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.2019 6月25日;39(6):BSR2018804。
DOI:101042/BSR2018804。 打印2019 6月28日。

MICRORA-153促进脑源性神经营养因子和海马神经元增殖,通过LPR抑制JAK-STAT途径减轻孤独症症状

附属
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MICRORA-153促进脑源性神经营养因子和海马神经元增殖,通过LPR抑制JAK-STAT途径减轻孤独症症状

宇辉佑等。 比奥西代表. .
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摘要

自闭症是一种严重的神经行为综合征,男性比女性更易受影响。以前的研究表明,microRNAs(miRNAs)在寻找新的孤独症治疗策略中起着至关重要的作用。因此,我们通过靶向瘦素受体(LPR)的JANK激酶信号转导子和转录激活子(JAK-STAT)信号通路,评估miR-153对孤独症脑源性神经营养因子(BDNF)和海马神经元增殖和凋亡的影响。首先建立孤独症小鼠模型,采用Morris水迷宫对小鼠的学习能力和记忆力进行分析。此外,在体外实验中,用不同的模拟物、抑制剂或siRNA转染海马神经元细胞,研究miR-153对LePR和JAK-STAT信号通路相关因子的影响。接着,分别用3—[4-,5-二甲基噻唑-2-基] -2,5-二苯基四唑溴化物和流式细胞术检测转染后细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡。结果表明,孤独症小鼠学习能力和记忆力显著下降,BDNF阳性表达率降低,炎症反应严重。LPR通过双荧光素酶报告基因检测证实为miR153的靶基因。转染过表达miR-153后,LPR和JAK-STAT信号通路受到抑制,BDNF增加,细胞增殖增强。总之,miR-153的高表达可以抑制LePR激活JAK-STAT信号通路,从而提高BDNF的表达和海马神经元的增殖能力。

关键词孤独症;脑源性神经营养因子;海马神经元;JAK-STAT信号通路;增殖;MICRORAN-153。

利益冲突陈述

作者宣称没有与手稿相关的竞争利益。

数据

图1
图1。免疫组化染色(×400)显示孤独症海马神经元细胞BDNF表达降低和LePR表达增加
BDNF和LPR在NS和VPA组中的阳性表达结果;定量分析NS和VPA组中BDNF和LPR蛋白表达的阳性率;<0.05,与NS组比较。缩写:脑源性神经营养因子、脑源性神经营养因子、LPR、瘦素受体、NS、生理盐水、VPA、丙戊酸钠。
图2
图2。TUNEL染色(×400)显示孤独症小鼠的细胞凋亡率较高
)NS和VPA组小鼠TUNEL染色结果;比较NS组与VPA组的凋亡率;<0.05,与NS组比较,TUNEL、转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸生物素缺口末端标记。缩写:NS,生理盐水;VPA,丙戊酸钠。
图3
图3。体内实验主要观察脑组织中miR-153、LPR、Bax、JAK、STAT、BDNF和Bcl-2的表达,发现miR-153、BDNF、bcl-2的表达降低,而LPR、Bax、JAK、STAT、P JAK和P STAT升高。
RT-qPCR检测LIPR、Bax、JAK、STAT、BDNF和Bcl-2的miR-153表达和mRNA表达;Western blot分析NS组和VPA组BDNF、Bcl-2、LPR、Bax、JAK、PJAK、STAT和P STAT蛋白表达;C对BDNF、Bcl-2、LPR、Bax、JAK、PJAK、STAT和P STAT的灰度值进行分析,以GAPDH为内标;<0.05,与NS组比较。缩写:Bax、Bcl-2相关蛋白X、Bcl-2、B细胞淋巴瘤2、BDNF、脑源性神经营养因子、GAPDH、甘油醛-3-磷酸脱氢酶;JAK、JANUS激酶、LPR、Leptin受体、miR153、MICRON-153;NS、生理盐水;RT-qPCR、逆转录定量聚合酶链反应;STAT;信号转导和转录激活子;VPA,丙戊酸钠。
图4
图4。利用双荧光素酶报告法确认LPR为miR153靶点
miR153与LPR之间的网站预测的目标关系;双荧光素酶报告:LPR PR WT和LePR-3’UTR在NC和miR-153模拟组之间的荧光素酶活性;<0.05,与NS组比较。缩略语:LPR、Leptin受体、miR-153、miRN-153;NC,阴性对照;NS,生理盐水;UTR,非翻译区;VPA,丙戊酸钠;WT,野生型。
图5
图5。RT-qPCR和Western blot分析显示过表达miR-153抑制LePR和JAK-STAT信号通路
应用RT-qPCR检测转染后细胞中miR-153的表达,以及细胞内LPR、JAK、STAT、PI3K和AKT的mRNA表达;Western blot分析转染后LePR、JAK、pJAK、STAT、pSTAT、PI3K、Akt和p-Akt的蛋白表达;C)以GAPDH为内标,对LPR、JAK、PJAK、STAT、P STAT、PI3K、AKT和P -AKT进行灰度值分析;<0.05,与正常组比较,<0.05,与空白组和NC组比较。缩略语:GAPDH、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、JAK、JANUS激酶、LPR、Leptin受体、miR153、MICRORA-153、NC、阴性对照、PI3K、磷脂酰肌醇3’激酶、RT-qPCR、逆转录定量聚合酶链反应、STAT、信号转导子和转录激活子。
图6
图6。MTT法显示过表达miR-153促进细胞活力
*<0.05,与正常组比较,分别为48和72 h;<0.05与空白组和NC组在48和72小时比较:缩写:miR153,miRNA-153;MTT,3 -(4-,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2- H-四唑溴;NC,阴性对照。
图7
图7。流式细胞仪显示G1期miR-153细胞的过度表达
不同转染后细胞的流式细胞术;转染后细胞周期发生改变;<0.05,与正常组比较,<0.05,与空白组和NC组比较。缩写:miR-153,miRAM-153;NC,阴性对照。
图8
图8。流式细胞仪显示转染过表达miR-153后,细胞凋亡受到抑制。
流式细胞术检测转染后细胞凋亡;不同因素转染后的细胞凋亡率;CRT-qPCR检测凋亡相关因子(BDNF、Bcl-2、Bax)mRNA的表达;D,E用Western blot法测定GAPDH细胞凋亡相关因子(BDNF、Bcl-2、Bax)的相对蛋白表达;<0.05,与正常组比较,<0.05,与空白组和NC组比较。缩写:Bax、Bcl-2相关蛋白X、Bcl-2、B细胞淋巴瘤2、BDNF、脑源性神经营养因子、GAPDH、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、miR-153、MICRORN-153;NC、阴性对照、RT-qPCR、逆转录-定量聚合酶链反应。

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