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.2019年4月2:11:2565-2578。
doi:10.2147/CMAR。S190332。 2019年eCollection。

NECTIN4促进甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移和侵袭，并通过激活AKT触发EMT

如天浩 1, 陈政 1, 吴振勇 1, 二姐侠 1, 周晓芬 1, 芮大全 1, 张晓华 1
附属公司

NECTIN4促进甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移和侵袭，并通过激活AKT触发EMT

如天浩等。 癌症管理研究. .

勘误表in

摘要

乳头状甲状腺癌（PTC）是最常见的恶性甲状腺癌类型，但其分子机制尚不清楚。为了更好地了解PTC的肿瘤发生和进展，我们对配对PTC和正常甲状腺组织的全转录重测序进行了综合分析。与匹配的正常组织相比，甲状腺癌中的坏死细胞粘附分子4（NECTIN4）显著过度表达。我们还评估了癌症基因组图谱数据库中NECTIN4的表达水平与PTC临床病理特征之间的关系，结果表明，上调NECTIN4与淋巴结转移有关(P（P）<0.001）和肿瘤大小(P（P）=0.017). 利用PTC细胞系TPC-1和KTC-1研究了NECTIN4的生物学功能。体外实验表明，NECTIN4下调显著抑制PTC细胞系的集落形成、增殖、迁移和侵袭。NECTIN4可以通过PI3K/AKT途径调节上皮-间充质转化相关蛋白的表达，而AKT磷酸化激活剂SC79可以逆转si-RNA的敲除效应。此外，在使用AKT抑制剂（LY 294002）后，我们发现SiRNA与AKT抑制剂具有类似的效果。综上所述，目前的研究表明，NECTIN4在PTC的肿瘤发生和转移中具有重要的生物学意义，可能是该疾病的潜在治疗靶点。

关键词：AKT；NECTIN4；PTC公司。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者报告说，在这项工作中没有利益冲突。

数字

图1
图1
19对肿瘤和邻近正常组织的全转录重测序热图。
图2
图2
NECTIN4在PTC中上调。笔记：(A类)我们队列中PTC样本中NECTIN4的表达显著上调（图1B，P（P）<0.0001). (B类)在TCGA队列中，PTC样本中NECTIN4的表达显著上调。（图1C，P（P）<0.001). (C类)通过RT-qPCR检测NECTIN4的相对表达（与GAPDH基因相比）。与正常甲状腺细胞系相比，TPC-1和KTC细胞系NECTIN4表达较高，而BCPAP表达较低*P（P）<0.05, ***P（P）使用学生的t吨-测试。缩写：甲状腺乳头状癌；RT-qPCR、逆转录定量PCR；TCGA，癌症基因组图谱。
图3
图3
NECTIN4基因敲低影响甲状腺癌细胞系的增殖。笔记：(A类–B类)通过qRT-PCR和WB研究NECTIN4（与GAPDH基因相比）在TPC1和KTC-1中的相对表达。与相应的Si-NC组相比，NECTIN4在Si-RNA1和Si-RNA2组中的表达较低。(C类)NECTIN4和si-NECTIN4细胞的集落形成。(D类–E类)将转染Si-RNA或Si-NC的TPC1和KTC-1细胞株在96 well平板中培养1-4天，并使用CCK-8测定细胞增殖。Si-RNA1和Si-RNA2转染甲状腺细胞后，细胞增殖受到明显抑制。
图4
图4
NECTIN4基因敲低在体外诱导PTC细胞系的细胞凋亡。笔记：(A类和B类)采用Annexin V/PI法分析转染Si-NC、Si-RNA1或Si-RNA2的TPC1和KTC-1细胞系。敲除NECTIN4可增加甲状腺癌细胞的凋亡细胞死亡。这些列表示来自至少三个独立实验的死亡细胞数的平均值*P（P）<0.05, **P（P）<0.01和***P（P）<0.001，与使用Student’st吨-测试。
图5
图5
NECTIN4在体外调节甲状腺乳头状癌细胞系的迁移和侵袭能力。笔记：(A类和C类)NECTIN4表达下调的细胞及其相应的对照细胞的跨阱迁移和侵袭分析。(B类和D类)迁移和入侵分析的定量结果。从五个随机选择的区域手动计数染色细胞，并与观察到的细胞增殖进行标准化*P（P）<0.05; **P（P）<0.01; ***P（P）与使用Student’st吨-测试。放大倍数为×40。
图6
图6
NECTIN4基因调节上皮-间质转化。笔记：(A类)通过western blot研究NECTIN4表达对TPC1和KTC-1（转染si-RNA1、si-RNA 2或si-NC）中E-cadherin、N-cadherin，Vimentin和EZH2水平的影响。(B类)通过western blot研究NECTIN4表达对细胞裂解物TPC1和KTC-1膜组分中E-cadherin和N-cadherin水平的影响。(C类)质膜组分中波形蛋白、N-钙粘蛋白和E-钙粘蛋白的免疫荧光图像分析。放大倍数为×40。
图7
图7
激活AKT可以逆转si-RNA击倒效应。笔记：(A类)NECTIN4表达对NECTIN4AKT水平的影响，对-western blot检测TPC1和KTC-1中的AKT（转染si-RNA1、si-RNA2或si-NC）。(B类和C类)NECTIN4表达下调组、对照组和SC79活化组细胞的跨阱迁移。SC79的浓度为10 mM，所有试剂都溶解在DMSO中。迁移分析的定量结果。(D类)下调NECTIN4表达组、对照细胞组和SC79活化细胞组在96个平板中培养1-4天，并使用CCK-8测定细胞增殖。(E类和F类)具有下调的NECTIN4表达组、对照细胞组和LY294002组的细胞中的Transwell迁移抑制细胞。SC79的浓度为25 mM，所有试剂都溶解在DMSO中。迁移分析的定量结果。(G公司)下调NECTIN4表达组、对照细胞组和LY294002抑制细胞组在96周培养板中培养1-4天，并使用CCK-8测定细胞增殖。放大倍数为×40。
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参考文献

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