跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2019年4月13日；9(9):2424-2438.
doi:10.7150/thno.30941。 2019年eCollection。

EBV（LMP1）诱导的代谢重编程通过细胞的高甲基化抑制坏死性下垂独立电源3发起人

冯石 1 2 三, Min Zhou女士 1 2 三, 李尚 4, 钱钱杜 1 2 三, 李月硕 1 2 三, 谢龙龙 1 2 三, 刘晓兰 1 2 三, 闵唐 1 2 三, 罗向建 1 2 三, 贾凡 5, Jian Zhou公司 5, 羌高 5, 邱双剑 5, 吴伟忠 5, 张欣（Xin Zhang） 6, 安·M·博德 7, 亚曹 1 2 三 8 9
附属公司

EBV（LMP1）诱导的代谢重编程通过细胞的高甲基化抑制坏死性下垂独立电源3发起人

冯石等。 治疗诊断科技. .

摘要

EBV感染是公认的致癌的表观遗传学驱动因素。我们之前已经证明EBV可以保护癌细胞免受TNF诱导的坏死。本研究旨在探讨EBV感染的癌细胞逃避RIP3依赖性坏死的表观遗传机制。方法：来自TCGA数据库的数据用于评估独立电源3启动子甲基化及其表达。采用Western blotting、real-time PCR和免疫化学方法研究LMP1和RIP3在细胞株和鼻咽癌组织中的关系。使用BSP、MSP和hMeDIP检测甲基化水平。通过细胞活力测定、p-MLKL和Sytox-Green染色检测细胞凋亡诱导。结果:独立电源3启动子高甲基化分别是HNSCC患者无病生存率和总生存率较差的独立预后因素。RIP3在NPC（HNSCC的一种亚型）中下调。EBV（LMP1）通过超甲基化抑制RIP3的表达独立电源3发起人。鼻咽癌组织中RIP3蛋白的表达与LMP1的表达呈负相关。恢复EBV（LMP1）阳性细胞中RIP3的表达可抑制异种移植瘤的生长。EBV（LMP1）阳性细胞中富马酸的积累和α-KG的减少导致了由于TET失活导致的RIP3沉默。FH活性降低导致富马酸积累，这可能与其乙酰化有关。富马酸孵育细胞可保护NPC细胞免受TNF诱导的坏死。结论这些结果证明了EBV（LMP1）相关代谢产物变化通过DNA甲基化抑制坏死信号传导的途径，并阐明了EBV相关致癌的机制，这可能为癌症诊断和治疗提供新的选择。

关键词：EB病毒；富马酸盐。；鼻咽癌；坏死；受体相互作用蛋白3。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争利益：作者声明不存在竞争利益。

