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.2019年6月;17(6):4693-4702.
doi:10.3892/etm.2019.7470。 Epub 2019年4月5日。

MicroRNA-153通过直接靶向RUNX2抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化

附属公司

MicroRNA-153通过直接靶向RUNX2抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化

左中坤等。 实验治疗学. 2019年6月.

摘要

许多microRNAs(miRNAs)参与包括乳腺癌在内的多种人类癌症的发展和恶性进展。miRNA-153(miR-153)在乳腺癌进展中的潜在调控机制仍不清楚。本研究表明,与邻近的健康组织样本和正常人乳腺细胞系MCF-10A相比,乳腺癌组织样本和细胞系中miR-153的表达水平显著降低。此外,miR-153的低表达与乳腺癌患者的晚期临床分期和转移有关。然而,没有发现与年龄、亚型或分化有关。此外,与miR-153高表达的乳腺癌患者相比,低表达的乳腺肿瘤患者预后较差。miR-153的过度表达降低了乳腺癌SK-BR-3和BT-549细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)。荧光素酶报告基因检测证实Runt-related transcription factor 2(RUNX2)是SK-BR-3和BT-549细胞中miR-153的靶基因,在乳腺癌中显著上调。RUNX2的高表达与乳腺癌患者的晚期临床分期以及远处和淋巴结转移相关。然而,没有发现与年龄、亚型或分化有关。此外,在乳腺癌组织中观察到miR-153和RUNX2 mRNA表达水平呈负相关。RUNX2过表达降低了miR-153对SK-BR-3和BT-549细胞增殖、迁移、侵袭和EMT的抑制作用。本研究表明,miR-153可能通过直接靶向RUNX2在乳腺肿瘤生长和转移中发挥作用。miR-153/RUNX2轴可能被用作乳腺癌治疗的潜在治疗靶点。

