因子。
图2
图2
从T-MSC衍生MN样细胞的示意图。(A类–D类)T-MSC-MNC分化过程中胰岛1、HB9和ChAT表达的时序RT-qPCR分析(n个= 3). 数据表示为至少三个实验的平均值±SEM。一=T-MSC；b条=2周分化；c（c）=3周分化；d日=4周分化。使用单向方差分析进行统计分析(*第页< 0.05; **第页< 0.01; **第页< 0.001). (E类–G公司)检测MN标记物胰岛1的双重免疫染色分析(E类)，HB9(F类)、和ChAT(G公司)MN分化2周后加Tuj1。DAPI染色（蓝色）、神经元特异性β-微管蛋白III类（Tuj1；绿色）、胰岛1（红色）、同源异型盒HB9（HB9；红色）的免疫染色。白色表示DAPI、Tuj1和Islet 1或HB9的合并图像；黄色表示Tuj1和ChAT的合并图像。比例尺=100μm。
图3
图3
MN标记物在分化为MN样细胞过程中的检测。(A类)T-MSC-MNCs与T-MSC分化过程中胰岛1、HB9和ChAT蛋白表达的Western blot分析(n个= 3). 胰岛1的表达(B类)，HB9(C类)和ChAT(D类)使用ImageJ软件通过密度测定法对蛋白质进行定量。将蛋白质表达水平标准化为GAPDH。数据表示为至少三个实验的平均值±SEM。T-MSC（a）；NPC（b）=神经前体细胞；MNC2w（c）=分化2周；MNC3w（d）=分化3周；MNC4w（e）=分化4周。使用单向方差分析进行统计分析(***第页< 0.001).
图4
图4
T-MSCs分化为T-MSC-MNC后功能性MN相关因子分泌的变化。(A类)分化为MNCs过程中的相对乙酰胆碱分泌(n个= 3). (B类)RT-qPCR评估T-MSCs-MNCs神经营养因子的相对表达(n个= 3). GAPDH作为负载控制。数据表示为平均值±SEM。RT-qPCR实验中使用了非三酸盐mRNA样本。MNC1w=分化1周；MNC2w=2周分化；MNC3w=3周分化；MNC4w=4周分化*第页< 0.05; **第页< 0.01; ***第页< 0.001.
图5
图5
共培养中神经肌肉接头的形成。运动神经元样细胞（MNCs；B类)来源于扁桃体衍生的间充质干细胞（T-MSCs；A类)与人骨骼肌细胞（hSKMC）衍生的肌管共培养(C类)倒置显微镜下观察（×200）。共培养14天后(D类)通过DAPI（蓝色）染色、β-III微管蛋白（Tuj1；绿色）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA；蓝色）免疫染色以及Alexa555结合α-银杏毒素（α-BTX；红色）标记检测乙酰胆碱受体（AchR）聚集(E类,F类). 黄色荧光表示α-BTX和Tuj1的合并图像，白色荧光表示α-BTX、Tuj1和α-SMA的合并图像。黑色箭头=T-MSC-MNC。比例尺=100μm。
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