Proteomic Analysis Implicates Vimentin in Glioblastoma Cell Migration

doi:10.3390/cancers11040466

.2019年4月3日；11(4):466.

doi:10.3390/cancers11040466。

蛋白质组分析表明波形蛋白在胶质母细胞瘤细胞迁移中的作用

米查尔·诺维基¹, 乔西·海耶斯², E安东尼奥·乔卡^三, 肖恩·劳勒⁴

附属机构

¹Harvey W.Cushing神经瘤实验室，美国马萨诸塞州波士顿市哈佛医学院百翰女子医院神经外科。mnowicki@bwh.harvard.edu。
²Harvey W.Cushing神经瘤实验室，美国马萨诸塞州波士顿市哈佛医学院百翰女子医院神经外科。jlhayes1982@gmail.com。
^三Harvey W.Cushing神经肿瘤学实验室，美国马萨诸塞州波士顿市哈佛医学院布莱根妇女医院神经外科，02115。eachiocca@bwh.harvard.edu。
⁴Harvey W.Cushing神经肿瘤学实验室，美国马萨诸塞州波士顿市哈佛医学院布莱根妇女医院神经外科，02115。slawler@bwh.harvard.edu。

采购管理信息： 30987208
PMCID公司： PMC6521049型
内政部： 10.3390/癌症11040466

蛋白质组分析表明波形蛋白在胶质母细胞瘤细胞迁移中的作用

米查尔·诺维基等。癌症（巴塞尔）. 2019.

.2019年4月3日；11(4):466.

doi:10.3390/cancers11040466。

作者

米查尔·诺维基¹, 乔西·海耶斯², E安东尼奥·乔卡^三, 肖恩·劳勒⁴

附属机构

¹Harvey W.Cushing神经瘤实验室，美国马萨诸塞州波士顿市哈佛医学院百翰女子医院神经外科。mnowicki@bwh.harvard.edu。
²Harvey W.Cushing神经瘤实验室，美国马萨诸塞州波士顿市哈佛医学院百翰女子医院神经外科。jlhayes1982@gmail.com。
^三Harvey W.Cushing神经瘤实验室，美国马萨诸塞州波士顿市哈佛医学院百翰女子医院神经外科。eachiocca@bwh.harvard.edu。
⁴Harvey W.Cushing神经瘤实验室，美国马萨诸塞州波士顿市哈佛医学院百翰女子医院神经外科。slawler@bwh.harvard.edu。

采购管理信息： 30987208
PMCID公司： PMC6521049型
内政部： 10.3390/癌症11040466

摘要

我们之前发现氯化锂（LiCl）和其他糖原合成酶激酶-3（GSK-3）抑制剂，包括6-溴靛玉红-3-肟（BIO），可以阻止胶质母细胞瘤（GBM）细胞迁移。为了研究相关机制，我们使用双向差异凝胶电泳（2D-DIGE）和质谱法来鉴定用20 mM LiCl处理U251 GBM细胞后发生变化的蛋白质。中间丝蛋白波形蛋白的下调是最显著的变化。对患者肿瘤样本的分析表明，波形蛋白在GBM中大量表达，尤其在低度恶性肿瘤中具有预后作用。此外，siRNA-介导的波形蛋白敲除损害GBM迁移。Western blotting显示，用氯化锂或小分子GSK-3抑制剂处理后，一组GBM-衍生细胞中洗涤剂可溶性波形蛋白水平迅速下调。光漂白后荧光再激活（FRAP）显微镜研究表明，在LiCl或BIO存在下，波形蛋白细胞骨架从光漂白中恢复的能力显著降低。生化研究表明，GSK-3和波形蛋白直接相互作用，并且对波形蛋白的分析揭示了GSK-3共有磷酸化位点。我们的结论是，具有抑制GSK-3能力的抗迁移化合物对波形蛋白细胞骨架动力学有影响，这可能在其抗侵袭活性中发挥作用。

关键词：GSK-3；细胞骨架；胶质母细胞瘤；运动性；波形蛋白。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
双向荧光差异凝胶电泳（DIGE）蛋白质组学分析发现，经20mM氯化锂（LiCl）处理24小时后，胶质母细胞瘤（GBM）细胞中有22个蛋白质点发生显著改变。实验共进行三次。(一)用20 mM LiCl处理U251细胞24小时后，具有代表性的Cy3/Cy5染色（呈灰色）凝胶显示差异调节斑点。(b)分析氯化锂处理后荧光强度的变化后，根据显著性从凝胶中去除前六个靶点，并通过质谱肽分析进行鉴定。