关键词:乳腺癌;转移;微RNA;runt-related转录因子2。

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数字

图1。
图1。
乳腺癌中miR-153的下调。miR-153的mRNA表达水平通过逆转录定量聚合酶链反应使用来自乳腺癌患者的组织样本来测定。(A) 与邻近的健康组织相比,乳腺癌组织中miR-153的表达水平下调**P<0.01 vs.相邻。(B) 与miR-153高表达的乳腺癌患者相比,低表达的乳腺肿瘤患者的生存时间更短。(C) 与正常人乳腺癌细胞MCF-10A相比,人类乳腺癌细胞系中miR-153的表达水平下调**与MCF-10A相比P<0.01。邻近的健康组织;乳腺癌,原发性乳腺癌组织;MCF-10A,正常人乳腺上皮细胞系;BT-549、MCF-7、MDA-MB-453、MDA-MB-231和SK-BR-3,人类乳腺癌细胞系;miR,microRNA。
图2。
图2。
miR-153的过度表达抑制SK-BR-3和BT-549细胞的恶性表型。miR-153模拟物和扰民miR模拟物分别瞬时转染SK-BR-3和BT-549细胞。(A) 采用逆转录定量聚合酶链反应检测miR-153的表达水平。通过cell Counting kit-8分析miR-153过表达对(B)SK-BR-3和(C)BT-549细胞生长的影响。miR-153过度表达对(D)SK-BR-3和(E)BT-549细胞迁移的影响使用伤口愈合分析(放大倍率,×40)进行分析。(F) 使用跨孔侵袭试验(放大倍数×200)分析miR-153过度表达对SK-BR-3和BT-549细胞侵袭的影响。western blotting检测(G)SK-BR-3和(H)BT-549细胞中E-cadherin、N-cadherin和vimentin的蛋白表达水平**与miR-NC、SK-BR-3和BT-549人乳腺癌细胞株相比,P<0.01;miR,microRNA;miR-NC、乳腺癌细胞系SK-BR-3和BT-549转染Scramb miR;miR-153,乳腺癌细胞系SK-BR-3和BT-549转染miR-153-模拟物。
图3。
图3。
乳腺癌中上调的RUNX2是miR-153的靶基因。(A) 生物信息学软件用于预测RUNX2作为miR-153的推定靶基因。(B) 通过逆转录定量聚合酶链反应检测RUNX2的mRNA表达水平,发现与邻近健康组织相比,乳腺癌组织中RUNX2mRNA表达上调**P<0.01 vs.相邻。(C) 乳腺癌组织样本中miR-153和RUNX2 mRNA表达呈负相关。(D) 生成WT-RUNX2-3′UTR和MT-RUNX2-3'UTR荧光素酶报告质粒。miR-153过表达后,在(E)SK-BR-3和(F)BT-549细胞中测量荧光素酶活性**与miR-NC相比,P<0.01。邻近健康组织;乳腺癌,原发性乳腺癌组织;RUNX2,runt-related转录因子2;SK-BR-3和BT-549,人乳腺癌细胞系;miR,microRNA;miR-NC、乳腺癌细胞系SK-BR-3和BT-549转染Scramb miR;miR-153,乳腺癌细胞株SK-BR-3和BT-549转染miR-153-模拟物;将WT RUNX2 3′UTR、RUNX2野生型3′UTR-克隆到荧光素酶报告质粒中;MT RUNX2 3′UTR,RUNX2.突变型3′UTR-克隆到荧光素酶报告质粒中。
图4。
图4。
miR-153负调控SK-BR-3和BT-549细胞中RUNX2的表达。miR-153模拟物和扰民miR模拟物分别瞬时转染SK-BR-3和BT-549细胞。(A) RT-qPCR检测RUNX2在SK-BR-3和BT-549细胞中的mRNA表达水平。(B) 通过western blotting检测RUNX2在SK-BR-3和BT-549细胞中的蛋白表达水平**与miR-NC相比P<0.01。miR-153抑制剂和NC抑制剂分别瞬时转染到SK-BR-3和BT-549细胞。RT-qPCR检测SK-BR-3和BT-549细胞中(C)miR-153和(D)RUNX2的mRNA表达水平。(E) 通过western blotting检测RUNX2在SK-BR-3和BT-549细胞中的蛋白表达水平**与NC抑制剂相比,P<0.01。RUNX2,runt-related转录因子2;SK-BR-3和BT-549,人乳腺癌细胞系;miR,microRNA;miR-NC、乳腺癌细胞系SK-BR-3和BT-549转染Scramb miR;miR-153,乳腺癌细胞株SK-BR-3和BT-549转染miR-153-模拟物;NC抑制剂、转染miRNA NC抑制剂的乳腺癌细胞株SK-BR-3和BT-549;miR-153抑制剂、转染miR-53抑制剂的乳腺癌细胞系SK-BR-3和BT-549;RT-qPCR,逆转录定量聚合酶链反应。
图5。
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RUNX2过度表达降低了miR-153对SK-BR-3和BT-549细胞的抑制作用。分别用miR-153模拟物和pcDNA3.1-RUNX2质粒或空白pcDNA3.1载体联合转染SK-BR-3和BT-549细胞。通过逆转录定量聚合酶链反应和蛋白质印迹分别检测RUNX2的(A)mRNA和(B)蛋白表达水平。采用细胞计数试剂盒-8分析对(C)SK-BR-3和(D)BT-549细胞生长的影响。使用伤口愈合试验(放大倍数×40)分析对(E)SK-BR-3和(F)BT-549细胞迁移的影响。(G) 使用跨孔侵袭试验(放大倍数×200)分析对SK-BR-3和BT-549细胞侵袭的影响。western blotting检测(H)SK-BR-3和(I)BT-549细胞中E-cadherin、N-cadherin和vimentin的蛋白表达水平**与miR-153+空白相比,P<0.01。SK-BR-3和BT-549,人乳腺癌细胞系;miR,microRNA;miR-153+空白、乳腺癌细胞系SK-BR-3和BT-549与miR-153模拟物和空白pc-DNA3.1载体共转染;miR-153+RUNX2、用miR-153模拟物和pc-DNA3.1-RUNX2质粒共转染的乳腺癌细胞系SK-BR-3和BT-549。

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