数字

图1
图1
Kaplan-Meier分析依据独立电源3HNSCC患者启动子甲基化和mRNA表达状态。A、 无病生存期（左）和总生存期（右）分析依据独立电源3mRNA表达。HNSCC患者分为两组：预后良好（阳性表达独立电源3mRNA）和不良预后独立电源3mRNA；“-”，否定；“+”，正数）。B、 无病生存期（左）和总生存期（右）分析依据独立电源3启动子甲基化。HNSCC患者分为两组：预后良好（未甲基化独立电源3启动子）和不良预后（甲基化独立电源3发起人）。U、 非甲基化；M、 甲基化。C、 根据以下组合进行无病生存期（左）和总生存期（右）分析撕裂3启动子甲基化和mRNA表达。这种组合可以比单一因素更准确地对HNSCC患者进行分层。
图2
图2
RIP3表达与EBV（LMP1）呈负相关，恢复RIP3的表达可抑制EBV（LMP1）介导的肿瘤发生。A、 RIP3的代表性IHC照片。与NP组织相比，RIP3在NPC组织中表达较低。NP：鼻咽炎；NPC：鼻咽癌。B、 Western blot分析检测到EBV（LMP1）阳性细胞中RIP3蛋白表达下调。EBV-未感染/感染细胞：NP460hTERT/NP460hTERT-EBV（永生化人鼻咽上皮细胞）、HK1/HK1-EBV（分化的鼻咽癌细胞）、C666-1（未分化的鼻咽癌细胞携带EBV）。LMP1相关细胞：HK1-Vec/HK1-LMP1（用LMP1-过表达载体转染HK1细胞）、C666-1/C666-1 shLMP1（用shLMP1稳定转染的C666-1细胞）。C、，独立电源3RT-PCR检测到EBV（LMP1）阳性细胞中mRNA表达下调（列=平均值；栏=S.D.；n=3；**，第页< 0.01). D、 鼻咽癌组织连续切片中LMP1和RIP3表达的代表性IHC照片。E、 根据LMP1在鼻咽癌组织中的表达计算RIP3的表达。F、 各组C666-1异种移植物的肿瘤生长曲线显示。数据表示为平均值±S.D.（n=5***第页< 0.001). G、 实验结束时测量肿瘤重量。数据表示为平均值±S.D.（n=5；***p<0.001）。
图3
图3
在EBV（LMP1）阳性细胞系中，RIP3被甲基化沉默。A、 中CpG位点的甲基化水平独立电源3BSP检测到NP460hTERT-EBV细胞TSS附近的启动子（+164到+404）高于NP460hPERT细胞（左和中）。结果具有统计学意义（右）。Dot，单个CpG岛（***，第页< 0.001). B、 甲基化水平独立电源3HK1-EBV细胞的启动子显著高于HK1细胞（同上）。C、 启动子甲基化独立电源3EBV（LMP1）-经MSP验证的阳性/阴性细胞系（M，甲基化；U，非甲基化。）。D、 使用5-氮杂-dC（10μM，4天）处理，甲基化水平独立电源3MSP检测到启动子下调（M，甲基化；U，非甲基化）。E、 Western blotting检测到，经5-氮杂-dC（10μM）处理的EBV感染细胞中RIP3蛋白以时间依赖性方式恢复。F、 Western blotting检测到，经5-氮杂-dC（10μM，4天）处理的LMP1阳性细胞中RIP3蛋白恢复。
图4
图4
EBV（LMP1）调节TET酶活性和代谢变化。A、 EBV感染细胞（左侧和中部）中TET 5mC-羟化酶活性下调。C666-1中LMP1表达的敲除恢复了TET活性（右；列=平均值；栏=S.D.；n=3；**，第页< 0.01). B、 羟甲基化DNA免疫沉淀（hMeDIP）分析测定独立电源3发起人。EBV感染细胞（左侧和中部）中的5-hmC水平降低，C666-1中LMP1表达的下调升高了5-hmC的水平（右侧；列=平均值；栏=S.D.；n=3；**，第页< 0.01). C、 富马酸盐在EBV感染的细胞中积累（左和中）。LMP1敲除细胞中富马酸水平降低（右；列=平均值；条=S.D.；n=3；**，第页< 0.01). D、 EBV感染细胞（左侧和中部）的α-KG水平降低，LMP1-敲除细胞（右侧；列=平均值；栏=S.D.；n=3；**，第页< 0.01).
图5
图5
EBV（LMP1）相关代谢物变化调节TET活性和RIP3表达。A、 用DMF（50μM）处理指定时间的NP460hTERT（左）和HK1（右）细胞中RIP3表达的Western blot分析。DMF治疗以时间依赖的方式降低RIP3的蛋白表达。B、 DMF（50μM，4天）处理增加了独立电源3MSP检测到的启动子（M，甲基化；U，非甲基化）。用DMSO或DMF处理C-D、NP460hTERT（C）和HK1（D）细胞（50μM，4天）。信使核糖核酸的表达独立电源3（左）、TET 5mC-羟化酶活性水平（中）和5-hmC水平独立电源3DMF治疗组启动子（右）减少（列=平均值；栏=S.D.；n=3；**，第页< 0.01). 用二甲基亚砜或辛基-α-KG（1 mM，24小时）处理E-F、NP460hTERT-EBV（E）和HK1-EBV（F）细胞。mRNA表达独立电源3（左）、TET 5mC-羟化酶活性水平（中）和5-hmC水平独立电源3α-KG治疗组的启动子（右）增加（列=平均值；栏=S.D.；n=3；*，第页< 0.05; **,第页< 0.01).
图6
图6
EBV（LMP1）抑制FH活性。A、 EBV感染细胞（左侧和中部）FH活性下降，LMP1敲除细胞（右侧；列=平均值；栏=S.D.；n=3；**，第页< 0.01). B、 用免疫沉淀法（IP）检测内源性FH，并用FH和乙酰-Lys（Ac-K）抗体进行检测。整个细胞提取物用作输入。C-D，用5μM TSA或5 mM NAM处理细胞16小时。免疫沉淀内源性FH并用Western blotting（C）进行分析。还检测到FH活性（D；列=平均值；栏=S.D.；n=3；**，第页< 0.01).
图7
图7
富马酸抑制T/S/Z诱导的坏死。NP460hTERT和HK1细胞未经处理或用DMF预处理（50μM，4天），然后用TNF-α（T，100ng/ml）/Smac模拟物（S，5μM）/z-VAD-fmk（z，20μM）处理24小时（NP460hERT）或48小时（HK1）。A、 细胞存活率由MTS测定（列=平均值；栏=S.D.；n=3；**，第页< 0.01. B、 RIP3、p-MLKL和MLKL表达的Western blot分析。C、 Sytox Green荧光染色（左）检测细胞膜完整性。结果具有统计学意义（右；列=平均值；条=S.D.；n=3；*，第页< 0.05; **,第页< 0.01).
图8
图8
EBV诱导RIP3表观遗传重编程的示意图。EBV（LMP1）表达引起的代谢重编程通过细胞的高甲基化抑制坏死凋亡信号独立电源3启动子，揭示EBV相关致癌机制。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

