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.2019年4月23:12:1297-1310。
doi:10.2147/JPR。S195117。 2019年电子采集。

大鼠脊髓lncRNA Malat1表达减少通过增加臂丛撕脱伤后神经元的兴奋性导致神经性疼痛

崇猛 1 2 三, 荀阳 1 2 三, 刘玉洲 1 2 三, 周英杰 1 2 三, 景睿 1 2 三, 李申倩 1 2 三, 策旭 1 2 三, 永清庄 4, 杰劳 1 2 三, 赵欣（音译） 1 2 三
附属公司

大鼠脊髓lncRNA Malat1表达减少通过增加臂丛撕脱伤后神经元的兴奋性导致神经性疼痛

冲猛（Chong Meng）等。 疼痛研究杂志. .

摘要

目的：神经病理性疼痛（NP）因其复杂的发病机制而成为一个具有挑战性的临床问题。在我们之前使用微阵列的研究中，我们发现臂丛撕脱伤后NP大鼠脊髓中lncRNA Malat1的水平降低，但其对NP的贡献尚不清楚。本研究旨在探讨其在NP发病机制中的作用。方法：在完全臂丛神经撕脱伤大鼠NP模型中，采集脊髓，用荧光原位杂交（FISH）检测Malat1的空间表达，并用qRT-PCR证实Malat1定量表达。在原代培养的神经元中，Malat1的表达受到腺病毒的干扰。多电极阵列检测神经元自发电活动，TUNEL法检测神经元凋亡。用钙成像方法分析细胞内钙浓度的变化。结果：用qRT-PCR证实Malat1表达降低，并且在脊髓神经元的细胞质中发现Malat1，但在胶质细胞中未发现。在体外，Malat1的减少导致神经元自发电活动频率增加，但对神经元凋亡没有影响。进一步分析表明，在谷氨酸刺激期间，Malat1表达下调的神经元细胞内钙浓度的变化显著大于正常神经元。结论：Malat1表达减少可能通过调节钙流量增加脊髓神经元的兴奋性而诱导NP。

关键词：Malat1；臂丛撕脱伤；lncRNA；多电极阵列；神经元；神经病理性疼痛；脊髓。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者报告说，在这项工作中没有利益冲突。

数字

图S1
图S1
大鼠Malat1全长cDNA序列。它覆盖了2.70 kb，从208430190到208427488（NCBI 4.1，2007年8月），位于1号染色体的反向链上(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ieb/research/acembly/av.cgi？db=rat&c=Gene&l=stawflu).
图S3
图S3
RNA干扰验证。(A类)将腺病毒载体转染神经元并表达绿色荧光蛋白。比例尺=200μm。(B类)使用相差显微镜观察到相同的视野。比例尺=200μm。(C类)RNA干扰后Malat1表达的qRT-PCR结果。up组显示Malat1上调腺病毒。在down1、down2和down3组中显示了三种Malat1下调的腺病毒。空白组使用无干扰序列的腺病毒进行转移。对照组为正常神经元。下调的腺病毒可有效降低Malat1的表达。
图1
图1
机械和冷痛阈测量。(A类)von Frey测试的机械阈值变化（n=8*第页<0.05，配对学生t吨-测试）。(B类)在左前爪的中表面喷射丙酮，测试冷痛觉超敏反应的变化（n=8*第页<0.05，Wilcoxon符号秩检验）。
图2
图2
malat1表达的定量测试。（A） 臂丛神经撕脱伤后脊髓背角malat1表达的实时定量PCR分析，以GAPDH为参考基因（n=6*第页<0.01，配对学生t吨-测试）。(B类)NP组和nNP组大鼠同侧与对侧脊髓背角IOD比值的定量分析（n=6**第页<0.05，配对学生t吨-测试）。(C类)NP大鼠同侧和对侧脊髓背角荧光原位杂交（比例尺=200μm）。
图3
图3
苹果酸1在大鼠脊髓中的空间分布。神经元（NeuN，上图）、星形胶质细胞（GFAP，上图）和小胶质细胞（Iba-1，下图）的生物标志物用绿色荧光标记。Malat1标记为红色荧光。核被标记为蓝色荧光。只有NeuN-阳性细胞被双重标记（白色箭头）。比例尺=50μm。
图4
图4
TUNEL检测malat1失调后神经元凋亡。(A类)阳性对照。(B类)阴性对照。(C类)Malat1上调组。(D类)Malat1下调组。(E类)空白组。(F类)各组神经元凋亡率的比较。神经元凋亡标记为棕色。上调组和下调组之间的差异不显著（n=6，学生t吨测试）。比例尺=200μm。
图S2
图S2
体外神经元尼斯莱斯染色和免疫荧光试验。(A类)尼斯莱斯神经元染色。典型的神经元显示为棕色三角形。(B类)神经元免疫荧光染色。使用生物标记物微管相关蛋白-2（MAP-2）将神经元标记为绿色。细胞核被DAPI染成蓝色。比例尺=200μm。
图5
图5
神经元自发电的MEA分析。（A） MEA电极上的神经元生长。比例尺=200μm。(B类)以空白阵列作为阴性对照，记录培养第7、14、21天正常神经元的自发电。(C类)第14天自发棘波频率记录的比较。Malat1下调的神经元被标记为下调组。Malat1上调的神经元被标记为上调组。正常神经元在对照组。空白组无神经元。malat1下调组和上调组的峰频率差异显著(*第页<0.0001，学生t吨测试）。
图6
图6
通过钙成像方法分析神经元对谷氨酸刺激的反应。R分数是340 nm和380 nm激发下的荧光强度之比。(A类)谷氨酸刺激下正常神经元R评分曲线。(B类)各组R评分曲线幅度的比较。Malat1在上调组上调，在下调组下调。空白组神经元正常。Malat1下调组神经元的反应性显著高于空白组(*第页=0.05，n=3，Mann–Whitney U检验）。
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