跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

点政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息,确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https(https)://确保您连接到官方网站,并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2019年4月10日;25(4):617-629.e7。
doi:10.1016/j.chom.2019.02.016。 Epub 2019年3月26日。

补体C4通过灭活衣壳预防病毒感染

附属公司

补体C4通过灭活衣壳预防病毒感染

玛丽亚·博特曼等。 宿主与微生物. .

摘要

补体系统对抗菌防御至关重要。在经典途径中,病原结合抗体招募C1复合物(C1qC1r2C1类2)启动涉及C2、C3、C4和C5的裂解级联并触发微生物清除。我们证明了一种独立于下游补体成分的C4依赖性抗病毒机制。C4通过直接灭活病毒衣壳抑制人类腺病毒感染。抗体通过经典途径催化裂解C4b的快速C4活化和衣壳沉积。衣壳蛋白沉积的C4b可独立于C2和C3中和感染,但需要C1q抗体结合。C4b抑制衣壳的分解,防止内体逃逸和细胞溶质进入。C4缺乏小鼠的病毒负荷增加。此外,补体与Fc受体TRIM21协同阻断腺病毒基因治疗载体的转导,但通过Fab病毒屏蔽部分恢复。这些结果表明,可以通过改变补体系统来预防病毒感染,提高病毒基因治疗的疗效。

关键词:TRIM21;腺病毒;补体;补体C4;补体介导中和;基因治疗;宿主蛋白原;体液免疫;中和抗体;无包膜病毒。

PubMed免责声明

数字

无
图形摘要
图1
图1
补体成分C1和C4介导Ad5(A)的有效抗体依赖性中和作用,使用9C12-WT和突变体LALA和P329A中和293T-WT和TRIM21 KO细胞中的Ad5(左)。描述了使用9C12-WT在15μg/mL和0.12μg/mL(中间)条件下进行TRIM21依赖和独立中和的百分比,以及使用每种抗体在15μg/mL条件下进行的TRIM21依存和独立中和(右侧)的百分比。(B) 使用9C12-WT、LALA或P329A和指定血清在HeLa TRIM21 KO细胞中的相对感染(左)和C1q依赖性中和(右)。(C) 使用不同比例的9C12-WT和P329A中和HeLa TRIM21 KO细胞中的Ad5。(D) HeLa TRIM21 KO细胞中Ad5的中和作用。Ad5与指示的血清孵育,孵育时间如图所示。(E) HeLa TRIM21 KO细胞中Ad5的中和作用。Ad5与NHS或NHS耗尽IgG孵育一段描述的时间(左)。Western blot显示NHS的IgG缺失(右)。图S6中包含了原始西方印迹。(F) 使用9C12-WT和突变P329A,在耗尽不同补体成分的人血清中中和HeLa TRIM21 KO细胞中的Ad5。(G) 在9C12-WT存在下,使用200 ng/mL C1和指示的C4浓度中和Ad5。误差条描述了在三个独立实验(B、C、F和G)中获得的九个重复的平均值±SEM;两个独立实验(A和D)获得的六个重复的平均值±SEM;在一个代表性实验中获得的三个重复的平均值±SD(E)。
图2
图2
在Ad5和9C12存在下,补体级联激活导致C4b沉积在Ad5衣壳上(A)NHS(顶部)或C1q缺失血清(底部)中C4(α链)裂解的蛋白质印迹(A),在Ad5或9C12-WT存在下,持续60分钟。另请参见图S2E。(B) 实验设置(左):Ad5-mCherry+9C12-WT与HBS++/血清在37°C下孵育1 h。Ad5-GFP与HBS++孵育。将Ad5-mCherry立即添加到HeLa TRIM21 KO细胞中,然后添加Ad5-GFP。右:Ad5-mCherry和Ad5-GFP的相对感染。x轴标记对应于与Ad5-mCherry孵育的缓冲液/血清。(C) 如图所示,在含有Ad5和9C12-WT的NHS、C1q缺失血清或C4缺失血清中C4(α链)裂解的Western blot。(D) 使用血清(左)或纯化蛋白(右)进行C4 Elisa。Ad5+9C12-WT与指示的血清或纯化蛋白孵育,并在蔗糖梯度上造粒。误差条描述了在一个代表性实验(A和D)中获得的三个重复的平均值+SD。图S6中包含了原始西方印迹。
图3
图3
在C1和C4(A–C)存在下持续感染30分钟后,C1和C4-不能阻止与HeLa TRIM21 KO细胞相关的病毒粘附或内化Ad5。(A) 用qPCR检测病毒拷贝数。(B) 腺病毒和肌动蛋白的蛋白质印迹。(C) 用抗人IgG抗体对细胞进行染色,并用流式细胞术进行分析。图示为直方图(左)和MFI(右)。(D) 持续感染30分钟后病毒内化检测。每30分钟采集一次细胞,用抗人IgG抗体染色,并用流式细胞仪进行分析(左)。另请参见图S3C。病毒基因组qPCR在感染后30分钟和90分钟出现(右)。病毒基因组被标准化为感染后30分钟出现的病毒基因组数量。误差条表示在一个代表性实验(A和C)中获得的三个重复的平均值+SD,或在三个独立实验(D)中获得九个重复的均值+SEM。
图4
图4
C1和C4防止Ad5在指定温度下孵育30分钟后,与9C12一起暴露Ad5的腺病毒蛋白VI和内膜逃逸(A)IP。WB:抗腺病毒。(B) Ad5和9C12之后的IP与C1或C1/C4络合,然后在37°C或49°C下培养30分钟。WB:抗腺病毒。(C和D)HeLa TRIM21 KO细胞在9C12或9C12+补体存在下感染30分钟。误差条描述了在三个独立实验中获得的指示细胞数(n)的平均值±SEM。比例尺,5μm。(C) 左:Ad5染色显示为绿色;蛋白质VI染色用红色表示。右图:在指定条件下,每个细胞的蛋白质VI点的定量。(D) 左:Ad5染色显示为绿色;半乳糖凝集素-3染色用红色表示。右图:所示条件下每个细胞半乳糖凝素-3点的定量。图S6中包含了原始西方印迹。
图5
图5
C1和C4阻止Ad5进入细胞质并贩运到细胞核(A)细胞质Ad5染色显示为绿色,总Ad5染色则显示为红色(左)。单独感染Ad5或Ad5+9C12(中间)后的细胞溶质Ad5百分比。Ad5+9C12或Ad5+9 C12+C1/C4感染后细胞溶质Ad5的百分比(右)。(B) Ad5染色显示为绿色;层粘连蛋白B1染色显示为红色(左)。核膜上病毒的定量(右)。比例尺,5μm。误差条描绘了在一个代表性实验中获得的指示细胞数(n)的平均值±SEM。
图6
图6
补体和TRIM21介导的转基因表达阻断在体内(A) 相对光单位(RLU)表示WT和C4 KO动物中Ad5感染的绝对水平。(B) 使用9C12-WT的WT和C4 KO小鼠中Ad5-Luc的相对感染。(D) 在9C12-WT和突变体P329A和P329A/H433A存在下,静脉注射Ad5-Ova免疫小鼠血液中SIINFEKL(SL8)特异性CD8 T细胞频率。(E–G)使用9C12突变体(顶部)和m9C12 Fab(底部)进行竞争分析。在HeLa T21 KO细胞中使用1μg/mL 9C12-WT进行中和试验,在P329A(E)中滴定,在293T-WT细胞中滴定,并在H433A(F)中滴定和在293T-WT细胞上滴定P329A/H433A(g)。(H) 在500μg m9C12 Fab存在下,使用0.5μg 9C12-WT的WT小鼠中Ad5-Luc的相对感染。(一) 感染后指定天数小鼠血清中的抗-Ad5抗体。各组由3-9只小鼠组成;误差条表示平均值±SEM(A–D、H和I)。误差条描述了在一个代表性实验(E–G)中获得的三个重复的平均值+SD。