  • 增强剂感染导致EB病毒阳性鼻咽癌中非活性B区的致瘤激活。
    Mizokami H、Okabe A、Choudhary R、Mima M、Saeda K、Fukuyo M、Rahmutulla B、Seki M、Goh BC、Kondo S、Dochi H、Moriyama-Kita M、Misawa K、Hanazawa T、Tan P、Yoshizaki T、Fullwood MJ、Kaneda A。 Mizokami H等人。 EBioMedicine公司。2024年4月；102:1005057。doi:10.1016/j.ebiom.2024.105057。Epub 2024年3月14日。 EBioMedicine公司。2024 采购管理信息：38490101 免费PMC文章。
  • EBV相关上皮癌的发病机制和治疗意义。
    Low YH、Loh CJL、Peh DYY、Chu AJM、Han S、Toh HC。 Low YH等人。 前Oncol。2023年10月2日；13:1202117. doi:10.3389/fonc.2023.1202117。eCollection 2023年。 前Oncol。2023 采购管理信息：37901329 免费PMC文章。 审查。
  • EB病毒在鼻咽癌中的作用。
    Su ZY、Siak PY、Leong CO、Cheah SC。 苏志勇等。 前微生物。2023年2月9日；14:1116143. doi:10.3389/fmicb.2023.1116143。eCollection 2023年。 前微生物。2023 采购管理信息：36846758 免费PMC文章。 审查。
  • LMP1通过持续的表观遗传修饰和PGC1β上调介导肿瘤发生。
    陈S，张平，冯J，李锐，陈J，郑伟伟，张H，姚P。 Chen S等。 Oncol Rep.2023年3月；49(3):53. doi:10.3892/或.2023.8490。Epub 2023年2月3日。 Oncol报告2023。 采购管理信息：36734290 免费PMC文章。
  • 调节性细胞死亡对头颈部鳞癌发生发展的影响。
    薛毅，江X，王杰，宗毅，袁Z，苗S，毛X。 薛毅等。 生物标志研究，2023年1月5日；11(1):2. doi:10.1186/s40364-022-00433-w。 生物标志研究2023。 采购管理信息：36600313 免费PMC文章。 审查。
查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. He S，Wang L，Miao L，Wang T，Du F，Zhao L.等。受体相互作用蛋白激酶-3决定细胞对TNF-α的坏死反应。单元格。2009;137:1100–11.-公共医学
    1. Zhang DW、Shao J、Lin J、Zhang N、Lu BJ和Lin SC等。RIP3是一种能量代谢调节剂，可将TNF诱导的细胞死亡从凋亡转变为坏死。科学。2009;325:332–6.-公共医学
    1. Koo GB、Morgan MJ、Lee DG、Kim WJ、Yoon JH、Koo JS。等。癌症中RIP3表达的甲基化依赖性缺失抑制了化疗引起的程序性坏死。细胞研究2015；25:707–25.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. 丹氏疟原虫病毒与细胞死亡的多样性。Virol年度回顾。2016;3:533–53.-公共医学
    1. Liu X，Li Y，Peng S，Yu X，李伟，Shi F.等。EB病毒编码的潜伏膜蛋白1通过靶向RIPK1/3泛素化抑制坏死。细胞死亡疾病。2018;9:53.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语