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.2019年4月4日4:12:2439-2449。
doi:10.2147/OTT。S196851。 2019年eCollection。

分化拮抗非蛋白编码RNA通过靶向miR-216a/LGR5轴和PI3K/AKT信号通路调节胶质瘤细胞的增殖、迁移和血管生成

王伟（音译） 1, 李玉莲 2, 青海马 三, 海城燕 三, 苏乌云 1
附属公司

分化拮抗非蛋白编码RNA通过靶向miR-216a/LGR5轴和PI3K/AKT信号通路调节胶质瘤细胞的增殖、迁移和血管生成

王伟（音译）等。 Onco目标Ther. .

摘要

目的：DANCR在各种类型的癌症中发挥着重要作用。然而，其在胶质瘤中的作用尚不清楚。在本研究中，我们旨在探讨DANCR在胶质瘤中作用的机制。方法：用qRT-PCR检测DANCR的表达，用western blotting检测LGR5、PI3K、AKT和磷酸化AKT（p-AKT）的表达。miR-216a和DANCR的结合通过荧光素酶报告分析进行定量。分别用MTT、流式细胞术、Transwell和试管形成法检测胶质瘤细胞的增殖、凋亡和细胞周期、迁移和侵袭以及血管生成。结果：DANCR在胶质瘤细胞中的表达显著高于正常人星形胶质细胞。沉默DANCR可抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和血管生成，促进细胞凋亡，阻断G1/S过渡期的细胞周期，并降低LGR5、PI3K和p-AKT的表达。我们确定miR-216a为DANCR的直接靶点。胶质瘤细胞中DANCR的沉默增加了miR-216a的表达。此外，miR-216a的抑制增加了转染DANCR靶向siRNA的胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和血管生成，并抑制了其凋亡。此外，miR-216a抑制减弱了DANCR沉默引起的G1/S转换抑制。此外，miR-216a的抑制增加了转染DANCR靶向siRNA的胶质瘤细胞中LGR5、PI3K、AKT和p-AKT的积累。结论：DANCR通过靶向miR-216a/LGR5轴和PI3K/AKT信号通路调节生长和转移。

关键词：丹麦；血管生成；胶质瘤；入侵；miR-216a；迁移。

PubMed免责声明

利益冲突声明

其他作者报告说，在这项工作中没有利益冲突。

数字

图8
图8
不同通路的表达和抑制示意图。
图1
图1
分化拮抗非蛋白编码RNA（DANCR）在胶质瘤细胞中的高表达。注意事项：采用定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）分析测定正常人星形胶质细胞（NHAs）和胶质瘤细胞系U-87 MG、U-118 MG、U 254 MG和SHG-44细胞中DANCR的mRNA表达水平。DANCR在胶质瘤细胞中的内源性表达高于NHAs。数据显示为平均值±SD***P（P）与NHA相比，<0.001。
图2
图2
胶质瘤细胞分化拮抗非蛋白编码RNA（DANCR）的内源性表达水平。注意事项：通过定量逆转录PCR（qRT-PCR）分析检测转染不同浓度（20 nM、50 nM和100 nM）阴性对照（si-NC）、si-DANCR-1、si-DAN CR-2和si-DANCR-3的U-251 MG细胞(A类). 随后，通过qRT-PCR分析转染si-DANCR-2的U251MG和SHG-44细胞中DANCR的表达水平(B类). 数据显示为平均值±SD***P（P）<0.001 vs si-NC。
图3
图3
分化拮抗非蛋白编码RNA（DANCR）沉默对增殖、凋亡和细胞周期的影响。注意事项：(A）DANCR沉默抑制胶质瘤细胞增殖。(B类)DANCR的沉默增加了神经胶质瘤细胞的凋亡。条形图表示每组凋亡细胞的数量。(C类)DANCR的沉默阻断了胶质瘤细胞的G1/S转变。(D类)细胞周期分析的代表性图像。条形图表示每组G1、S和G2细胞的数量。(E类)凋亡分析的代表性图像。数据显示为平均值±SD***P（P）<0.001 vs si-NC。
图4
图4
抑制分化拮抗非蛋白编码RNA（DANCR）抑制胶质瘤细胞的迁移、侵袭和血管生成。注意事项：(A）抑制DANCR可减少胶质瘤细胞的迁移（200×）。(B类)DANCR抑制减少胶质瘤细胞侵袭（200×）。(C类)DANCR的抑制降低了神经胶质瘤细胞的血管生成（100×）***P（P）<0.001 vs si-NC。
图5
图5
miR-216a是胶质瘤细胞分化拮抗非蛋白编码RNA（DANCR）的直接靶点。注意事项：(A类)DANCR中miR-216a结合位点和含有DANCR的突变荧光素酶报告子构建物。(B类)含有DANCR的荧光素酶报告子结构示意图。(C类)转染psiCHECK-DANCR-wt和阴性对照（NC）模拟物或miR-216a模拟物的胶质瘤细胞中的荧光素酶活性**P（P）<0.01. (D类)转染psiCHECK-DANCR突变体和NC或miR-216a模拟物的胶质瘤细胞中的荧光素酶活性。(E类)miR-216a在正常人星形胶质细胞（NHAs）和胶质瘤细胞系U-87 MG、U-118 MG、U 254 MG和SHG-44中的表达**P（P）<0.01, ***P（P）<0.001 vs NHA。(F类)DANCR沉默增加了胶质瘤细胞中miR-216a的表达***P（P）<0.001。(克)抑制DANCR可降低胶质瘤细胞中LGR5、PI3K和p-AKT的表达水平。
图6
图6
miR-216a抑制会削弱分化拮抗非蛋白编码RNA（DANCR）沉默对胶质瘤细胞迁移、侵袭和血管生成的抑制作用。注意事项：(A类)转染si-DANCR-2和阴性对照（NC）或miR-216a抑制剂的胶质瘤细胞中miR-216 a的表达。(B类)miR-216a抑制增加了转染si-DANCR-2的胶质瘤细胞的迁移。(C类)miR-216a抑制增加了转染si-DANCR-2的胶质瘤细胞的侵袭性。(D类)miR-216a抑制增加了转染si-DANCR-2的胶质瘤细胞的血管生成。E、 miR-216a抑制增加了转染si-DANCR-2的胶质瘤细胞中LGR5、PI3K和p-AKT的表达水平***P（P）<0.001.
图7
图7
miR-216a抑制可降低分化拮抗非蛋白编码RNA（DANCR）沉默对增殖、凋亡和细胞周期的影响。注意事项：(A类)miR-216a抑制减弱了si-DANCR-2对胶质瘤细胞增殖的抑制作用。(B类)miR-216a的抑制损害了si-DANCR-2对细胞凋亡的促进作用。条形图表示每组凋亡细胞的数量。(C类)miR-216a抑制减弱了si-DANCR-2对细胞周期G1/S转变的阻断作用。条形图表示每组G1、S和G2细胞的数量。(D类)细胞凋亡的典型图像。(E类)细胞周期分析的代表性图像。数据显示为平均值±SD***P（P）<0.001 vs si-NC。
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