跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2019年4月18日；18(1):89.
doi:10.1186/s12943-019-1017-z。

Ai-lncRNA-EGOT增强自噬通过RNA-RNA和RNA-protein相互作用上调ITPR1表达，提高紫杉醇的细胞毒性

徐寿平 1, 王培元 1, 张健（Jian Zhang） 1, 郝武 1, 石窑隋 1, 张金凤 1, 秦王 1, 昆巧 1, 杨伟伟 2, 徐洪彪 1, 大鹏 三 4
附属公司

Ai-lncRNA-EGOT增强自噬通过RNA-RNA和RNA-protein相互作用上调ITPR1表达，提高紫杉醇的细胞毒性

徐寿平等。 摩尔癌症. .

摘要

背景：反义内含子长非编码RNA（Ai-lncRNA）的生物学功能尚不清楚。与此同时，紫杉醇耐药的癌症患者在临床上的治疗选择有限。然而，Ai-lncRNA在人类癌症中与紫杉醇敏感性的潜在关系尚不清楚。

方法：对33个乳腺标本进行全转录组测序，以鉴定Ai-lncRNA EGOT。接下来，研究EGOT在紫杉醇敏感性调节中的作用。此外，通过RNA-RNA和RNA-蛋白相互作用上调ITPR1表达，详细研究了EGOT增强自噬敏化紫杉醇细胞毒性的机制。此外，还通过联合免疫沉淀和染色质免疫沉淀研究了EGOT表达的上游转录调控。最后，应用我们队列中的临床乳腺标本、TCGA和ICGC来验证EGOT在提高紫杉醇敏感性方面的作用。

结果：EGOT通过上调ITPR1表达增强自噬体积累，从而使细胞对紫杉醇毒性敏感。一方面，从机制上讲，EGOT通过形成前ITPR1/EGOT dsRNA上调ITPR1水平，该dsRNA诱导前ITPR1积累，从而增加顺式表达中ITPR1蛋白的表达。另一方面，EGOT通过外显子1中EGOT片段2（324-645核苷酸）的两个结合基序，招募hnRNPH1来增强反式中前ITPR1的选择性剪接。此外，EGOT受应激条件的转录调控。最后，EGOT的表达通过评估肿瘤标本增强了紫杉醇的敏感性。