中的注释

  • 补体封闭病毒以阻止感染。
    Smith JG,Nemerow GR公司。 Smith JG等人。 细胞宿主微生物。2019年4月10日;25(4):482-483. doi:10.1016/j.chom.2019.03.010。 细胞宿主微生物。2019 PMID:30974082

类似文章

引用人

工具书类

    1. Aits S.、Kricker J.、Liu B.、Ellegaard A.M.、HäMälistöS.、Tvingsholm S.,Corcelle-Termeau E.、Högh S.、Farkas T.、Holm Jonassen A.通过溶酶体galectin puncta分析敏感检测溶酶体膜渗透性。自噬。2015;11:1408–1424.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Alba R.、Bradshaw A.C.、Parker A.L.、Bhella D.、Waddington S.N.、Nicklin S.A.、Rooijen N.v.、Custers J.、Goudsmit J.、Barouch D.H.腺病毒血清型5己糖上凝血因子(F)X结合位点的鉴定:诱变对FX相互作用和基因转移的影响。基因疗法。2011;114:965–971.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Avirutnan P.、Fuchs A.、Hauhart R.E.、Somnuke P.、Youn S.、Diamond M.S.、Atkinson J.P.黄病毒非结构蛋白NS1对补体成分C4的拮抗作用。2010年《实验医学杂志》;207:793–806.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Bai M.、Campisi L.、Freimuth P.Vitronectin受体抗体通过腺病毒12型而非腺病毒2型抑制HeLa和A549细胞的感染。J.维罗尔。1994;68:5925–5932.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Bergelson J.M.、Cunningham J.A.、Droguett G.、Kurt-Jones E.A.、Krithivas A.、Hong J.S.、Horwitz M.S.、Crowell R.L.、Finberg R.W.分离柯萨奇B病毒和腺病毒2和5的共同受体。科学。1997;275:1320–1323.-公共医学