图2
波形蛋白在恶性胶质瘤中的表达：(一)波形蛋白在人类恶性胶质瘤手术标本中表达的Western blot分析：OD-寡齿胶质瘤、AA-再生性星形细胞瘤、GBM-多形性胶质母细胞瘤；与正常大脑相比；(b)根据REMBRANDT数据库的波形蛋白mRNA转录水平(http://www.betastasis.com/glioma/rembrandt)，样本量：非肿瘤n个=29，外径n个=67，AAn个=460，GBMn个= 220; (**c（c）**)生存曲线基于从REMBRANDT数据库获得的波形蛋白mRNA高表达与低表达。实线表示样本的数据，其级别高于（红色）或低于（绿色）数据集中值；虚线表示根据“最佳截止”算法[22]分为两组（高分辨率或低绿色）的样本的数据。

图3
人GBM中的波形蛋白染色：(一)U251细胞生长为单层细胞（左面板，视野400×400μm，刻度50μm）和单细胞的高倍放大（右，刻度条=50μm。(b)对手术获得的人类肿瘤标本进行波形蛋白染色，视野400×400µm，标度50µm。

图4
在转染后24小时的改良Boyden小室实验中，siRNA波形蛋白下调降低了细胞跨跨跨膜迁移的能力。在膜底侧测量的细胞数量标准化为每个细胞系的相应干扰siRNA控制性能（=100%）*第页= 0.010, **第页=0.015***第页=0.037。Western印迹（上图）显示了与扰乱的siRNA对照相比，每个细胞系获得的波形蛋白下调的实际程度。

图5
经LiCl和一组小分子糖原合成酶激酶-3（GSK-3）抑制剂处理的GBM细胞洗涤剂可溶性提取物中波形蛋白的下调：(一)GBM细胞系验证。用20 mM氯化锂或氯化钠处理U251和U373胶质瘤细胞，处理时间（小时）如图所示。在triton-x-100提取物和8M尿素“总”提取物中测定了波形蛋白水平。(b)20 mM LiCl对一组GBM细胞株处理后3小时的影响。(**c（c）**)一组GSK-3抑制剂对U251细胞治疗3小时后波形蛋白水平的影响。(d日)6-溴靛玉红-3-肟（BIO）对治疗3 h后triton-x-100可溶性波形蛋白水平的剂量依赖性影响。

图6
(一)20 mM LiCl或5μM BIO处理（3 h，比例尺=10μM）后绿色荧光蛋白（GFP）-波形蛋白细丝的出现。(b)在时间点回收光漂白GFP-波形蛋白，比例尺=10μm。(**c（c）**)通过帧间导数（μm）量化波形蛋白骨骼运动的动态²)在50帧（200 s）时间推移序列中；刻度=10μm。

图7
GSK-3与波形蛋白的相互作用如下：(一)谷胱甘肽-s-转移酶（GST）-GSK-3下拉试验；和(b)共沉淀分析。GSK3以双带形式迁移，GSK-3α的分子量略高于GSK-3β。(**c（c）**)荧光共振能量转移（FRET）共定位显示的黄色荧光蛋白（YFP）-波形蛋白和氰基荧光蛋白（CFP）-GSK-3β融合蛋白相互作用，比例尺=10μm。

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

氯化镍丁通过Akt/GSK-3β/Snail信号通路抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭中上皮-间充质转化。
程Z，郭毅，杨毅，坎J，戴S，贺连M，李B，徐J，刘C。 Cheng Z等人。 Oncol Rep.2016年8月；36(2):1023-9. doi:10.3892/或.2016.4846。Epub 2016年6月2日。 Oncol Rep.2016年。采购管理信息：27279040
胶质瘤中糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）通过Akt途径的调节。
Atkins RJ、Dimou J、Paradiso L、Morokoff AP、Kaye AH、Drummond KJ、Hovens CM。 Atkins RJ等人。临床神经科学杂志。2012年11月；19(11):1558-63. doi:10.1016/j.jocn.2012.007.002。Epub 2012年9月19日。临床神经科学杂志。2012 采购管理信息：22999562
HMGB1诱导的p62过表达通过降解GSK-3β促进胶质母细胞瘤细胞中蜗牛介导的上皮-间充质转化。
李浩、李杰、张刚、大Q、陈雷、于斯、周Q、翁Z、辛Z、石L、马L、黄A、齐S、卢Y。李浩等。热学。2019年3月16日；9(7):1909-1922. doi:10.7150/thno.30578。2019年电子采集。热学。2019 采购管理信息：31037147 免费PMC文章。
抗精神病药物氯化锂和抗白血病药物甲磺酸伊马替尼在体外治疗胶质母细胞瘤期间的拮抗活性。
Aras Y、Erguven M、Aktas E、Yazihan N、Bilir A。 Aras Y等人。《神经研究》，2016年9月；38(9):766-74. doi:10.1080/01616412.2016.1203096。Epub 2016年7月1日。《神经研究》，2016年。采购管理信息：27367429
严重癌症的代谢抑制鸡尾酒：二甲双胍、吡格列酮和锂联合治疗胰腺癌和多形胶质母细胞瘤。
马萨诸塞州阿尔蒂诺兹Elmaci I。 Elmaci I等人。生物化学遗传学。2016年10月；54(5):573-618. doi:10.1007/s10528-016-9754-9。Epub 2016年7月4日。生物化学遗传学。2016 采购管理信息：27377891 审查。