结论：这些发现拓宽了对Ai-lncRNAs生物学功能的全面理解。适当调节EGOT可能是增强紫杉醇在癌症治疗中敏感性的一种新的协同策略。

关键词：Ai-lncRNA；自噬；癌症；EGOT；ITPR1；紫杉醇。

PubMed免责声明

利益冲突声明

道德批准和参与同意

所有患者都同意机构审查委员会批准的方案，该方案允许对肿瘤样本进行全面分析（哈尔滨医科大学伦理委员会）。这项研究符合《赫尔辛基宣言》。

出版同意书

患者获得了书面知情同意书。所有作者都同意出版这份手稿。

竞争性利益

作者声明，他们没有相互竞争的利益。

出版商备注

Springer Nature在公布的地图和机构关联中的管辖权主张方面保持中立。

数字

图1
图1
Ai-lncRNAEGOT公司提高人类癌症对紫杉醇的敏感性。一33个乳腺标本的整个转录组的热图显示lncRNAEGOT公司癌组织中的表达水平低于正常组织。颜色对应于日志指示的表达式级别2-矩阵下方的变换比例尺。红色和蓝色分别反映最大和最小级别。b条qRT-PCR分析EGOT公司HMUCC队列中258例患者乳腺癌组织和邻近正常组织中的表达。GAPDH公司作为参考EGOT公司.c（c）,d日紫杉醇治疗48天后，通过CCK-8分析细胞活力 h英寸EGOT公司过度表达和击倒细胞。电子UACC-812 Lv的小鼠和肿瘤-EGOT公司和对照组（Lv-Flag），接受或不接受紫杉醇治疗。（f）UACC-812 Lv小鼠肿瘤切除重量-EGOT公司对照组接受或不接受紫杉醇治疗。克UACC-812 Lv中建立的肿瘤体积-EGOT公司和对照组，有或没有15个 mg/kg紫杉醇每四天在指定时间（第11天、第15天和第19天）进行一次。小时皮下肿瘤中TUNEL阳性细胞的代表性切片（上部）和平均数（底部）。比例尺，50 微米。数据显示为平均值 ± s.d.Student的t检验用于统计分析：*P（P） < 0.05; **P（P） < 0.01; ***P（P） < 0.001; 以及****P（P） < 0.0001. 数据代表至少三个独立实验
图2
图2
EGOT公司表达与ITPR1表达呈正相关。一之间的相关性EGOT公司HMUCC队列中258例乳腺癌组织中ITPR1的表达。EGOT公司和ITPR1水平（标准化为GAPDH公司)进行皮尔逊相关分析。b条,c（c）之间的相关性EGOT公司和ITPR1公司33种肿瘤类型的表达(n个 = 9664）(b条)和乳腺癌(n个 = 1085) (c（c）). 数据从TCGA门户下载自我和ITPR1公司由TPM值（日志）指示2).d日,电子之间的相关性EGOT公司和ITPR1公司1057人肿瘤细胞系的表达(d日)57个乳腺癌细胞株(电子). 数据从CCLE下载。EGOT公司和ITPR1公司级别（标准化为GAPDH公司)进行皮尔逊相关分析。（f）基因附近的示意图EGOT公司轨迹（小于2 Mb）。位置信息来自UCSC基因组浏览器(http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hg网关).克MCF7中邻近基因的表达EGOT公司过表达细胞（左）和HeLaEGOT公司过度表达细胞（右）。数据显示为平均值±标准差。学生的t检验用于统计分析：*P（P） < 0.05; **P（P） < 0.01; 和***P（P） < 0.001.小时ITPR1的蛋白表达水平EGOT公司过度表达和击倒细胞。数据代表至少三个独立实验
图3
图3
EGOT公司诱导自噬以通过ITPR1增强紫杉醇敏感性。一Western blot显示EGOT公司经CQ处理的HeLa（左）和UACC-812细胞（右）中LC3-II/LC3-I水平的过度表达。b条蛋白质印迹显示EGOT公司EBSS处理的HeLa（左）和UACC-812细胞（右）中LC3-II/LC3-I水平和P62表达过度。c（c）Western blot显示EGOT公司CQ处理的T47D细胞中LC3-II/LC3-I水平的过度表达。d日Western blot显示EGOT公司EBSS处理的HeLa（左）和UACC-812细胞（右）中LC3-II/LC3-I水平和P62表达过度。电子,（f）共聚焦显微镜显示EBSS培养对mRFP-GFP-LC3在HeLa中分布的影响EGOT公司过表达细胞(电子)或T47DEGOT公司击倒细胞(（f）) 48 mRFP-GFP-LC3腺病毒转染后h（10000倍放大）。克,小时小鼠自噬液泡的代表性电子显微镜图像和定量EGOT公司过表达细胞(克)和EGOT敲除细胞(小时). 比例尺，2 微米。箭头表示自噬体，细胞核用N表示。我UACC-812原位异种移植切片的代表性苏木精和伊红（H&E）、ITPR1和LC3B染色EGOT公司过表达组和对照组接受或不接受紫杉醇治疗。比例尺，400 微米。j个HMUCC队列中258个乳腺癌组织切片的代表性H&E、ITPR1和LC3B染色。比例尺，200 微米。EGOT公司-H、，EGOT公司-M、 和EGOT公司-L代表高、中、低表达EGOT公司分别是。k个Western blot显示经CQ、不同血清条件、，EGOT公司过度表达或ITPR1公司击倒。数据显示为平均值 ± s.d.Student的t检验用于统计分析：*P（P） < 0.05; **P（P） < 0.01; ***P（P） < 0.001; 和****P（P） < 0.0001. 数据代表至少三个独立实验
图4
图4
EGOT公司调节ITPR1表达顺式和在trans中在人类癌症中。一对HeLa和T47D细胞的细胞核和细胞质部分进行qRT-PCR。U1是核（Nul）阳性对照；GAPDH是细胞质（Cyt）阳性对照。b条在HeLa和T47D细胞中执行RNA-FISH。EGOT公司探针为红色；肌动蛋白探针为绿色；和肌动蛋白作为阳性对照（1000 × 放大倍数）。c（c）,d日前ITPR1在EGOT公司过表达和qRT-PCR敲除细胞。电子RNase抗性和双RNA-FISH分析相结合。在杂交之前，用RNase A或RNase III处理T47D细胞EGOT公司和ITPR1公司抄本。细胞核用DAPI染色。EGOT公司探针为红色；ITPR1公司探针为黄色；和肌动蛋白为阳性对照。箭头表示病灶（1000 × 放大倍数）。（f）的域映射EGOT公司成绩单。克,小时的表达式ITPR1之前和ITPR1公司信使核糖核酸(克)和蛋白质(小时)在转染不同片段的MCF7细胞中EGOT公司慢病毒。我使用基于Flag-MS2bp-MS2bs的系统进行RNA下拉分析，然后用MS2转染MDA-MB-231、T47D和UACC-812细胞后的裂解物进行western印迹-EGOT公司和MS2-矢量（控制）。j个在MCF7和MDA-MB-231细胞中，使用针对hnRNPH1的抗体进行RIP，然后进行qRT-PCR。k、 我通过siRNAs敲低hnRNPH1后，通过qRT-PCR分析ITPR1 mRNA的表达(k个)然后是western blotting(我).米用MS2转染T47D细胞后，使用基于Flag-MS2bp-MS2bs的系统进行RNA下拉分析-自我慢病毒以及不同片段的EGOT公司慢病毒，随后进行western blotting。n个被F2-MS2拉下的hnRNPH1的Western blot和293中突变的F2 RNA T细胞。红色下划线序列表示F2中突变为Us的潜在结合位点，而A、B和C结合位点同时突变为F2-mut ABC。数据显示为平均值 ± s.d.Student的t检验用于统计分析：*P（P） < 0.05; **P（P） < 0.01; ***P（P） < 0.001; 和****P（P） < 0.0001. 数据代表至少三个独立实验
图5
图5
EGOT公司NRIP1/AP-1复合物直接抑制表达。一 自我通过qRT-PCR确定的表达（归一化为GAPDH公司)在E2处理的MCF7细胞中。b条雌激素释放基因的表达，红外线4,GUSB公司,BCAS4公司,粘液1和EGOT公司，通过用1 nM E2或乙醇（Ctrl）6 小时。c（c） EGOT公司用qRT-PCR检测不同剂量三苯氧胺处理的MCF7细胞的表达。d日 EGOT公司通过qRT-PCR测定ESR敲除后MCF7细胞中的表达。电子 EGOT公司和绿色11在MCF7细胞中的表达 nM E2在不同时间点刺激。（f）NRIP1 mRNA和EGOT公司用1处理的MCF7细胞中的表达 nM E2在不同时间点刺激。克,小时对照siRNA（siCtrl）或抗NRIP1的siRNA（siNRIP1）转染MCF7细胞48 h、 后跟1 nM E2刺激。NRIP1 mRNA，绿色1、和EGOT公司在存在siCtrl或siNRIP1的情况下，评估雌激素刺激后的水平。我使用抗NRIP1或抗AP-1抗体对经或不经E2刺激处理的MCF7细胞的内源性蛋白进行Co-IP分析。