查看所有类似文章

引用人

CREB5促进胶质瘤干细胞的增殖和自我更新能力。
Kim HJ、Jeon HM、Batara DC、Lee S、Lee SJ、Yin J、Park SI、Park M、Seo JB、Hwang J、Oh YJ、Suh SS、Kim SH。 Kim HJ等人。细胞死亡发现。2024年2月28日；10(1):103. doi:10.1038/s41420-024-01873-z。细胞死亡发现。2024 采购管理信息：38418476 免费PMC文章。
胶质母细胞瘤与人脑区域特异性器官的精确相互作用建模。
樊Q，王H，顾T，刘H，邓P，李B，杨H，毛Y，邵Z。 Fan Q等人。 iScience。2024年2月5日；27(3):109111. doi:10.1016/j.isci.2024.109111。eCollection 2024年3月15日。 iScience。2024 采购管理信息：38390494 免费PMC文章。
通过扩张介导的蛋白质去拥挤化改善人脑标本中纳米结构和细胞的免疫染色。
Valdes PA、Yu CJ、Aronson J、Ghosh D、Zhao Y、An B、Bernstock JD、Bhere D、Felicella MM、Viapiana MS、Shah K、Chiocca EA、Boyden ES。 Valdes PA等人。《科学与运输医学》，2024年1月31日；16（732）：eabo0049。doi:10.1126/scitranslmed.abo0049。Epub 2024年1月31日。《科学与运输医学》，2024年。采购管理信息：38295184 免费PMC文章。
在3D开发的神经球体模型上使用基于纳米UHPLC MS/MS非靶向蛋白质组的方法进行农药胁迫下的差异蛋白质组谱分析：人类IDH突变高级别胶质瘤中蛋白质相互作用、预后生物标志物和潜在治疗靶点的鉴定。
Louati K、Maalej A、Kolsi F、Kallel R、Gdoura Y、Borni M、Hakim LS、Zribi R、Choura S、Sayadi S、Chamkha M、Mnif B、Khemakhem Z、Boudawara TS、Boudowara MZ、Safta F。 Louati K等人。蛋白质组研究杂志，2023年11月3日；22(11):3534-3558. doi:10.1021/acs.jproteome.3c00395。Epub 2023年8月31日。蛋白质组研究杂志，2023。采购管理信息：37651309 免费PMC文章。
通过参与细胞骨架重排和代谢改变的基因描述胶质母细胞瘤干细胞。
Kałuziñska-Ko \322；atŻ，KoÞat D，Ko she la K，P \322»uciennik E，Bednarek AK。 Kałuziáska-Ko \322；atŻ，et al。世界干细胞杂志。2023年5月26日；15(5):302-322. doi:10.4252/wjsc.v15.i5.302。世界干细胞杂志。2023 采购管理信息：37342224 免费PMC文章。审查。