j个AP-1和NRIP1在基因启动子处结合的基因组浏览器视图EGOT公司轨迹。在乙醇（Ctrl）或E2刺激的MCF7细胞中执行AP-1和NRIP1 ChIP-seq。k个ChIP-PCR显示AP-1和NRIP1与EGOT公司发起人。BCAS4基因被用作阳性对照。我NRIP1/AP-1复合物介导的转录抑制的示意图自我表达式。MCF7细胞激素缺乏3 天并进一步治疗。在A、C、E和F中，格雷布1作为雌激素诱导阳性对照基因。在B和D中，数据显示为平均值 ± s.d.Student的t检验用于统计分析：*P（P） < 0.05; **P（P） < 0.01; 和***P（P） < 0.001. 数据代表至少三个独立实验
图6
图6
EGOT公司/ITPR1公司表达与良好的预后相关，并提高了紫杉醇在人类癌症中的敏感性。一,b条Kaplan-Meier分析EGOT公司表达式和操作系统(一)或RFS(b条)HMUCC队列中的乳腺癌患者。c（c）,d日Kaplan-Meier分析EGOT公司33种肿瘤类型在TCGA中的表达及OS(c（c）)和ICGC队列(d日).电子,（f）Kaplan-Meier分析EGOT公司表达式和操作系统(电子)或RFS(（f）)HMUCC队列中接受紫杉醇治疗的乳腺癌患者。克Kaplan-Meier分析EGOT公司TCGA队列中紫杉醇治疗的乳腺癌患者的表达和OS。小时之间的相关性EGOT公司表达和ITPR1型对15例接受含紫杉醇辅助化疗方案治疗的乳腺癌患者的mRNA表达进行了检测（左）。EGOT公司和ITPR1公司级别（标准化为GAPDH公司)进行皮尔逊相关分析。之间的相关性EGOT公司通过chi-square试验（右）确定表达和病理反应。完整的病理反应用CR表示，而部分反应用PR表示。中间表达水平用作截止值。患有以下疾病的患者EGOT公司低于第50百分位的表达值被分类为EGOT公司-低。患有以下疾病的患者EGOT公司第50百分位以上的表达值被分类为EGOT公司-高
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Yu Y、Gaillard S、Phillip JM、Huang TC、Pinto SM、Tessarollo NG、Zhang Z、Pandey A、Wirtz D、Ayhan A等。通过稳定微管，抑制脾酪氨酸激酶可增强紫杉醇诱导的卵巢癌细胞毒性。癌细胞。2015;28:82–96. doi:10.1016/j.cell.2015.05.009。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Luo Y，Li D，Ran J，Yan B，Chen J，Dong X，Liu Z，Liu R，Zhou J，Liu M。末端结合蛋白1通过促进其对微管组装和稳定性的作用，刺激乳腺癌对紫杉醇的敏感性。蛋白质细胞。2014;5:469–479. doi:10.1007/s13238-014-0053-0。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. 水岛N，小松M.自噬：细胞和组织的修复。单元格。2011;147:728–741. doi:10.1016/j.cell.2011.10.026。-内政部-公共医学
    1. Jeon YJ、Khelifa S、Ratnikov B、Scott DA、Feng Y、Parisi F、Ruller C、Lau E、Kim H、Brill LM等。RNF5对谷氨酰胺载体蛋白的调节决定了乳腺癌对内质网应激诱导化疗的反应。癌细胞。2015;27:354–369。doi:10.1016/j.cell.2015.02.006。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Domenech E、Maestre C、Esteban-Martinez L、Partida D、Pascual R、Fernandez-Miranda G、Seco E、Campos-Olivas R、Perez M、Megias D等。AMPK和PFKFB3在有丝分裂阻滞期间调节糖酵解和存活，以应对有丝分裂。自然细胞生物学。2015;17:1304–1316. doi:10.1038/ncb3231。-内政部-公共医学

出版物类型

MeSH术语