查看所有“被引用”文章

工具书类

1. Sattiraju A.、Sai K.K.S.、Mintz A.胶质母细胞瘤干细胞及其微环境。高级实验医学生物。2017年；1041:119–140.-公共医学
1. Bellail A.C.、Hunter S.B.、Brat D.J.、Tan C.、Van Meir E.G.脑内微区域细胞外基质异质性调节胶质瘤细胞侵袭。国际生物化学杂志。细胞生物学。2004年；36:1046–1069. doi:10.1016/j.bicel.2004.01.013。-内政部-公共医学
1. Roomi M.W.、Kalinovsky T.、Rath M.、Niedzwiecki A.人类胶质母细胞瘤T-98G细胞中细胞因子、诱导剂和抑制剂对MMP-2和MMP-9分泌的调节。昂科尔。2017年报告；37:1907–1913. doi:10.3892或2017.5391。-内政部-公共医学
1. Matias D.、Predes D.、Niemeyer Filho P.、Lopes M.C.、Abreu J.G.、Lima F.R.S.、Moura Neto V.小胶质细胞-胶质母细胞瘤相互作用：Wnt信号的新作用。生物芯片。生物物理学。癌症学报。2017年；1868:333–340. doi:10.1016/j.bbcan.2017.05.007。-内政部-公共医学
1. Turaga S.M.、Lathia J.D.坚持致瘤性：胶质母细胞瘤干细胞中粘附机制的改变。CNS肿瘤。2016;5:251–259. doi:10.2217/cns-2016-0015。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源
其他
- NCI CPTAC分析门户网站

[1] Sattiraju A.、Sai K.K.S.、Mintz A.胶质母细胞瘤干细胞及其微环境。高级实验医学生物。2017年；1041:119–140.-公共医学

[2] Sattiraju A.、Sai K.K.S.、Mintz A.胶质母细胞瘤干细胞及其微环境。高级实验医学生物。2017年；1041:119–140.-公共医学

[3] Bellail A.C.、Hunter S.B.、Brat D.J.、Tan C.、Van Meir E.G.脑内微区域细胞外基质异质性调节胶质瘤细胞侵袭。国际生物化学杂志。细胞生物学。2004年；36:1046–1069. doi:10.1016/j.bicel.2004.01.013。-内政部-公共医学

[4] Bellail A.C.、Hunter S.B.、Brat D.J.、Tan C.、Van Meir E.G.脑内微区域细胞外基质异质性调节胶质瘤细胞侵袭。国际生物化学杂志。细胞生物学。2004年；36:1046–1069. doi:10.1016/j.bicel.2004.01.013。-内政部-公共医学

[5] Roomi M.W.、Kalinovsky T.、Rath M.、Niedzwiecki A.人类胶质母细胞瘤T-98G细胞中细胞因子、诱导剂和抑制剂对MMP-2和MMP-9分泌的调节。昂科尔。2017年报告；37:1907–1913. doi:10.3892或2017.5391。-内政部-公共医学

[6] Roomi M.W.、Kalinovsky T.、Rath M.、Niedzwiecki A.人类胶质母细胞瘤T-98G细胞中细胞因子、诱导剂和抑制剂对MMP-2和MMP-9分泌的调节。昂科尔。2017年报告；37:1907–1913. doi:10.3892或2017.5391。-内政部-公共医学

[7] Matias D.、Predes D.、Niemeyer Filho P.、Lopes M.C.、Abreu J.G.、Lima F.R.S.、Moura Neto V.小胶质细胞-胶质母细胞瘤相互作用：Wnt信号的新作用。生物芯片。生物物理学。癌症学报。2017年；1868:333–340. doi:10.1016/j.bbcan.2017.05.007。-内政部-公共医学

[8] Matias D.、Predes D.、Niemeyer Filho P.、Lopes M.C.、Abreu J.G.、Lima F.R.S.、Moura Neto V.小胶质细胞-胶质母细胞瘤相互作用：Wnt信号的新作用。生物芯片。生物物理学。癌症学报。2017年；1868:333–340. doi:10.1016/j.bbcan.2017.05.007。-内政部-公共医学

[9] Turaga S.M.、Lathia J.D.坚持致瘤性：胶质母细胞瘤干细胞中粘附机制的改变。CNS肿瘤。2016;5:251–259. doi:10.2217/cns-2016-0015。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

[10] Turaga S.M.、Lathia J.D.坚持致瘤性：胶质母细胞瘤干细胞中粘附机制的改变。CNS肿瘤。2016;5:251–259. doi:10.2217/cns-2016-0015。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

您的RSS源

蛋白质组分析表明波形蛋白在胶质母细胞瘤细胞迁移中的作用

附属机构

蛋白质组分析表明波形蛋白在胶质母细胞瘤细胞迁移中的作用

作者

附属机构

摘要

利益冲突声明

数字

类似文章

引用人

工具书类

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

其他

摘要

利益冲突声明

数字

类似文章

引用人

工具书类

相关信息

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

其他